陳永忠,李俊平,李啟紅,楊承槐,汪 洋,夏業(yè)才

(1.青海省西寧市畜牧獸醫(yī)站,青海西寧810003;2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京海淀100081)

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病。根據(jù)致病性的不同將禽流感分為高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病,我國將其列為一類動(dòng)物疫病[1]。近幾年來,禽流感在世界各地反復(fù)出現(xiàn),2004年亞洲發(fā)生了高致病性禽流感,2006年底和2007年初東南亞又出現(xiàn)疫情,并發(fā)現(xiàn)了人感染禽流感。我國養(yǎng)禽業(yè)也一直受到禽流感的威脅。因此,它不僅給畜牧業(yè)造成了巨大的損失,而且給人們的公共衛(wèi)生安全帶來了嚴(yán)重的威脅。

疫苗免疫仍是預(yù)防禽流感的有效手段之一,被一些國家和地區(qū)采用[2-4]。有關(guān)禽流感疫苗的免疫效果及抗體消長規(guī)律國內(nèi)學(xué)者做了一些研究工作[5-8],但作為我國現(xiàn)階段使用的主要疫苗,重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株。以下簡稱禽流感二價(jià)苗)免疫雞、鴨的抗體動(dòng)態(tài)變化尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)取該疫苗3批,按H5N1的免疫方法和程序免疫商品雞、鴨,定期采血測(cè)定血清HI抗體效價(jià),研究禽流感二價(jià)苗免疫雞、鴨后HI抗體消長規(guī)律及其差異,以期為該疫苗的推廣使用提供科學(xué)的試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 1周齡海藍(lán)褐雞,購自北京平谷種雞場(chǎng);1周齡北京麻鴨,購自北京平谷種鴨場(chǎng)。

1.2 疫苗 重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)三批,批號(hào)分別為200807、200808 、200809,哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)。

1.3 血凝抑制(HI)試驗(yàn)用抗原 禽流感病毒H5亞型HI試驗(yàn)抗原(H5,Re-4),批號(hào):200702,哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn);禽流感病毒H5亞型HI試驗(yàn)抗原(H5Re-5),批號(hào):200801,哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)陽性血清 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.5 儀器 一次性V型血凝板,微量移液器,微量振蕩器,離心機(jī)。

1.6 主要試劑 0.1 mol/L PBS(pH 7.2),阿氏液,1%雞紅細(xì)胞懸液(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

1.7 分組和接種 將新購進(jìn)的1周齡海藍(lán)褐雞和北京麻鴨分別隨機(jī)分成4組,每組10只。待雞和鴨禽流感母源抗體消失后,將禽流感二價(jià)苗免疫接種,每批次一組對(duì)應(yīng)頸部皮下注射0.5 mL/只,鴨首免3周后加強(qiáng)免疫1次,劑量 0.5 mL/只。

1.8 采血 雞鴨免疫后每2周翅靜脈采血(1 mL/只)并分離血清。

1.9 HI抗體效價(jià)測(cè)定 按照“重組禽流感病毒H5亞型雙價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程”中血凝抑制試驗(yàn)(HI)操作技術(shù)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 疫苗免疫雞后的HI抗體消長情況 禽流感二價(jià)苗可有效刺激產(chǎn)生HI抗體,而且不同批次的疫苗所致的HI抗體效價(jià)的消長規(guī)律基本一致。免疫后2周,HI抗體效價(jià)達(dá)到4.1 log2～4.7 log2,第4周各組 HI抗體效價(jià)均達(dá)到最高值 8.8 log2～10.1 log2。各組HI抗體效價(jià)從第6周開始下降,第8周以后下降相對(duì)較緩慢。第16周內(nèi)能夠維持較高的抗體水平,第20周以后抗體水平衰減到4 log2以下。不同批次的疫苗免疫組各個(gè)采樣點(diǎn)的抗體效價(jià)t檢驗(yàn)差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 疫苗免疫鴨后HI抗體消長情況 不同批次的禽流感二價(jià)苗均能有效地刺激鴨產(chǎn)生HI抗體,而且HI抗體效價(jià)的消長規(guī)律一致。免疫后第2周HI抗體效價(jià)達(dá)到 2.7 log2～4.0 log2,第 4周達(dá)到4.0 log2～5.6 log2,加強(qiáng)免疫(首次免疫后第3周)后,各免疫組鴨HI抗體效價(jià)迅速升高,在加強(qiáng)免疫后第3周(首次免疫后第6周)達(dá)到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗體效價(jià)在第8周以后開始下降。首次免疫后第16周抗體水平5.2 log2～5.9 log2之間,首次免疫后第20周以后抗體水平均在4log2以下。不同批次的疫苗免疫組各個(gè)采樣點(diǎn)的抗體效價(jià)t檢驗(yàn)差異不顯著(P＞0.05)。

3 分析和討論

3.1 雞免疫禽流感二價(jià)苗后4周HI抗體效價(jià)均達(dá)到最高值8.8 log2～10.1 log2。各組HI抗體效價(jià)從第6周開始緩慢下降,第20周以后抗體水平衰減到4 log2以下,此時(shí)不足以抵御外界病毒侵襲[6],所以對(duì)于受威脅地區(qū)的雞,建議每4個(gè)月應(yīng)免疫1次。這與陳坤永等[7]種鴿免疫禽流感疫苗后抗體維持在保護(hù)水平的持續(xù)時(shí)間相同。

3.2 鴨首次免疫后第2周 HI抗體效價(jià)達(dá)到2.7 log2～4.0 log2,第 4周達(dá)到 4.0 log2～5.6 log2,低于同期免疫雞的抗體效價(jià)。加強(qiáng)免疫后,免疫組鴨HI抗體效價(jià)迅速升高,首次免疫后第6周(加強(qiáng)免疫后3周)達(dá)到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗體效價(jià)在首次免疫后第8周開始下降,第20周后抗體水平均降至4 log2以下,此時(shí)不足以抵御外界病毒侵襲[6]。所以,鴨加強(qiáng)免疫后才能達(dá)到較高的抗體水平,而且可靠保護(hù)期為4個(gè)月。

3.3 同時(shí)期內(nèi)相應(yīng)免疫組的HI抗體效價(jià)Re-4株均稍高于Re-5株,這可能與疫苗在制備過程中的抗原量配比有關(guān)。由于禽流感二價(jià)苗對(duì)雞和鴨的免疫程序不同,雞免疫該疫苗4周后抗體水平達(dá)到高峰(8.8 log2～10.5 log2)。而鴨首免該疫苗4周后抗體水平在4.0 log2～5.6 log2,加強(qiáng)免疫后3周抗體水平達(dá)到高峰(8.9 log2～9.4 log2),首次免疫第8周后鴨的免疫抗體水平比雞的下降得稍快,說明雞的免疫效果好于鴨,這與何長生等[8]對(duì)重組禽流感滅活疫苗(H5N1亞型,Re-1)免疫雞鴨后所作的調(diào)查結(jié)果相一致。

3.4 許多人認(rèn)為禽流感病毒不易引起水禽發(fā)病,有一些水禽養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)禽流感的防治不太重視,只免疫1次甚至不免疫。劉超男等[9]的研究表明,禽流感病毒不僅對(duì)雞具有高致病性,而且對(duì)鴨也具有高致病性。因此,水禽養(yǎng)殖場(chǎng)不能忽視對(duì)禽流感的防控,加強(qiáng)疫苗免疫注射。本試驗(yàn)表明,鴨1次免疫禽流感二價(jià)苗后,抗體水平難以達(dá)到有效保護(hù)范圍內(nèi),只有加強(qiáng)免疫后,抗體才能保持在較高水平。

3.5 由于受國家有關(guān)涉及 HPAI研究要求的限制,本次研究未進(jìn)一步做攻毒保護(hù)試驗(yàn),有關(guān)重組禽流感病毒H5亞型雙價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)對(duì)雞和鴨HPAI的攻毒保護(hù)情況沒有繼續(xù)進(jìn)行。關(guān)于這種疫苗對(duì)雞和鴨的攻毒保護(hù)情況還有待進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

[1]世界動(dòng)物衛(wèi)生組織.哺乳動(dòng)物、禽、蜜蜂 A和B類病診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)[M].農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局,譯.北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2002:197-206.

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