李巖偉,楊鳳寶,宋立華,馬桂花,朱 虹,端 青

2.寧夏回族自治區(qū)鹽池縣灘羊選育場(chǎng);

3.寧夏回族自治區(qū)鹽池縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心

鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫羊抗體產(chǎn)生動(dòng)力曲線(xiàn)*

李巖偉1,楊鳳寶2,宋立華1,馬桂花3,朱 虹1,端 青1

目的觀(guān)察鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫羊后產(chǎn)生的動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)。方法 用不同劑量鸚鵡熱衣原體主要外膜蛋白基因工程亞單位疫苗免疫綿羊,免疫前及免疫后不同時(shí)間采血檢測(cè)抗體情況,觀(guān)察綿羊抗體的產(chǎn)生和變化水平。結(jié)果 免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點(diǎn)注射,具有良好的免疫效果。結(jié)論 鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點(diǎn)注射,在綿羊整個(gè)妊娠期內(nèi)具有保護(hù)作用。

衣原體亞單位疫苗;免疫;動(dòng)力曲線(xiàn)

2.寧夏回族自治區(qū)鹽池縣灘羊選育場(chǎng);

3.寧夏回族自治區(qū)鹽池縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心

鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci,Cps)是造成羊地方性流產(chǎn)的主要病原菌之一,首次感染Cps的受孕綿羊和山羊的流產(chǎn)率分別高達(dá)30%和70%,給許多國(guó)家畜牧業(yè)造成重大損失〔1〕。我國(guó)禽類(lèi)和畜類(lèi)Cps感染也十分嚴(yán)重,我們自1989年以來(lái)多次為北京地區(qū)雞場(chǎng)、種雞場(chǎng)、兔場(chǎng)和進(jìn)口病羊診斷Cps感染。我國(guó)引種頻繁的集約化飼養(yǎng)畜禽場(chǎng)的Cps感染率在8%～50%之間,發(fā)生過(guò)感染的畜禽場(chǎng)中,動(dòng)物群的流產(chǎn)率和死胎率遠(yuǎn)高于安全場(chǎng)。另外,近年來(lái)從國(guó)外引進(jìn)的動(dòng)物種群攜帶并感染有Cps的已有多起報(bào)道。因此,Cps感染以及局部爆發(fā)流行已對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)形成嚴(yán)重威協(xié),爆發(fā)流行時(shí)經(jīng)濟(jì)損失慘重,已成為國(guó)內(nèi)外人獸共患病研究的重要課題。

疫苗研究一直是預(yù)防病原感染的重要手段,基因工程亞單位疫苗由于其安全,容易大規(guī)模生產(chǎn),而越來(lái)越受到人們的青睞。Cps主要外膜蛋白(MOMP)是種特異性抗原,通過(guò)基因工程表達(dá)的rCps-MOMP具有良好的免疫原性〔2〕,并對(duì)小鼠和肉雞顯示了良好的免疫保護(hù)作用〔3-4〕。

本實(shí)驗(yàn)將我們自主研制的rCps-MOMP制成亞單位疫苗,于配種前免疫母羊,觀(guān)察疫苗的安全性和相關(guān)抗體產(chǎn)生及其變化規(guī)律。

1 材料方法

1.1 動(dòng)物 12月齡雌性綿羊34只,品種為多賽特和小尾寒羊雜交1代,由北京市門(mén)頭溝種羊場(chǎng)提供。

1.2 疫苗 rCps-MOMP(0.25mg/mL)與白油乳化亞單位疫苗,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所研制。

1.3 試劑 鸚鵡熱抗體快速檢測(cè)試劑(膠體金法),軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所研制。

1.4 免疫 rCps-MOMP免疫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及免疫劑量見(jiàn)表1。動(dòng)物在配種前25d進(jìn)行頸部肌肉多點(diǎn)注射免疫,高劑量組僅免疫1次,中劑量和低劑量組動(dòng)物在第1次免疫80d后加強(qiáng)免疫1次,免疫劑量和途徑同前。

表1 rCps-MOMP免疫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及免疫劑量Table 1 Groups and doses of experimental animalsvaccinated rCps-MOMP

1.5 血清抗體檢測(cè) 分別在免疫前和第一次免疫后 14d 、30 d、60 d 、90 d、120 d 、150 d 和 180 d 采血 ,分離收集血清。血清抗體滴度檢測(cè)按照試劑使用說(shuō)明操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 抗體水平采用抗體稀釋度的對(duì)數(shù)表示,不同劑量組和不同免疫時(shí)間的抗體水平采用10只綿羊抗體水平的平均值,用(±s)表示。選用能處理具有一個(gè)重復(fù)測(cè)量?jī)梢蛩卦O(shè)計(jì)定量資料的方差分析處理數(shù)據(jù),在SAS軟件中操作。

2 結(jié) 果

2.1 rCps-MOMP亞單位疫苗的安全性 rCps-MOMP亞單位疫苗免疫動(dòng)物后,免疫部位未見(jiàn)紅腫和結(jié)節(jié),飲食和精神狀況良好,受孕正常,無(wú)不良反應(yīng),說(shuō)明疫苗是安全的。

2.2 rCps-MOMP亞單位疫苗免疫羊抗體產(chǎn)生的動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn) 免疫前實(shí)驗(yàn)組綿羊Cps抗體檢測(cè)均為陰性,對(duì)照組綿羊每次采血檢測(cè)Cps抗體均為陰性。各劑量免疫組動(dòng)物不同時(shí)間抗體平均水平作圖1～3。從圖1可以看出,高劑量組動(dòng)物抗體在免疫后27～28d達(dá)到最高水平,平均效價(jià)為1∶8 000,之后慢慢降低,60d后進(jìn)入平臺(tái)期,仍維持在較高的抗體水平(1∶2 000以上),個(gè)別綿羊270d還能檢測(cè)到1∶100的抗體;中劑量組動(dòng)物抗體在免疫后14d達(dá)到最大值1∶400,之后迅速降低,80d加強(qiáng)免疫后,其抗體最高水平仍低于14d最大值,在分娩前抗體水平已降至1∶10以下;低劑量組動(dòng)物抗體在免疫后14d抗體水平達(dá)到最大值1∶80,明顯低于其他兩組,加強(qiáng)免疫后抗體水平仍沒(méi)有提高,且降低迅速,分娩前30d大部分動(dòng)物抗體檢測(cè)陰性。以上結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各免疫劑量組之間的動(dòng)物抗體平均水平差異顯著(P＜0.005),高劑量組動(dòng)物的抗體水平達(dá)到了良好的免疫效果。

3 討 論

預(yù)防Cps感染最好的辦法是免疫接種,最初的Cps疫苗是從接種的雞胚中提取并滅活的Cps菌體疫苗,這種疫苗雖然也能起到一定的保護(hù)作用,但存在許多弊端,如不易大規(guī)模生產(chǎn)、成本高不易推廣、存在變態(tài)反應(yīng)原等。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Cps-MOMP具有良好的免疫保護(hù)性,以其為基礎(chǔ)研制基因工程亞單位疫苗的實(shí)驗(yàn)已在一些國(guó)家開(kāi)展〔5〕。

本實(shí)驗(yàn)用不同劑量rCps-MOMP亞單位疫苗于配種前25d免疫母羊,觀(guān)察不同時(shí)間抗體產(chǎn)生水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點(diǎn)注射,動(dòng)物抗體滴度于免疫后27～28d達(dá)到最高水平,平均效價(jià)為1∶8 000,之后慢慢降低,60d后進(jìn)入平臺(tái)期,仍維持在較高的抗體水平直至分娩,顯示了良好的免疫效果。

〔1〕Rodolakis A.Les infections àChlamy dia psittaci:acquisitions récentes et applications au diagnostic et à l' é pidémiologie des chlamydioses aviaires,canines et felines〔J〕.Prat Mé d Chir Anim Comp,1993,28(3):321-330.

〔2〕劉向偉,張浩杰,王效義,等.重組鸚鵡熱衣原體主要外膜蛋白的抗原性研究〔J〕.生命科學(xué)研究,2002,3(6):267-269.

〔3〕朱虹,張浩杰,何君,等.鸚鵡熱衣原體重組主要外膜蛋白誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的觀(guān)察〔J〕.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展,2003,31(3):35-36.

〔4〕郝永新,何誠(chéng),趙德明,等.鸚鵡熱衣原體重組主要外膜蛋白誘導(dǎo)肉雞免疫應(yīng)答觀(guān)察〔J〕.中國(guó)人獸共患病雜志,2004,20(12):1065-1067.

〔5〕Longbottom D,Living stone M.Vaccination against chlamydial infections of man and animals〔J〕.Vet J,2006,171:263 – 275.

Kinetics curve of antibody responses in ewes immunized with subunit vaccine of genetically engineeredChlamydia psittaci

LI Yan-wei,YANG Feng-bao,SONG Li-hua,MA Gui-hua,ZH U Hong,DUAN Qing
(State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing100071,China)

This study analyzed antibody responses in ewes vaccinated with three different doses of major outer-membrane protein subunit vaccine from genetically engineeredChlamydia psittaci.Sera of ewes were detected before vaccination and at different times post-vaccination.Experimental results indicated that multilocus intramuscular injection in the neck region with dose of 0.5 mg per ewe could stimulate good immune response.

chlamydial subunit vaccine;immune;kinetic curve

R374

A

1002-2694(2010)09-0835-02

*艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治(2008ZX10004-003)

端青,Email:duanq@nic.bmi.ac.cn

1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100071;

2010-03-28;

2010-06-18