覃廣勝,楊炳壯,譚正準(zhǔn),李 輝,黃 健,梁賢威

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所,廣西南寧530001)

意大利地中海水牛是目前世界上河流型水牛中產(chǎn)奶性能最好的品種之一,其平均一個(gè)泌乳期產(chǎn)奶量可達(dá)到2168 kg,有部分高產(chǎn)牛群可達(dá)到一個(gè)泌乳期4000～5000 kg,奶質(zhì)優(yōu)良,被公認(rèn)為乳用水牛中的一個(gè)非常優(yōu)秀的品種。廣西水牛研究所是我國唯一研究水牛的科研機(jī)構(gòu),目前擁有2個(gè)河流型水牛品種(摩拉和尼里/拉菲水牛)。2007年7月,在科技部國際科技合作項(xiàng)目和農(nóng)業(yè)部948項(xiàng)目的資助下,我所國內(nèi)首次引進(jìn)意大利地中海的優(yōu)秀奶水牛凍精,并采用人工授精技術(shù),分別與我國現(xiàn)有的摩拉水牛、尼里/拉菲水牛以及本地水牛進(jìn)行雜交組合研究。引進(jìn)凍精目的是通過對(duì)其雜交后代的選育,培育水牛新品系,建立良種水牛核心種群,為我國開展水牛雜交改良提供充足的種源;另一方面,通過對(duì)其雜交后代的生產(chǎn)性能測(cè)定,篩選出最佳的雜交組合,用于我國本地水牛的雜交改良,促進(jìn)我國奶水牛業(yè)快速發(fā)展。本試驗(yàn)旨在初步了解地中海水牛凍精在我國人工授精的效果,以探討意大利地中海水牛在我國生長適應(yīng)情況,為下一步規(guī)模應(yīng)用地中海水牛凍精改良我國本地水牛奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)牛群 選取廣西水牛研究所隔離試驗(yàn)牛場(chǎng)中經(jīng)檢驗(yàn)合格的牛群作為試驗(yàn)牛,其中有摩拉水牛30頭,尼里水牛25頭,本地水牛40頭,年齡2.5～9歲之間,體重350～650 kg。

1.1.2 凍精 從意大利人工授精中心(COFA)引進(jìn)的意大利地中海水牛細(xì)管凍精,每細(xì)管凍精有效精子數(shù)1000萬以上,精子活力解凍后0.4以上。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)情觀察與監(jiān)測(cè) 每天專人認(rèn)真觀察和記錄牛群中摩拉、尼里和本地水牛的自然發(fā)情情況,并用結(jié)扎的試情公牛做為輔助發(fā)情觀察;同時(shí)從發(fā)現(xiàn)發(fā)情開始,每天利用B超診斷儀(日本Honda HS-101V)監(jiān)測(cè)卵巢上卵泡發(fā)育情況,確定優(yōu)勢(shì)卵泡在哪一側(cè),從早、中、晚每隔4～6 h監(jiān)測(cè)水牛排卵情況,并根據(jù)水牛發(fā)情行為、粘液情況以及排卵情況選擇確定最適配種時(shí)間。

1.2.2 凍精解凍方法 把地中海水牛凍精迅速從液氮罐取出后,放置空氣中停留5～8 s,然后迅速放到37.5～39℃的溫水中解凍,在解凍時(shí)間10～15 s,顯微鏡檢查精子活力,解凍后精子活力在0.40以上。

1.2.3 人工授精方法 采用直腸把握子宮角深部輸精法。

1.2.4 妊娠檢查 在配種后40 d用B超診斷儀(日本Honda HS-101V)進(jìn)行早期妊娠診斷,確定是否懷孕。

1.2.5 試驗(yàn)記錄 記錄水牛發(fā)情時(shí)間、發(fā)情表現(xiàn)、排卵時(shí)間、卵泡發(fā)育情況和懷孕情況等。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 以水牛品種作為處理因素,配種牛頭數(shù)與懷孕頭數(shù)作為結(jié)果,應(yīng)用SAS8.0進(jìn)行卡方獨(dú)立性檢驗(yàn),P>0.1認(rèn)為是差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種水牛對(duì)人工授精效果的影響

表1 不同品種水牛人工授精效果的比較

從表1可以看出,利用地中海水牛凍精進(jìn)行人工授精,品種間人工授精受胎率差異不顯著(P>0.1);總平均受胎率為58.82%。從初步試驗(yàn)結(jié)果來看,利用引進(jìn)的地中海水牛凍精進(jìn)行人工授精,其的受胎率效果還是較好的。

2.2 不同年齡對(duì)人工授精效果的影響

表2 不同年齡對(duì)水牛受胎率的影響

由表2看出,青年母水牛人工授精配種受胎率略高于經(jīng)產(chǎn)母牛的受胎率,但統(tǒng)計(jì)結(jié)果差異不顯著(P>0.1)。

2.3 排卵時(shí)間對(duì)人工授精人工授精效果的影響

表3 根據(jù)排卵時(shí)間進(jìn)行人工授精對(duì)水牛受胎率的影響

從表3結(jié)果發(fā)現(xiàn),排卵時(shí)間對(duì)人工授精配種受胎率影響較大,以排卵后1～3 h配種的受胎率最好,明顯高于排卵后4～6 h配種的受胎率(P<0.1),但與排卵前6～8 h配種的受胎率統(tǒng)計(jì)上沒有差異(P>0.1)。

3 討論與小結(jié)

利用意大利地中海水牛凍精與我國摩拉、尼里以及本地水牛進(jìn)行人工授精效果表明,意大利地中海水牛凍精完全可與摩拉、尼里和我國本地水牛進(jìn)行雜交的,且效果較好,其平均人工授精配種受胎率為58.82%,高于意大利的Zicarelli L等[1]報(bào)道利用地中海水牛人工授精配種受胎率(42.5%～51.1%),與Moioli等[2](1998)報(bào)道地中海水牛自然發(fā)情人工授精配種受胎率56%相近。

本試驗(yàn)中,以尼里/拉菲的人工授精配種受胎率效果最好,達(dá)到75%,但品種間人工授精配種受胎率統(tǒng)計(jì)上差異不顯著(P>0.1),這與蔡啟站[3]研究發(fā)現(xiàn)在摩拉、尼里/拉菲和雜交水牛3個(gè)品種中的人工授精配種受胎率差異不顯著的結(jié)果相一致。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),青年母水牛人工授精配種受胎率略高于經(jīng)產(chǎn)母牛的受胎率,與蔡啟站[3]報(bào)道的結(jié)果相似,在利用尼里/拉菲、摩拉和雜交水牛進(jìn)行人工授精配種試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)以3～8歲的水牛受胎率最高(66.5%).其次是 9～12歲者(45.6%)。13歲以上者僅為35.3% 。這可能是青年母牛的生殖道和子宮內(nèi)環(huán)境相對(duì)健康干凈不受病菌感染,有利于精卵受精和胚胎著床。而經(jīng)產(chǎn)母牛常有產(chǎn)科疾病,且年齡大的母水牛卵巢機(jī)能活動(dòng)減退,排卵延遲等原因,致使人工授精配種受胎率降低。

從本研究試驗(yàn)結(jié)果中可看出,排卵時(shí)間對(duì)人工授精配種受胎率影響較大。許多研究者強(qiáng)調(diào)由于水牛的發(fā)情癥狀不明顯,發(fā)情時(shí)間和持續(xù)時(shí)間長短不一,因此掌握水牛排卵規(guī)律,把握水牛人工授精適時(shí)輸精時(shí)間是重要的[4,5]。在本研究中用B超跟蹤了15頭牛25個(gè)發(fā)情周期研究中,從發(fā)情開始到排卵這階段平均時(shí)間是40.7 h(19～96 h),與周岐生[6](40.8h)、李忠權(quán)[7](47h)等報(bào)道相近。吳師等[8]也報(bào)道了大部分水牛在發(fā)情后40h左右即進(jìn)入發(fā)情的后期或末期,是比較理想的輸精時(shí)間,母牛在發(fā)情后36～40 h進(jìn)行人工授精,配種受胎率達(dá)69.86%;在發(fā)情后24 h以前或發(fā)情后60 h以后的配種受胎率較低,相比分別相差44.15個(gè)百分點(diǎn)和37.86個(gè)百分點(diǎn),差異顯著(P<0.05)。而水牛的適時(shí)輸精在發(fā)情的后期或末期,也就是在水牛發(fā)情后36～48 h,平均40 h輸精,可獲得較理想的配種受胎率,從本研究結(jié)果也得到了進(jìn)一步證明。

綜合本研究結(jié)果看出,利用意大利地中海水牛凍精與我國摩拉、尼里以及本地水牛進(jìn)行人工授精,受胎效果較好。這表明引進(jìn)地中海水牛凍精開展雜交組合研究,改良我國現(xiàn)有的水牛品種,提高其生產(chǎn)性能是切實(shí)可行的。

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[5]Baruselli P S.Control of follicular development applied to reproduction Biotechnologies in buffalo[J].In:Proc I Congresso Nazionale sull'allevamento del bufalo;2001.p.128-46.

[6]周歧生.我對(duì)水牛輸精工作的一些心得體會(huì)[J].廣西畜牧獸醫(yī),2004,20(2):61-64.

[7]李忠權(quán).水牛繁殖季節(jié)及情期適時(shí)輸精的研究[J].廣西畜牧獸醫(yī),2007,23(3):116-117.

[8]吳 師,賓娟容,張玉西,等.廣西水牛發(fā)情特點(diǎn)及適時(shí)輸精的研究[J].中國草食動(dòng)物,2007,27(6):34-35.