楊冬梅，楊世友

（1.安徽醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230022； 2.安徽省藥物研究所，安徽 合肥 230022）

復(fù)方葛酮顆粒由黃芪、丹參、葛根3味中藥組成，具有逆轉(zhuǎn)心肌肥厚的功效。由于葛根主要有效成分葛根總黃酮中的葛根素比較穩(wěn)定，2005年版《中國(guó)藥典（一部）》中亦規(guī)定其有效成分以葛根素為檢測(cè)指標(biāo)[1]，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較多[2-5]。因此，筆者選擇高效液相色譜法測(cè)定葛根素的含量來(lái)控制復(fù)方葛酮顆粒的質(zhì)量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-10AT型高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10A紫外檢測(cè)器（日本島津），Waters C18色譜柱，N2000色譜工作站（浙江大學(xué)）。葛根素對(duì)照品（含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為752-200108）；復(fù)方葛酮顆粒（安徽省藥物研究所，批號(hào)分別為060513，060515，060518）；甲醇、冰醋酸為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇 -水 -醋酸（25 ∶75 ∶1）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。

2.2 溶液制備

取樣品細(xì)粉3 g，精密稱(chēng)定，置100 mL燒瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，回流30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品2.5 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每1 mL約含0.025 mg葛根素）。取不含葛根的陰性制劑，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)為9224，葛根素峰與相鄰峰分離度為2.2，陰性對(duì)照品溶液不干擾測(cè)定（圖1）。

線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品4.8 mg，加30%乙醇配制成0.24 g/L的對(duì)照品母液，再精密量取1 mL稀釋10倍，制成0.024 g/L的對(duì)照品溶液。精密量取0.024 g/L的對(duì)照品溶液2，4，8μL 和 0.24 g/L 的對(duì)照品母液 2，4，8μL，按上述色譜條件注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積 A為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程A=2 ×106C+3722.6（r=0.9999，n=6）。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在0.048～1.92μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10μL，按上述色譜條件注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積積分值的 RSD=0.73%（n=6），表明方法精密度好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液 10μL，分別于 0，2，4，8，12，24 h時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD=0.98%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批（批號(hào)為060513）樣品共6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD=1.13%（n=6），表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已知含量（0.451 mg/g）的同一批（批號(hào)為060513）樣品1.5 g共6份，分別精密加入0.68 g/L的對(duì)照品溶液0.8，1.0，1.2 mL各兩份（相當(dāng)于分別加入葛根素對(duì)照品0.544，0.680，0.816 mg），照供試品溶液制備方法制備溶液，按色譜條件注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測(cè)定

取 3 批樣品（批號(hào)分別為 060513，060515，060518），按供試品溶液制備方法制備溶液，分別精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品的含量分別為 0.451，0.462，0.507 mg/g。

表1 葛根素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 討論

曾采用甲醇-水（25∶75）及3種配比的甲醇-水-醋酸（25∶75 ∶0.1），（25 ∶75 ∶0.5），（25 ∶75 ∶1）等 4 種流動(dòng)相綜合評(píng)定保留時(shí)間、塔板數(shù)、最小分離度等指標(biāo)，最終確定甲醇-水-醋酸（25∶75∶1）為流動(dòng)相，配比簡(jiǎn)單，易于操作，分離效果良好。還考察了不同提取方法和時(shí)間對(duì)葛根素含量的影響，結(jié)果表明以30%乙醇為提取溶劑、回流處理30 min即可提取完全。

采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方葛酮顆粒中葛根素含量，方法靈敏可靠，重現(xiàn)性好，回收率高，可用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：233.

[2]王志朝，覃 貝，劉祖雄.葛根芩連膠囊劑的制備與質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（19）：45-46.

[3]邢俊家，周 暉，馮婉玉.高效液相色譜法測(cè)定咽喉炎糖漿劑中葛根素的含量[J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（7）：903-904.

[4]顏素琴，宋曉琳，李祥勇.高效液相色譜法測(cè)定益氣養(yǎng)陰降糖丸中葛根素的含量[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（5）：1130.

[5]梁曉燕，鄧杏好.渴消靈口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（13）：15-16.