王 寧 左 堅 安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校（241000）

不同產地白術中主要化學成分的含量比較

王 寧 左 堅 安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校（241000）

白術；指紋圖譜；毛細管電泳；產地

白術（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）為菊科植物白術（Atractylodes macrocephala koedz.）的干燥根莖。始載于《神農本草經》，在我國有著悠久的使用歷史，具有補脾、益胃、燥濕、和中的功效。傳統(tǒng)主產于浙江盤安、新昌、嵊縣，安徽歙縣、黃山、寧國一帶。全國20多個省(自治區(qū))有栽培、少有野生[1]。目前，對于白術的成分研究證實，其主要含有親脂性的萜類成分，其中蒼術酮含量最高，而白術內酯活性較高，作為白術品質比較的主要客觀條件?，F針對主要白術產區(qū)的樣品中的蒼術酮和白術內酯I的含量進行測定比較，以期對于不同產地的白術品質差異作出初步判斷[2]。

1 儀器和材料

彩陸高效毛細管電泳色譜儀（北京彩陸科學儀器公司），開口50μm內徑石英毛細管（河北永年），760CRT紫外可見紫外分光光度計（上海分析儀器公司），HW2000雙通道色譜工作站（上海千譜公司），超聲淸洗儀（昆山），電子分析天平。

硼砂（國產分析純），重蒸餾水（自制），蒼術酮及白術內酯標準品（自制，經HPLC按面積歸一化法分析，純度達99%），白術樣品（產地自采，經安徽中醫(yī)藥高等?？茖W校王寧副教授鑒定為菊科植物白術（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）的干燥根莖，具體來源見表1）。

表1 白術樣品來源

2 實驗方法和結果

2.1 色譜條件 采用區(qū)帶電泳的方式進行分離，選用開口無涂層石英管，分離長度40cm，以50mmol/l的硼酸水溶液為緩沖溶液，分離電壓22KV，分離時間10min，每兩次進樣間隔以緩沖溶液沖洗2min。進樣高度15cm，進樣時間5S。

2.2 樣品液制備方法的確定 毛細管電泳的基本基質為水溶液，故提取溶液以水為主。為防止揮發(fā)性成分的過分散失，提取過程選擇在常溫條件下進行。通過對比，發(fā)現超聲提取效率高于冷浸法。提取20min后，提取液的干燥殘留物和紫外吸光度不再變化。最終確定制備方法為：白術樣品打成粗粉，取1g，以重蒸餾水10ml浸泡30min，后超聲20min，過濾得濾液，再通過微孔濾膜，得樣品液。

2.3 標準品及對照溶液的制備 將白術粉碎后，過20目篩，取4kg，用70%乙醇滲漉，合并乙醇滲漉液，減壓回收乙醇，乙醇浸膏以醋酸乙酯。水處理，棄去水層，經硅膠柱層所，以石油醚(30～60℃)、醋酸乙酯梯度洗脫，反復薄層精制，共得到七個單體化合物。根據熔點和紅外光譜特征，確定蒼術酮及白術內酯I的標準品，分別以HPLC分析，面積積分百分比大于99%。將以上兩種對照品，分別以重蒸餾水，超聲輔助溶解，配制成濃度為0.0514mg/mL和0.0412mg/mL的對照溶液儲備液待用。

2.3 測定波長的確定 將上述樣品濾液及對照品，在190～800nm波長范圍內做全波長掃描，發(fā)現樣品最大吸收波長在200nm附近。而蒼術酮及白術內酯I的紫外最大吸收峰均于220nm處，但在附近波長范圍內均有明顯吸收。考慮到分離度對于測定結果的影響，最終確定以分離良好，信號強度適中的200nm為檢測波長。

2.4 色譜條件的確定 首先嘗試磷酸氫鈉，硼酸水溶液作為緩沖溶液，發(fā)現前者出峰數目少，且不能很好分開，以氫氧化鈉調節(jié)無明顯改善。然后分別采用25mmol/l，50mmol/l，75mmol/l，100mmol/l的硼酸水溶液作為緩沖溶液，以50mmol/l濃度分離效果較好。分離電壓較高時，分離效果較好，但峰過于集中，且電流較大，引起明顯干擾，最后確定22KV為分離電壓。以上述條件分離一個樣品，記錄色譜信息30min，發(fā)現10min內出峰基本完全。采用常規(guī)的高度進樣方式。為減小進樣引起峰形展寬，在保證進樣量的情況下，盡量減少進樣時間，選擇5S。

2.5 方法學考察

2.5.1 穩(wěn)定性試驗 選擇上述蒼術酮及白術內酯I的對照溶液。分別于0，2，4，8，12，24h后測定。以峰的保留時間和積分面積為評價對象，發(fā)現保留時間和積分面積的RSD均不超過3%，平均值分別為1.11%和1.02%。

2.5.2 精密性試驗 選擇蒼術酮及白術內酯I的對照溶液，連續(xù)測定5次，對主要峰面積和保留時間進行計算，發(fā)現RSD值分別介于0.87%～2.03%和1.32%～2.33%之間。

2.5.3 重現性試驗 取5批樣品一，分別制備樣品液并測定，對主要的四個吸收峰的峰面積和保留時間進行計算比較，所得RSD0.55%～2.54%和1.02%～2.31%之間。

2.5.4 線性關系考察 以上述蒼術酮及白術內酯I的對照溶液儲備液，分別稀釋2～5倍，測定5次，以結果獲得線性曲線：蒼術酮Y=32153X+1432.9 r=0.9991,說明蒼術酮測定濃度在0.0123mg/mL～0.0514mg/mL范圍內線性關系良好；白術內酯I Y=41455X-1246.7 r=0.9993,說明白術內酯I測定濃度在0.0082 mg/mL～0.0412 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.5.5 加樣回收率試驗 取5批樣品一，分別加入稀釋5倍的蒼術酮和白術內酯I的對照品儲備液，測定，并計算回收率，結果均介于97%～102%之間。

2.6 色譜圖的獲得和含量測定 將上述各批次樣品及蒼術酮和白術內酯I等量混合的對照品儲備液，利用上述色譜條件分離，并記錄色譜曲線。

件分離，并記錄色譜曲線。

利用標準曲線法（曲線方程見2.5.4），結合色譜數據，計算得出各產地中蒼術酮和白術內酯的含量，見表2。

表2 各產地白術中主要化學成分含量

3 討論

3.1 過比較發(fā)現，皖南地區(qū)品種成分含量均較高，符合傳統(tǒng)道地產區(qū)的地位，與鄰近的浙江地區(qū)品質相近，而略有優(yōu)勢。但仍可看出該地區(qū)具體產地間差異仍較大，且不穩(wěn)定，這主要與當地野生環(huán)境等不確定性因素有關。相比而言，皖北地區(qū)的亳州產白術雖然品質相對較差，但比較均一，質量穩(wěn)定。這主要是因為當地的白術均為人工種植。從外觀看，亳州產白術粗大，產量較高。故認為，人工種植可以提高白術的產量，并獲得較為穩(wěn)定的產品質量。應加強在優(yōu)質種質產地的研究，推廣優(yōu)良品種的人工栽培種植。

3.2 白術中的生理活性物質目前認為主要是親脂性成分，但單純以個別萜類物質的含量評價品質優(yōu)劣尚不全面，因為傳統(tǒng)應用中大多為水煎，親脂性成分溶出有限，故下最后論斷還需要進一步深入研究。

3.3 高效毛細管電泳色譜法操作簡便，快速，不需要大量色譜純溶劑。且由于樣品液沒有經過預處理，最大限度地節(jié)省了人力和財力成本，值得推廣應用。

[1] 肖培根.新編中藥志(第一卷)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2002:323.

[2] 周克瑜,許長照.白術地道藥材和栽培品的化學成分對比研究[J].南京中醫(yī)藥大學學報(自然科學版),2000,16(2):109-110.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.175

1672-2779（2010）-18-0239-02

安徽省教育廳自然科學研究項目。

2010-06-15）