吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 王桂芹 李子平 牛小天 蘆洪梅

吉林省長春市水產(chǎn)研究院 郭貴良 孫 麗

吉林省新立城水庫管理局 朱興華 李清華

維生素B6是維持機(jī)體正常代謝所必需的低分子有機(jī)化合物，可作為轉(zhuǎn)氨酶的輔酶參與機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，在轉(zhuǎn)氨、脫氨和脫硫基以及催化氨基的分解與合成中發(fā)揮重要作用。餌料中維生素B6的缺乏會引起魚蝦的厭食和生長不良等缺乏癥（Albrektsen 和 Sandnes，1995），特別是集約化養(yǎng)殖條件下，當(dāng)投喂高蛋白質(zhì)飼料時，維生素B6的不足可能引起氨基酸代謝的異常，并可影響魚、蝦等水產(chǎn)動物的生長和氨基酸組成。肉食性魚類對蛋白質(zhì)的需求較高，相應(yīng)對維生素B6的需求也較高，二者之間可能存在相互作用（Giri等，1997）。本文旨在探討飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6水平對烏鱧蛋白質(zhì)代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧 以魚粉為蛋白質(zhì)源，以魚油、大豆油、糊精和面粉為能源、纖維素為填充物配制半精制日糧。試驗(yàn)共配制成由3個可消化蛋白（DP）水平（34.82%、38.78%和42.35%）和3個維生素B6水平（0、12 mg/kg 和 24 mg/kg 飼料）組合而成的9種的配合飼料。試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平見表 1，其中 L、M和 H分別表示含 34.82%、38.78%和42.35%可消化蛋白質(zhì)水平，數(shù)字1、2、3分別表示含0、12 mg/kg和24 mg/kg飼料。飼料原料經(jīng)粉碎過60目篩，按配方稱重、均勻混合，擠壓成直徑為1.5 mm顆粒，曬干后置于-4℃冰柜中保存、備用。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 試驗(yàn)魚和飼養(yǎng)管理 生長試驗(yàn)于2008年7月30日到2008年9月26日在東遼縣安西水庫池塘網(wǎng)箱（1.0 m×1.0 m×1.0 m）中進(jìn)行。烏鱧魚苗購于沈陽蘇家屯，飼養(yǎng)于土池中2個月，試驗(yàn)前2周，挑選規(guī)格整齊4000尾魚置于網(wǎng)箱中進(jìn)行馴養(yǎng)，期間從冰鮮雜魚逐漸過渡到配合飼料。待全部攝食配合飼料后開始試驗(yàn)，試驗(yàn)開始前先停飼24 h，稱重，隨機(jī)取魚放養(yǎng)，每種飼料3個重復(fù)，每個重復(fù)放養(yǎng)100尾魚，持續(xù)飼養(yǎng)8周。試驗(yàn)期間水溫為23～30℃，pH為7.1±0.1，溶解氧大于5 mg/L，氨氮小于0.5 mg/L。試驗(yàn)期間記錄死魚數(shù)并稱重。

1.3 樣品收集與測定

1.3.1 樣品的收集和測定 生長試驗(yàn)結(jié)束時，魚饑餓1 d，從每組中隨機(jī)取15尾，取出胃、全部腸道的前1/3和肝胰臟，剔除附著物，用去離子水清洗腸道內(nèi)容物，濾紙吸干，-20℃保存待測。

粗酶液的制備和蛋白酶活力的測定：樣品稱重，加入10倍體積的高純水勻漿，在4℃冰箱中靜置過夜，3000 r/min離心10 min，取上清液作為粗酶液，4℃保存、待測。在24 h內(nèi)測定完畢。采用福林-酚法測定蛋白酶活力。1個蛋白酶比活力單位定義為：pH 7.0（測定胃蛋白酶活性時pH為2.2）底物酪蛋白濃度為 20 mg/mL、（37±1）℃條件下保溫10 min，每毫克酶蛋白、每分鐘產(chǎn)生1 μg酪氨酸的酶量。

1.3.2 GPT和LDH酶活性分析 取肝胰臟和背側(cè)白肌，測定其谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和乳酸脫氫酶的活性 （LDH）（其試劑盒購自江蘇省南京建成生物研究所）。

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行雙因素方差分析，用Duncan’s多重比較分析組間差異顯著性程度。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧蛋白酶比活力的影響 見表2。飼料蛋白質(zhì)水平極顯著影響胃、腸道和肝胰臟蛋白酶比活力（P<0.01），在同一維生素B6水平下，隨蛋白質(zhì)水平的提高，各器官蛋白酶比活力顯著提高。維生素B6極顯著影響胃和肝胰臟蛋白酶比活力（P<0.01），但對腸道蛋白酶比活力無顯著影響（P>0.05），飼料蛋白質(zhì)和維生素B6的交互作用對胃、腸道和肝胰臟蛋白酶比活力無顯著影響（P>0.05）。

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧氨基酸代謝酶的影響 見表3。飼料蛋白質(zhì)水平極顯著影響肝胰臟和肌肉中乳酸脫氫酶的活力 （P<0.01），顯著影響肝胰臟和肌肉中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力（P<0.05），在同一維生素B6水平下，隨蛋白質(zhì)水平的提高，各器官乳酸脫氫酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力都顯著提高。維生素B6極顯著影響肝胰臟和肌肉中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力和肌肉中乳酸脫氫酶的活力（P<0.01），顯著影響肝胰臟乳酸脫氫酶的活力（P<0.05）。飼料蛋白質(zhì)和維生素B6的交互作用對各器官乳酸脫氫酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力無顯著影響（P>0.05）。

表2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧蛋白酶比活力的影響

表3 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧肝胰臟和肌肉中氨基酸代謝酶的影響U/g

3 討論與小結(jié)

3.1 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧蛋白酶的影響 消化酶活性是反映魚類消化機(jī)能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，消化酶活性決定魚類對營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的能力，從而決定其生長和發(fā)育的速度。對鯉（Kawai和 Ikeda，1972）、草魚（張家國等，1997；李廣麗和王義強(qiáng)，1994；黃耀桐和劉永堅，1988）、兩棲胡子鯰（Mukhopadhyay，1997）、鱖魚（趙東海，2004）等研究都表明，蛋白酶活性的高低與飼料蛋白水平關(guān)系密切，在一定飼料蛋白質(zhì)水平范圍內(nèi)，蛋白酶活性隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加而升高，當(dāng)達(dá)到最適蛋白質(zhì)水平后，酶活性不再增加甚至?xí)陆担砻髟谝欢ǚ秶鷥?nèi)，適當(dāng)提高飼料蛋白質(zhì)水平，促進(jìn)胰臟分泌蛋白酶，將有助于腸道內(nèi)食物的消化吸收，同時適當(dāng)較多地攝入蛋白質(zhì)，有利于魚體內(nèi)消化酶的合成，增強(qiáng)其新陳代謝水平，促進(jìn)組織蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)生長。本研究結(jié)果也得到相同的結(jié)果。邢浩春（2005）研究表明，維生素B6缺乏可分別引起史氏鱘肝胰臟、胰腺胰蛋白酶活力下降。維生素B6是蛋白質(zhì)和氨基酸代謝相關(guān)酶的輔酶，在轉(zhuǎn)氨、脫羧、脫氨、脫巰基以及催化氨基酸分解與合成中起重要作用，維生素B6提高以5-磷酸吡哆醛為輔酶的轉(zhuǎn)氨酶活力，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成；增強(qiáng)蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)代謝。

3.2 飼料蛋白質(zhì)水平與維生素B6對烏鱧氨基酸代謝酶的影響 所有氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的輔酶均是磷酸吡哆醛，轉(zhuǎn)氨酶在機(jī)體生長代謝中發(fā)揮著極其重要的作用，血清和組織中的丙氨酸和天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶活性已被作為評價魚等體內(nèi)維生素B6狀態(tài)的指標(biāo)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性器官是肝胰臟和腎臟，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性可作為魚肝胰臟、腎功能破壞 的檢測 指 標(biāo) （Shaik，2001；Shiau 和 Hsieh，1997）。維生素B6被認(rèn)為是蛋白質(zhì)維生素，因與氨基酸的代謝密切相關(guān)，缺乏會導(dǎo)致一些依賴磷酸吡哆醛的酶的活力下降，使得體內(nèi)氨基酸代謝異常。隨飼料中蛋白質(zhì)水平的升高，烏鱧肝胰臟GPT活性均呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，這可能是由機(jī)體對飼料蛋白質(zhì)的含量具有某種適應(yīng)機(jī)制導(dǎo)致的結(jié)果，因?yàn)镚PT為氨基轉(zhuǎn)移酶，直接參與消化吸收后進(jìn)入肝細(xì)胞中的氨基酸代謝過程 （Baker和Davis，2002）。由于維生素B6在轉(zhuǎn)氨基過程中的特殊作用，故各種組織和器官中轉(zhuǎn)氨酶活性可間接反映動物體內(nèi)維生素B6的營養(yǎng)狀況，且餌料中缺乏維生素B6可引起肌肉GOT活性的降低（Kissil等，1981；Smith 等，1974）。 本研究發(fā)現(xiàn)，添加維生素B6后肝胰臟GPT活性是未添加飼料組的1～2.0倍，其變化趨勢與飼料中維生素B6含量相吻合，說明維生素B6作為轉(zhuǎn)氨酶的輔酶，與其活性的高低密切相關(guān)，在一定程度上也能反映機(jī)體蛋白質(zhì)的營養(yǎng)狀況。在本試驗(yàn)條件下，中高蛋白質(zhì)水平飼料中適當(dāng)添加維生素B6可促進(jìn)烏鱧蛋白質(zhì)代謝。

[1]黃耀桐，劉永堅.草魚腸道、肝胰臟蛋白酶活性初步研究[J].水生生物學(xué)報，1988，12（4）：328 ～ 333.

[2]李愛杰.水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1996.25～32.

[3]李廣麗，王義強(qiáng).草魚、鯉腸道、肝胰臟消化酶活性的初步研究[J].湛江水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，1994，14（1）：34 ～ 40.

[4]邢浩春.維生素B6對史氏鱘幼魚攝食生長及能量收支的影響[D].石家莊：河北師范大學(xué)，2005.43～49.

[5]張家國，鄒師哲，王義強(qiáng).不同蛋白、能量比飼料與草魚消化酶的關(guān)系[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報，1997，6（1）：54 ～ 56.

[6]趙東海.飼料蛋白水平對鱖魚實(shí)驗(yàn)種群胃腸道消化酶活性的影響[J].河北漁業(yè)，2004，2：10 ～ 15.

[7]中山大學(xué)生物系編.生化技術(shù)導(dǎo)論[M].北京：科學(xué)出版社，1979.53～54.

[8]Albrektsen S K，Sandnes J G.Influence of dietary vitamin B6on tissue vitamin B6content and immunity in Atlantic salmon，Salmo salar L[J].Aquaculture Research，1995，26：331 ～ 339.

[9]Baker R T M，Davis S J.The effect of pyridoxine supplementation on dietary protein utilization in gilthead sea bream fry[J].Animal Science，2002，60：157～162.

[10]Giri I N A，Teshima S，Kanazawa A.Effects of dietary pyridoxine and protein levels on growth，vitamin B6content，and free amino acid profile of juvenile Penaeus japonicus[J].Aquaculture，1997，157：263 ～ 275.

[11]Kawai S，Ikeda S.Studies on digestive enzymes of fish II.Effect of dietary change on the activities of digestive enzymes in carp intestine[J].Bull Bull Jpn Soc Sci Fish，1972，38（3）：265 ～ 270.

[12]Kissil G W，Cowey C B，Adron J W.Pyridoxine requirements of the gilthead bream，Sparus aurata[J].Aquaculture，1981，23：243 ～ 255.

[13]Mukhopadhyay P K.Studies on the enzymatic activities to varied pattern of diets in the air– breathing catfish，Clarias batrachus[J].Hydrobiologia，1977，52（2 ～ 3）：235 ～ 237.

[14]Shaik M.Dietary pyridoxine requirement of the Indian catfish，Heteropneustes fossilis[J].Aquaculture，2001，194：327 ～ 335.

[15]Shiau S Y，Hsieh H L.Vitamin B6requirements of tilapia Oreochromisniloticus×O.aureus fed two dietary protein concentrations[J].Fish Sci，1997，63：1002～1007.

[16]Smith C E，Birn M，Halver J E.Biochemical，physiological，and pathological changes in pyridoxine deftcient rainbow trout（Salmo gairderi）[J].J Fish Res Bd Can，1974，31：1893 ～ 1898.