宋更申，郭毅，付焱，閆凱（.河北省藥品檢驗(yàn)所，石家莊市0500；.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，石家莊市 05007）

鹽酸美金剛（Memantine hydrocloride），化學(xué)名稱(chēng)為1-氨基-3，5-二甲基三環(huán)癸烷鹽酸鹽，臨床上主要用于治療帕金森病。鹽酸美金剛原料藥在合成過(guò)程中，使用了乙醇、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，前3種有機(jī)溶劑均可在氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）上得到良好的靈敏度；而三氯甲烷在上述檢測(cè)器上靈敏度低，無(wú)法準(zhǔn)確定量。因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)上含有鹵原子，選用電子捕獲檢測(cè)器（ECD）后靈敏度可顯著提高。人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[1]和《中國(guó)藥典》2005年版[2]均規(guī)定，三氯甲烷屬第二類(lèi)殘留溶劑，限度均為0.006%，屬于在藥品中應(yīng)限制殘留量的溶劑，控制其殘留量對(duì)保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義。本文根據(jù)ICH的指導(dǎo)原則和《中國(guó)藥典》2005年版的相關(guān)規(guī)定，并參考有關(guān)文獻(xiàn)[3]，采用ECD，以N，N-二甲基甲酰胺為溶解介質(zhì)，測(cè)定鹽酸美金剛中三氯甲烷的殘留量。結(jié)果表明，本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷殘留量的測(cè)定。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；AB304-S型電子天平（瑞士梅特勒公司）。

鹽酸美金剛（國(guó)內(nèi)M公司，批號(hào)：20060818、20060819、20060820，含量：均為100.0%）；三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1701毛細(xì)管柱（30 m×320 μm×0.25 μm）；柱溫：80℃維持5 min，以35℃·min－1的速率升至210℃，維持10 min；分流進(jìn)樣方式，分流比：10∶1，進(jìn)樣口溫度：200 ℃；采用ECD，檢測(cè)器溫度：250 ℃；載氣：氮?dú)猓魉伲?.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：1μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液。精密稱(chēng)取三氯甲烷12 mg，置于200 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液。精密稱(chēng)取本品約0.5 g，置于5 mL容量瓶

中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

照“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果，三氯甲烷的理論板數(shù)為26 852，N，N-二甲基甲酰胺在ECD上沒(méi)有響應(yīng)，不干擾三氯甲烷的測(cè)定，詳見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液5、10、5、5、5、1 mL，分別置于5、25、25、50、100、50 mL容量瓶中，均加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸。結(jié)果，線(xiàn)性方程為A＝1 023.59C+898.21（r＝0.999 9），三氯甲烷檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為1.2～60μg·mL－1。

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；1.三氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.chloroform

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 日內(nèi)精密度試驗(yàn)。精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液1μL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算三氯甲烷的峰面積的RSD＝1.1%。

2.5.2 日間精密度試驗(yàn)。精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液1μL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)3 d分別連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算三氯甲烷的峰面積的RSD＝1.2%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取本品（批號(hào)：20060818）約0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共6份，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，檢出本品中三氯甲烷為0.000 4%，RSD＝1.0%。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知三氯甲烷含量的樣品（批號(hào)：20060818）約0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共9份，分別加入“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液0.400、0.500、0.600 mL，各3份，再分別用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，三氯甲烷的平均回收率為99.6%，RSD＝0.8%。

2.8 檢測(cè)限與定量限試驗(yàn)

采用逐步稀釋法測(cè)得，以S/N＝2～3時(shí)計(jì)算三氯甲烷的檢測(cè)限，以S/N＝10時(shí)計(jì)算三氯甲烷的定量限，結(jié)果檢測(cè)限為0.32 pg，定量限為1.02 pg。

2.9 樣品中三氯甲烷的含量測(cè)定

取三氯甲烷和3批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算三氯甲烷的殘留量，結(jié)果3批樣品中三氯甲烷的殘留量均為0.000 4%。

3 討論

鹽酸美金剛在合成過(guò)程中使用的4種有機(jī)溶劑中，乙醇、乙醚、乙酸乙酯在FID上有良好的靈敏度，而在ECD上響應(yīng)很弱；三氯甲烷在ECD上靈敏度高，而在FID上靈敏度很低。這種情況下，很難用1種檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定上述4種有機(jī)溶劑，可以用1根色譜柱分離上述4種溶劑，用FID測(cè)定前3種溶劑，用ECD測(cè)定三氯甲烷。關(guān)于同時(shí)測(cè)定上述4種溶劑的方法，還有待進(jìn)一步研究。

三氯甲烷的沸點(diǎn)為61.7℃，N，N-二甲基甲酰胺的沸點(diǎn)為152.8℃，兩者相差較大，采用程序升溫可以更有效地使兩者分離，并縮短分析時(shí)間。

本文還采用標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)樣品（批號(hào)：20060818）的殘留溶劑的含量進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與外標(biāo)法一致，表明該方法的基質(zhì)效應(yīng)不明顯。由于本方法的分離度、精密度、準(zhǔn)確度均達(dá)到了《中國(guó)藥典》2005年版的相關(guān)要求，故此法適用于鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷殘留量的檢測(cè)。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：343.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：54～57.

[3]李珂珂，譚豐蘋(píng).毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定拉米夫定中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國(guó)藥房，2007，18（19）：1 502.