李 慧,雒文彬

(1.吉林省吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 口腔科,吉林吉林 132012;2.廷邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2006級(jí),吉林延吉 130000)

Endostatin、bFGF在舌鱗癌中的表達(dá)及臨床意義

李 慧1,雒文彬2

(1.吉林省吉林中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 口腔科,吉林吉林 132012;2.廷邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2006級(jí),吉林延吉 130000)

目的本研究檢測(cè)血管內(nèi)皮抑素(Endostatin)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)在人類舌鱗癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法收集34例臨床和病理完整的舌鱗癌組織采用免疫組化S-P法檢測(cè)Endostatin、bFGF的表達(dá)水平。結(jié)果根據(jù)舌鱗癌組有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Endostatin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為50.0%,81.8%,bFGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為91.7%,59.1%,均有顯著差異(P＜0.05)。舌鱗癌組織中Endostatin、bFGF表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.385,P＜0.025)。結(jié)論Endostatin和bFGF在舌鱗癌組織腫瘤血管生成過程中是重要的調(diào)節(jié)因子,二者消長(zhǎng)關(guān)系可能關(guān)系到腫瘤生物學(xué)行為的發(fā)生發(fā)展。

舌鱗癌;血管內(nèi)皮抑素;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子;免疫組化

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0859)

舌鱗癌的早期診斷并對(duì)其浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移進(jìn)行監(jiān)測(cè)在臨床上非常重要。血管形成是實(shí)體瘤增殖和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟,這一過程依賴于內(nèi)源性促進(jìn)因子和抑制因子之間的平衡。近年來(lái)倍受關(guān)注的血管內(nèi)皮抑素(Endostatin)是內(nèi)源性新血管生成抑制因子,堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)是腫瘤血管形成的促進(jìn)因子,本研究通過檢測(cè)Endostatin、bFGF在舌鱗癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系,探討它們?cè)谏圜[癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相互關(guān)系,為舌鱗癌轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療提供有參考價(jià)值的分子生物學(xué)指標(biāo)

1 材料和方法

1.1 病例選擇

收集2008年2月至2009年2月在病理科存檔的舌鱗狀細(xì)胞癌根治術(shù)后的歸檔蠟塊34例,具有完整的病史、病理數(shù)據(jù),術(shù)前均未接受過放化治療?；颊吣挲g在36-84歲之間,中位年齡56.5歲。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例;鱗癌分化程度:低分化5例,中分化15例,高分化14例。由兩位病理學(xué)副教授協(xié)助作病理學(xué)診斷和病理學(xué)分級(jí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將10%福爾馬林固定、石蠟包埋的組織蠟塊,做常規(guī)病理切片,經(jīng)免疫組化染色,根據(jù)每一種抗體的要求,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。將切片浸入0.01M(pH6.0)枸櫞酸鹽緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔 5-10 min后,反復(fù)1-2次,冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。用已知的陽(yáng)性口腔癌切片作陽(yáng)性對(duì)照,用已知的陰性的口腔癌切片作陰性對(duì)照,以PBS緩沖液代替一抗作空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)及方法

1.3.1 Endostatin蛋白的陽(yáng)性結(jié)果判定 Endostatin蛋白為胞漿著色,陽(yáng)性判斷采用半定量標(biāo)準(zhǔn),即根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積積分之和來(lái)判斷[1]。染色強(qiáng)度積分為:不染色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;染色面積分為:無(wú)細(xì)胞染色為0分,＜25%細(xì)胞染色為1分,25%-50%細(xì)胞染色為2分,＞50%細(xì)胞染色為3分。若兩者積分之和＞2則為Endostatin表達(dá)陽(yáng)性,≤2則為Endostatin表達(dá)陰性。

1.3.2 bFGF蛋白的陽(yáng)性結(jié)果判定 bFGF蛋白主要定位在腫瘤細(xì)胞的胞漿,呈黃色或棕黃色,判斷采用許良中的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[2],陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)弱:0分為無(wú)著色,1分為淡黃色,2分為棕黃色,3分為棕褐色。陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比:0分為陰性,1分為10%,2分為11%-50%,3分為＞50%。若兩者積分之和＞2則為bFGF表達(dá)陽(yáng)性,≤2則為bFGF表達(dá)陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析;Endostatin、bFGF與各臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn),Endostatin、bFGF表達(dá)之間的關(guān)系采用配對(duì)四格表資料的關(guān)聯(lián)性分析,P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 舌鱗癌Endostatin表達(dá)

34例不同分化程度舌鱗癌Endostatin的表達(dá)無(wú)顯著性差異。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中Endostatin陽(yáng)性表達(dá)率50.0%,與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率81.8%相比,有顯著性差異,χ2=3.876,P＜0.05(見表1)。

表1 舌鱗癌Endostatin的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.2 舌鱗癌bFGF的表達(dá)

34例不同分化程度舌鱗癌bFGF的表達(dá)無(wú)顯著性差異,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組bFGF陽(yáng)性表達(dá)率91.7%,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組bFGF陽(yáng)性表達(dá)率59.1%,二組相比有顯著性差異,χ2=3.969,P＜0.05(見表2)。

表2 舌鱗癌bFGF的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.3 Endostatin、bFGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性

34例舌鱗癌組織中,Endostatin、bFGF蛋白表達(dá)情況見表3。經(jīng)配對(duì)四格表資料的關(guān)聯(lián)性分析,χ2=5.903,P＜0.025,表明兩種方法的結(jié)果存在關(guān)聯(lián)性,進(jìn)一步計(jì)算pearson列聯(lián)系數(shù),rs=-0.385,兩者呈負(fù)相關(guān)。

表3 舌鱗癌中Endostatin與bFGF表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

內(nèi)皮抑素(Endostatin)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第二種內(nèi)源性血管形成抑制劑。Endostatin是由成血管內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤分泌,可引起內(nèi)皮細(xì)胞G1期停滯,從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖;同時(shí)還可減少Bcl-2、Bcl-xl抗凋亡蛋白的量[3]。梁朝斌等[4]觀察Endostatin在人口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn),Endostatin的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切相關(guān),和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比,Endostatin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)明顯降低。本研究表明,12例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中Endostatin陽(yáng)性表達(dá)6例,陽(yáng)性表達(dá)率50.0%,與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率81.8%相比,有顯著性差異P＜0.05。因此,檢測(cè)舌鱗狀細(xì)胞癌組織內(nèi)皮抑素的表達(dá)有助于預(yù)測(cè)舌鱗狀細(xì)胞癌的惡性行為和研究其在侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。

bFGF屬于FGF家族,是一類對(duì)中胚層及神經(jīng)胚層來(lái)源的細(xì)胞具有強(qiáng)烈的促進(jìn)增殖和分化的有多種生物活性的多肽類細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子。腫瘤細(xì)胞分泌的bFGF數(shù)量不斷增加,并顯著提高異常分裂的細(xì)胞形成腫瘤并具有轉(zhuǎn)移能力[5]。國(guó)內(nèi)張陽(yáng)德[6]采用原位雜交方法檢測(cè)55例大腸癌中bFGF-mRNA的表達(dá)情況,陽(yáng)性表達(dá)率67.8%,明顯高于正常組織.趙仲生[7]等用原位雜交的方法測(cè)出了胃癌組織中bFGF-mRNA的高表達(dá)。我們的研究結(jié)果也有類似的發(fā)現(xiàn):bFGF主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿,呈棕色或黃色。因而,檢測(cè)bFGF在舌鱗癌的表達(dá)情況對(duì)臨床判斷腫瘤惡性程度,估計(jì)預(yù)后有著重要意義。

在由bFGF作為外來(lái)刺激物誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移實(shí)驗(yàn)中,bFGF與Endostatin發(fā)揮抑制血管生成的作用具有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系即Endostatin發(fā)揮抑制血管生成的作用明顯降低[8]。Endostatin借助結(jié)構(gòu)中的肝素結(jié)合部位,與bFGF競(jìng)爭(zhēng),從而阻斷有絲分裂生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳導(dǎo)和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng),繼而抑制血管的生成[10]。本研究對(duì) Endostatin和bFGF蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了相關(guān)性分析,結(jié)果表明二者表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.385,P＜0.025),提示在舌鱗癌的抗血管生成治療中,通過下調(diào)腫瘤組織內(nèi)bFGF的表達(dá)和/或通過局部或全身應(yīng)用Endostatin對(duì)延緩進(jìn)展期舌鱗癌的發(fā)展、改善腫瘤患者的愈后可能具有一定的作用。

綜上所述,Endostatin和bFGF在舌鱗癌組織腫瘤血管生成過程中是重要的調(diào)節(jié)因子,二者消長(zhǎng)關(guān)系可能關(guān)系到舌鱗癌腫瘤生物學(xué)行為的發(fā)生發(fā)展,從而為舌鱗癌轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療提供有參考價(jià)值的分子生物學(xué)指標(biāo)。

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The Study on the Expression and Clicinal Significance of Endostatin、bFGF in Oral Squamous Cell Carcinoma

LI Hui1,LUO Wen-bin2.(1.Department of Oral Cavity,the Hospital of Combination of TCM With Western,Jilin132012,China;2.Medical College of Yambian Universibty,Yanji130000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of Endostatin、bFGF in Oral Squamous Cell Carcinoma(OSCC)tissue and their interaction with clinical pathological characteristics.MethodsThirty-four resected specimens of patients undergoing surgery for OSCC were collected.Immunohistochemical staining was used for detecting the expression of Endostatin、bFGF.ResultsAccording to the status of lymphnode metastasis the positive rates of Endostatin were 50.0%,81.8%,the positive rates of bFGF were 91.7%,59.1%.ConclusionEndostatinand bFGF are both important regulators in the processof angiogenesis inOSCC.It suggested that there was a regularly alteration between promoters and inhibitors in OSCC angiogenesis.

oral squamous cell carcinoma;endostatin;basic fibroblast growth factor;immunohistochemistry

R739.86

A

1007-4287(2010)06-0859-03

吉林市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)2009087)

李慧(1971-),女,本科,學(xué)士學(xué)位,副主任醫(yī)師,研究方向:口腔疾病診斷與治療。

2009-05-29)