劉 峰 ，張 進(jìn) ，劉 毅

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙410128；2.湖南出入境檢驗(yàn)檢疫局，湖南長沙410004；3.長沙市動(dòng)物防疫監(jiān)督站，湖南長沙410013）

豬大腸桿菌病是豬場中由病原性大腸桿菌引起的主要危害仔豬生長發(fā)育的一種常見病和多發(fā)病。本病在仔豬的臨診表現(xiàn)也有不同，主要有黃痢型、白痢型和水腫型。本病的發(fā)病范圍不斷增廣、發(fā)病率不斷升高、病死率逐漸上升，已逐漸由條件性致病變成一種新的背景性常發(fā)病和多發(fā)病。豬群中大腸桿菌病的發(fā)病率已達(dá)到60%以上，其中仔豬黃痢的發(fā)病率高達(dá)25%以上，仔豬白痢的發(fā)病率也將近90%，仔豬水腫病的發(fā)病率達(dá)15%。仔豬黃痢的死亡率超過56%；仔豬白痢的死亡率超過20%；水腫病的死亡率超過90%。隨著抗菌藥物的不斷應(yīng)用，細(xì)菌中的耐藥菌株數(shù)量也在不斷的增加，目前，耐藥性的問題已非常嚴(yán)重，應(yīng)用常規(guī)藥物和常規(guī)方法防治豬大腸桿菌病的難度越來越大。引起豬大腸桿菌病的大腸桿菌經(jīng)典的血清型主要是K88、K99和987P三種血清型。但由于大腸桿菌的腸毒素才是大腸桿菌引起人類和動(dòng)物腹瀉的最主要因素，腸毒素質(zhì)粒和耐藥性質(zhì)粒能經(jīng)結(jié)合配對傳遞給其他腸道細(xì)菌，使這些細(xì)菌成為能產(chǎn)腸毒素并具有耐藥性的致病菌，也就是說，腸毒素質(zhì)粒和耐藥性質(zhì)能經(jīng)結(jié)合配對后，便可傳遞給其他菌毛血清型的大腸桿菌甚至傳遞給其他非大腸桿菌腸道細(xì)菌。可以說，如今的病原性大腸桿菌的血清型越來越復(fù)雜，不同地區(qū)有不同的血清型甚至不同豬場都有可能有不同血清型。

1 研究新抗生素

近年國內(nèi)外針對大腸桿菌病的新抗生素研究主要集中在新抗生素的篩選、抗生素產(chǎn)生菌的遺傳育種與生物合成、抗生素的分離純化與產(chǎn)品結(jié)構(gòu)修飾、抗生素產(chǎn)品的分析檢測與質(zhì)量監(jiān)控、抗生素的藥理與臨床研究等五個(gè)方面。（1）新抗生素（新抗）的篩選包括新抗的來源和篩選的方法兩個(gè)方面的內(nèi)容。新抗的來源一是微生物，如運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)可從土壤中的細(xì)菌、真菌、放線菌、稀有菌類中尋找，也可從海洋中的真菌、細(xì)菌、放線菌、稀有菌類中尋找，前者應(yīng)在菌類的分離培養(yǎng)方法上多下工夫，后者也需要多摸索分離方法及培養(yǎng)條件；二是從基因中尋找新抗，利用土壤多源基因組技術(shù)或海洋微生物基因組技術(shù)，把未培養(yǎng)微生物的基因提取出來，經(jīng)處理后克隆到載體中，再在宿主中進(jìn)行表達(dá)，從而獲得結(jié)構(gòu)新穎的先導(dǎo)化合物。新抗的篩選方法還有的采用虛擬篩選方法，即利用計(jì)算機(jī)技術(shù)，采用三維藥效模型，以搜尋或分子對接的方法，從化合物庫中尋找可能的活性化合物。虛擬篩選后再做生物活性測試，命中率大大提高。（2）抗生素的遺傳育種與生物合成。對于抗生素的遺傳育種，研究最多的是拮抗自身代謝產(chǎn)物、拮抗前體物質(zhì)、拮抗結(jié)構(gòu)類似物等，也有采用多因子復(fù)合誘變來提高目的產(chǎn)物效價(jià)的。但利用基因工程手段進(jìn)行遺傳育種工作，包括基因克隆、基因重組、基因置換、基因中斷等技術(shù)，進(jìn)展不大。在生物合成方面，自動(dòng)控制發(fā)酵罐研究有一定進(jìn)展，自動(dòng)控制發(fā)酵罐各種參數(shù)的在線變化是微生物在這種生態(tài)系統(tǒng)中，內(nèi)在生理活動(dòng)與外在環(huán)境相互作用的一種信息，目前，還需反復(fù)推敲、理解這些信息的真正意義并將其與要解決的問題聯(lián)系起來進(jìn)行調(diào)控，才能達(dá)到提高效價(jià)的目的。（3）抗生素的分離純化與產(chǎn)品結(jié)構(gòu)修飾。抗生素、微生物藥物產(chǎn)品的質(zhì)量、收率與分離純化的方法、手段和技術(shù)水平密切相關(guān)。膜技術(shù)是近年發(fā)展最快的一種分離純化手段和技術(shù)。一般從發(fā)酵液分離純化抗生素主要有萃取、吸附和結(jié)晶三個(gè)單元操作，溶液中的生物高分子和懸浮固體雜質(zhì)影響著這三種分離純化的收率和產(chǎn)品純度。對于抗生素產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)修飾，我國對β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類等品種的仿制工作已做了多年，但還不能自主創(chuàng)新。（4）抗生素的分析檢測和質(zhì)量監(jiān)控。國內(nèi)對注射用抗生素各種鹽類的研究較多，已有鹽類發(fā)現(xiàn)有不足的地方，鹽類應(yīng)有足夠的溶解；所制的水溶液pH值應(yīng)符合注射劑的要求，且較穩(wěn)定；臨床應(yīng)用全身及局部毒性應(yīng)較小。（5）抗生素的藥理與臨床研究。

2 應(yīng)用中藥進(jìn)行防治

王自然采用中藥茜草秧、苦參等13味中藥組方對人工感染仔豬大腸桿菌引起的腹瀉及自然發(fā)病的仔豬進(jìn)行了治療試驗(yàn),結(jié)果治愈率達(dá)90%以上,有效率達(dá)100%。同時(shí)探討了中藥組方對仔豬大腸桿菌耐藥菌株和非耐藥菌株所致腹瀉癥的治療效果。馬玉芳等選擇了幾種中草藥,配制成名為“白痢散”的制劑，并進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)、預(yù)防試驗(yàn)和治療試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明:“白痢散”在平板對分離的致病性大腸桿菌的平均抑菌圈直徑為12.5 mm；預(yù)防試驗(yàn)中,2處理組分別獲得90.0%和81.3%的保護(hù)率,效果顯著。胡松華等進(jìn)行了公英瀉痢殺對仔豬腹瀉的臨床治療試驗(yàn)及體外抑菌試驗(yàn).臨床試驗(yàn)結(jié)果表明:公英瀉痢殺和痢菌凈對哺乳仔豬腹瀉的臨床治愈率分別為100%和81.25%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析兩者差異顯著。由此可見,中藥對致病性大腸桿菌具有一定的抑制效果,可作為防治豬大腸桿菌病的一種理想藥物；使用中藥對豬場也有明顯的經(jīng)濟(jì)收益，但中藥味苦，對豬的采食量有一定的影響，且中藥見效慢。

3 應(yīng)用益生菌進(jìn)行預(yù)防

微生態(tài)制劑是指由許多有益微生物及其代謝物構(gòu)成、可以直接飼喂動(dòng)物的活菌制劑，它具有無副作用、無殘留污染、不產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)，具有抗病、治病、促生長等多種功能。國內(nèi)外常用的微生態(tài)制劑菌種主要有：乳酸酐菌、雙歧桿菌、鏈球菌、芽胞桿菌、放線菌、光合菌、酵母菌等。據(jù)劉勇等報(bào)道，在35日齡斷奶仔豬日糧中添加0.2%～0.4%的微生態(tài)活菌制劑，可使糞中大腸桿菌總數(shù)明顯降低。微生態(tài)與飼料添加劑的結(jié)合方面，盡管開發(fā)了一些有價(jià)值的產(chǎn)品，但在產(chǎn)品應(yīng)用方面存在較大困難，如活菌制劑穩(wěn)定試較差，易在飼料生產(chǎn)工藝中被破壞；產(chǎn)品種類單一，應(yīng)用范圍有限；效果不穩(wěn)定等。由于微生態(tài)結(jié)構(gòu)極其復(fù)雜，試圖用一兩種微生態(tài)制劑來解決十幾種抗生素尚未能解決的問題是不可能的。

4 研究耐藥質(zhì)粒消除劑

細(xì)菌耐藥性是受染色體和（或）質(zhì)粒上的基因控制。染色體型耐藥性是在抗菌藥物的存在或不存在的條件下，由某種細(xì)菌自發(fā)突變產(chǎn)生的，這種情況較少見而且只對某一特定的抗菌素產(chǎn)生耐藥性。大多數(shù)細(xì)菌的耐藥性屬質(zhì)粒型耐藥性，它由R質(zhì)?？刂啤質(zhì)粒能自行復(fù)制并具有垂直傳播和橫向傳遞的特點(diǎn)，這是造成耐藥菌株逐年增多、廣泛存在的主要原因。有研究表明R質(zhì)粒的垂直傳播具有一定的穩(wěn)定性并且R質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化并不見得受質(zhì)粒的分子量的大小限制。因此，藥敏試驗(yàn)對解決耐藥性問題只能是權(quán)宜之計(jì)。有報(bào)道耐藥質(zhì)?？梢韵@對解決耐藥性問題有非同尋常的意義，如果找到了一種理想的耐藥質(zhì)粒消除劑和抗菌素制成復(fù)方制劑就等于抗菌素的再生。但目前還沒有效果令人滿意的消除劑，以及在實(shí)踐中應(yīng)用的有效方法還須進(jìn)一步進(jìn)行研究。

5 研制大腸桿菌疫苗

目前我國應(yīng)用的豬大腸桿菌疫苗主要有二類：三價(jià)全價(jià)滅活苗和二價(jià)基因工程苗。由于病原性大腸桿菌的血清型越來越多，因此上述疫苗的免疫保護(hù)面過窄,固不能達(dá)到令人滿意的效果。大腸桿菌自家苗是將從本場分離得到的優(yōu)勢致病大腸桿菌菌株利用免疫學(xué)原理生產(chǎn)出的滅活佐劑苗，用于預(yù)防正在本場發(fā)生的豬的大腸桿菌病。用大腸桿菌自家苗預(yù)防豬大腸桿菌病有如下優(yōu)點(diǎn)：針對性強(qiáng)，因?yàn)檫@是用本場發(fā)病菌株制備的疫苗，所以制苗菌株的血清型和抗原性和發(fā)病菌株的抗血清型和原性高度一致。因而可以克服由標(biāo)準(zhǔn)菌株制備的疫苗所存在的免疫保護(hù)面過窄的弱點(diǎn)。安全性好，由于大腸桿菌自家苗為滅活苗。其中的病原微生物已經(jīng)完全、徹底滅活，所以不存在散毒的危險(xiǎn)。對抗菌素有協(xié)同作用，其協(xié)同作用主要有兩方面。一則為接種疫苗后，如仍有少數(shù)豬發(fā)病，這時(shí)用抗菌藥物治療，治療效果較未接種的發(fā)病豬的治療效果要好；二則為對發(fā)病豬可同時(shí)接種疫苗和用抗均藥物治療，治療效果比單獨(dú)用抗菌藥物治療的治療效果要好。

6 研制抗體藥物

初生仔豬和早期斷奶仔豬自身免疫功能的不成熟以及早期斷奶應(yīng)激引起的免疫抑制，是造成仔豬對ETEC敏感性增高、抗病力下降，并引發(fā)ETEC感染性腹瀉的主要因素。利用外源抗體為仔豬提供被動(dòng)免疫從而預(yù)防和治療腸道致病性大腸桿菌感染引起的疾病的研究證明了外源性抗體的有效作用。其中，雞卵黃抗體因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、特異性抗體含量高、安全性好、易規(guī)?；a(chǎn)等特點(diǎn)，而越來越受到人們的注意。根據(jù)抗原的制備方式，預(yù)防仔豬大腸桿菌性腹瀉卵黃抗體的生產(chǎn)方式可以分為兩類：一類是直接用ETEC的菌體免疫原，而另一類則是將經(jīng)分離純化后的菌毛蛋白作為免疫原。

王建明等用 ETEC K88、K99、987P、F41標(biāo)準(zhǔn)菌株制成的滅活油佐劑作為免疫原，待產(chǎn)蛋雞免疫后收集高免卵黃，然后提取、純化，精制成雞抗豬大腸桿菌特異性高免卵黃抗體并用于臨床。結(jié)果表明該制劑安全性好，每頭仔豬注射或口服3～5mL劑量，能有效預(yù)防仔豬大腸桿菌性腹瀉。而徐福洲等作了相樣的試驗(yàn)，結(jié)果顯示治療仔豬腹瀉狀況明顯減輕，與對照組相比有顯著差異；治療組未出現(xiàn)死亡而對照組仔豬有35%～70%的死亡率。結(jié)果表明，卵黃抗體治療由ETEC所致的仔豬腹瀉具有明顯的效果。在選擇試驗(yàn)菌株時(shí)，大部分人選用標(biāo)準(zhǔn)菌株，也有一些研究者選用地方株。高云英等應(yīng)用仔豬大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和地方分離菌株混合免疫商品蛋雞，收獲高免蛋制備多價(jià)卵黃抗體。經(jīng)預(yù)防、攻毒試驗(yàn)及臨床治療效果觀察,對仔豬免疫保護(hù)率可達(dá)95%以上，攻毒保護(hù)率90%以上，臨床治愈率80%以上。

7 應(yīng)用抗體藥物

由于仔豬通常通過乳汁感染大腸桿菌，往往來不及對仔豬進(jìn)行大腸桿菌疫苗免疫接種，即使接種，仔豬也來不及產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答來抵抗致病性大腸腸桿菌的感染，這是目前仔豬大腸桿菌病流行的重要原因之一。又因?yàn)楦腥咀胸i的大腸桿菌耐藥性及抗菌藥物對仔豬的毒副作用，應(yīng)用外源抗體對仔豬被動(dòng)免疫從而預(yù)防和治療仔豬大腸桿菌病具有較強(qiáng)的可行性和可操作性。在眾多外源性大腸桿菌抗體中，雞卵黃抗體因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、特異性抗體含量高、安全性好、易規(guī)?；a(chǎn)等特點(diǎn)充分凸顯其應(yīng)用價(jià)值而備受重視。預(yù)防仔豬大腸桿菌性腹瀉卵黃抗體的生產(chǎn)方式根據(jù)免疫抗原不同可以分為兩類：一類是直接用致病性大腸桿菌全菌作為免疫原，另一類則是純化的致病性大腸桿菌的菌毛蛋白作為免疫原。這兩種方式制備的大腸桿菌卵黃抗體對仔豬大腸桿菌病的療效優(yōu)良，顯示出良好的應(yīng)用前景。 □

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