宋更申，周 麗，孫玉靜

（1.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011； 2.沈陽(yáng)華泰藥物研究所，遼寧 沈陽(yáng) 110300）

羥乙基淀粉（hydroxyethyl starch）是廣泛應(yīng)用于臨床的環(huán)保型血漿代用品，由玉米淀粉經(jīng)酸水解、羥乙基化制成。羥乙基淀粉在水解、羥乙基化過(guò)程中，使用了甲醇、環(huán)氧乙烷兩種溶劑。本試驗(yàn)根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）[1]的指導(dǎo)原則和2005年版《中國(guó)藥典（二部）》[2-3]的相關(guān)規(guī)定，以及文獻(xiàn)[4-5]，采用頂空氣相色譜法，以水為溶劑，同時(shí)測(cè)定上述2種溶劑。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀，7694E型頂空進(jìn)樣器及Agilent B.02.01-SR1工作站（美國(guó)安捷倫公司）。羥乙基淀粉130/0.4（石家莊華康制藥有限公司，批號(hào)分別為050222，050225，050228）；甲醇、環(huán)氧乙烷均為色譜純；試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱為 DB-FFAP毛細(xì)管柱（30 m ×0.53 mm，1.5 μm）；柱溫為90℃；FID檢測(cè)器，溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比為1∶1，進(jìn)樣口溫度180℃；載氣為氮?dú)?，流?.0 mL/min；頂空進(jìn)樣，平衡溫度90℃，平衡時(shí)間為30 min，頂空瓶加壓時(shí)間為0.2 min，進(jìn)樣時(shí)間為1 min，定量環(huán)體積1 mL，定量環(huán)溫度100℃，傳輸線溫度110℃。氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取環(huán)氧乙烷10 mg，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，精密稱取甲醇300 mg，置同一量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密稱取樣品0.5 g，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水5 mL，密封，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品貯備液 2，3，5，10，20，50 mL，置50 mL量瓶中，分別用水稀釋至刻度，精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，依法測(cè)定，以峰面積 A為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，以 S/N=3計(jì)算各溶劑的檢測(cè)限。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回歸方程和線性范圍（n=6）

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果甲醇、環(huán)氧乙烷峰面積的 RSD分別為 2.1%和 3.2% （n=6）。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為050222）約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水5 mL，密封，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果樣品中甲醇含量為0.1%，RSD為1.68%（n=6），環(huán)氧乙烷均未檢出。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號(hào)為050222）0.5 g，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別精密加入對(duì)照品貯備液 0.4，0.5，0.6 mL，各 3份，再分別用水稀釋至 5.0 mL，密封，搖勻，依法進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果甲醇和環(huán)氧乙烷的平均回收率分別為98.8%和98.9%，RSD分別為1.69%和2.01%（n=9）。

2.4 樣品測(cè)定

取3批樣品，依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算兩組分含量。結(jié)果批號(hào)為050222，050225，050228的3批樣品中甲醇?xì)埩袅烤鶠?.1%，低于ICH限度規(guī)定的0.3%，而環(huán)氧乙烷均未檢出。

3 討論

羥乙基淀粉易溶于水，不溶于DMF及DMSO等有機(jī)溶劑。采用頂空進(jìn)樣法，可以通過(guò)控制溫度使待測(cè)溶劑有效氣化，避免了直接進(jìn)樣時(shí)樣品和水對(duì)進(jìn)樣口及色譜柱的污染，同時(shí)也減小了主成分對(duì)分離測(cè)定的干擾。厚液膜的毛細(xì)管柱可使分離的效果及靈敏度更有效地得到改善。該法的分離度、精密度、準(zhǔn)確度均達(dá)到了2005年版《中國(guó)藥典（二部）》的相關(guān)要求。

試驗(yàn)考察了不同的頂空溫度和頂空時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響，結(jié)果樣品在70，80，90℃的頂空溫度下均穩(wěn)定，在2000年版《中國(guó)藥典（二部）》中環(huán)氧乙烷的限度為10×10-6，為了提高環(huán)氧乙烷的靈敏度，故選擇90℃作為頂空溫度。本品在30，40 min的頂空平衡時(shí)間內(nèi)得到的峰面積基本一致，故選擇30 min作為頂空平衡時(shí)間。

[1]ICH指導(dǎo)委員會(huì).藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求-質(zhì)量部分[M].周海鈞，主譯.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：343.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：54-57.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：64-65.

[4]吳翠栓，吳 濤.羥乙基淀粉130/0.4的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志，2005，14（8）：981-983.

[5]羅 逸，劉菊蓉，郭興蓬，等.合成產(chǎn)物羥乙基淀粉主要質(zhì)控指標(biāo)研究[J].藥物分析雜志，2004，24（3）：296-298.