李玉英,段鵬慧,張先平

(1.河北政法職業(yè)學(xué)院 ,河北 石家莊 050061;2.山西林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山西 太原 030009)

麗格海棠葉片的組織培養(yǎng)研究

李玉英1,段鵬慧2,張先平2

(1.河北政法職業(yè)學(xué)院 ,河北 石家莊 050061;2.山西林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山西 太原 030009)

取麗格海棠葉片作外植體,通過(guò)試驗(yàn),分析不同激素配比對(duì)芽的誘導(dǎo)、增殖及生根的影響,篩選出麗格海棠葉片組織培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基及試管苗最佳移栽基質(zhì)。結(jié)果表明:其最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 M S+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.8 mg/L,不定芽誘導(dǎo)率達(dá) 100%;最佳繼代培養(yǎng)基是M S+6-BA 1.0 mg/L+N AA 0.5 mg/L,增殖倍數(shù)達(dá)6.5倍;最佳生根培養(yǎng)基是1/2M S+N AA0.4mg/L,生根率達(dá)100%;試管苗最佳移栽基質(zhì)為用1/2MS大量元素澆透的草炭,移栽成活率為85%。

麗格海棠;葉片;組織培養(yǎng)

麗格海棠(Rieger Begonia)又名玫瑰海棠,秋海棠科、秋海棠屬多年生草本花卉,是近幾年從荷蘭引進(jìn)的海棠新品種。由于其花期長(zhǎng),花色鮮艷、豐富,在世界各國(guó)很受歡迎,具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。麗格海棠很難獲得種子,種子極小,1 g種子約為 10 000粒～ 20 000粒,種子繁殖難度大,塊莖、莖段扦插成活率低,極大地限制了其繁殖。因此,麗格海棠的組織培養(yǎng)就顯得尤為重要。

1 材料與方法

1.1 葉片的初代培養(yǎng)

剪取優(yōu)良健壯植株帶葉片的莖,用自來(lái)水沖洗,后用洗衣粉水浸泡 10 min,再用自來(lái)水反復(fù)沖洗干凈備用。在無(wú)菌條件下,用75%的酒精浸泡30 s,用無(wú)菌水沖洗 3次,用 0.1%的升汞溶液消毒 3 min,然后再用無(wú)菌水沖洗 3次。將葉片剪成 1 cm2的方塊,接種在初代培養(yǎng)培養(yǎng)基中。初代培養(yǎng)培養(yǎng)基為:1)MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;2)MS+6-BA 1.5 mg/L+ N AA 0.2 mg/L;3)MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L;4)MS+ 6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.8 mg/L;5)MS+ 6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。每種培養(yǎng)基接 20塊材料,觀察其生長(zhǎng)情況。

1.2 不定芽的繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)出的不定芽叢切成 1 cm2大小,分別接種于繼代培養(yǎng)培養(yǎng)基上。繼代培養(yǎng)培養(yǎng)基為:1)M S+ 6-BA0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L;2)MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 1.0 mg/L;3)MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L;4)MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。每種培養(yǎng)基接種3塊不定芽,培養(yǎng) 40 d后統(tǒng)計(jì)苗高大于2 cm的苗數(shù)。

1.3 試管苗的生根培養(yǎng)

將繼代培養(yǎng)基中高于 2 cm的幼苗分別接種于生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為:1)1/2 MS;2)1/2 MS+IBA 0.1 mg/L;3)1/2 MS+IBA 0.5 mg/L;4)1/2 MS+NAA 0.4 mg/L。每種培養(yǎng)基接 20株芽苗。

以上各培養(yǎng)基 pH為 5.8～ 6.0,添加的激素類物質(zhì)有 6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、奈乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA),培養(yǎng)溫度為 (25± 2)°C,光照強(qiáng)度為1 500 Lx～ 2 000 Lx,光照時(shí)間為 10 h/d。

1.4 生根苗的馴化

當(dāng)試管苗根長(zhǎng)為 1 cm以上時(shí),打開瓶口煉苗。2周后取出試管苗,洗凈根部粘附的培養(yǎng)基,栽入經(jīng)過(guò)滅菌的基質(zhì)中。所用基質(zhì)為:1)蛭石;2)草炭(用1/2M S大量元素澆透);3)蛭石∶草炭=1∶1。馴化過(guò)程中,每隔 5 d澆 1次水,前期遮蔭保濕,后期光照逐漸增強(qiáng),30 d后可移植到花盆中。

2 結(jié)果與分析

2.1 不定芽的初代培養(yǎng)

麗格海棠葉片接種 15 d后,葉肉組織逐漸膨大,葉片褶皺成拱形,逐步發(fā)育為愈傷組織,40 d左右愈傷組織上逐漸產(chǎn)生大量淺綠色不定芽。不同培養(yǎng)基的不定芽誘導(dǎo)率見表1。

表 1 不同培養(yǎng)基的不定芽誘導(dǎo)率

從表 1可以看出,5種培養(yǎng)基對(duì)不定芽的誘導(dǎo)情況各不相同。在培養(yǎng)基2,3上,葉片分化形成不定芽的時(shí)間約需要 40 d左右,但不定芽誘導(dǎo)率較低,分別是 20%和35%。在培養(yǎng)基 5上,葉片分化形成不定芽的時(shí)間約需要 35 d左右,但形成的不定芽少。在培養(yǎng)基1,4上,葉片分化形成不定芽的時(shí)間也在 35 d左右,不定芽的誘導(dǎo)率都在 90%以上,而4號(hào)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率是 100%,分化形成的芽叢密且多,所以麗格海棠最佳初代培養(yǎng)基為 MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.8 mg/L。

2.2 不定芽的繼代培養(yǎng)

6-BA和 NAA對(duì)麗格海棠繼代培養(yǎng)的影響結(jié)果見表 2。

表 2 6-BA和NAA對(duì)麗格海棠繼代培養(yǎng)的影響

從表 2中可以看出,當(dāng) NAA濃度是 0.5 mg/L時(shí),隨著6-BA濃度的增加,增殖倍數(shù)也增加,而平均苗高降低,由此可知,6-BA對(duì)試管苗的生長(zhǎng)有一定的抑制作用;當(dāng) 6-BA濃度是 1 mg/L或 0.5 mg/L時(shí),隨著 NAA濃度的增加,增殖倍數(shù)變大,平均苗高也增加,故 NAA對(duì)試管苗的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用。4種培養(yǎng)基中試管苗的平均苗高差異不大,但其中增殖倍數(shù)最大的是 4號(hào)培養(yǎng)基,所以,4號(hào)培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L為最佳繼代培養(yǎng)基,增殖倍數(shù)達(dá) 6.5倍。

2.3 試管苗的生根培養(yǎng)

不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響結(jié)果見表3。

表3 不同培養(yǎng)基對(duì)試管苗生根的影響

從表 3可以看出,試管苗在 4種不同的生根培養(yǎng)基上均能生根,3號(hào)培養(yǎng)基的生根率最低,只有59%;1號(hào)培養(yǎng)基的生根率達(dá) 82%,但試管苗生根速度慢,根系弱小;2號(hào)和 4號(hào)培養(yǎng)基的生根率為100%,而且在較短時(shí)間內(nèi)開始生根,但 2號(hào)中試管苗根較長(zhǎng),4號(hào)試管苗根粗壯。因此,適宜麗格海棠生根的最佳培養(yǎng)基為 4號(hào)培養(yǎng)基 1/2 MS+NAA 0.4 mg/L,生根率達(dá) 100%,且根系粗壯。

2.4 生根苗的馴化移栽

不同移栽基質(zhì)對(duì)生根苗成活的影響見表4。

表 4 不同移栽基質(zhì)對(duì)生根苗成活影響

從表 4看出,栽培基質(zhì)對(duì)生根苗移栽成活率影響顯著,生根苗在 2號(hào)基質(zhì)上生長(zhǎng)健壯,葉色深綠,成活率高達(dá) 85%。在栽培 1號(hào)和3號(hào)基質(zhì)中幼苗生長(zhǎng)明顯不如在 2號(hào)基質(zhì)上的健壯,且在 3號(hào)基質(zhì)上幼苗呈淺綠色,成活率最低。因此,麗格海棠試管苗最佳移栽基質(zhì)為用1/2MS大量元素澆透的草炭,移栽成活率為 85%。

3 小結(jié)與討論

通過(guò)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)葉片組織培養(yǎng)繼代 2代后,增殖速度成倍增加,極大地提高麗格海棠的繁殖速度,且植株生長(zhǎng)健壯,顏色濃綠。

在不定芽的初代培養(yǎng)中,嫩葉的消毒過(guò)程動(dòng)作要輕緩,不要弄傷葉片,否則破傷處容易褐化,嚴(yán)重影響初代培養(yǎng)的結(jié)果。

初代培養(yǎng)時(shí),MS培養(yǎng)基中瓊脂 8 g,蔗糖 25 g,期間出現(xiàn)了玻璃化現(xiàn)象,后將 MS中蔗糖調(diào)整為30 g,瓊脂 6.5 g,玻璃化現(xiàn)象減輕。

在生根苗的馴化移植過(guò)程中,對(duì)光的強(qiáng)度非常敏感。因此,自然移栽前期要遮光,后期光照逐漸加強(qiáng)到 1 000 Lx～ 3 000 Lx,如果前期光照強(qiáng),生根苗容易白化。移栽過(guò)程中溫度要保持在20°C～ 22°C。

[1]遠(yuǎn)凌威,袁正仿.麗格海棠的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].信陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào),2002(2):15.

[2]范小峰,李師翁,田興旺.麗格海棠的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊,2003(2):19.

[3]王米力.麗格海棠的組織培養(yǎng)外植體再生體系建立關(guān)鍵技術(shù)的研究[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002(4):20.

Study on Tissue Culture of Leaves of Rieger Begonia

Li Yuying1,Duan Penghui2,Zhang Xianping2
(1.Hebei Policy and Law Vocational College,050061Shijiazhuang,China;2.Shanx i Forestry Vocational Technological College,030009 Taiyuan,China)

Using leaves ofRieger Begoniaas explant,the optimal culture medium was screened out by analyzing the effects of various hormone proportions on bud induction and proliferation and the effect of hormone concentration on rooting.The results showed that:the optimum medium for induction is MS+6-BA 1.5 mg/L+N AA0.8mg/L;induction rate of adventitious bud reaches100%;The optimum subculture medium is M S+6-BA 1.0 mg/L+N AA 0.5 mg/L,and proliferation times 6.5;The best rooting medium is 1/2MS+ NAA 0.4 mg/L with100%of rooting rate;The optimal transplanting medium for tube seedling is the peat irrigated through with half of M S abundant element with transplanting survival rate of 85%.

Rieger Begonia;leaves;tissue culture

S661.4

A

1007-726X(2010)01-0014-02

2009-11-27

李玉英(1968- ),女,河北棗強(qiáng)人,1990年畢業(yè)于北京林業(yè)大學(xué),副教授。