鄭亞兵，馬勝林 ，姜初明 ，孔祥鳴，周衛(wèi)民

（1.浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江 杭州 310004； 2.浙江中醫(yī)藥大學，浙江 杭州 310053）

癌性惡病質(zhì)是癌癥晚期的一個重要并發(fā)癥，60%～80%的晚期腫瘤患者都存在此綜合征，是癌癥患者死亡的重要原因，約占50%以上[1]。筆者采用腫瘤特異性腸內(nèi)免疫營養(yǎng)物supportan治療小鼠癌性惡病質(zhì)，觀察其生理狀況并對與癌性惡病質(zhì)相關(guān)的血清細胞因子加以分析，探討supportan的治療作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物與試藥

清潔級C57小鼠[合格證號為SCXY（滬）2003-0003，中國科學院上海實驗動物中心]40只，雌雄各半，體重18～20 g，近交系。Lewis肺癌細胞株（中國科學院上海實驗動物中心）。supportan（華瑞制藥有限公司，批號為050908）；醋酸甲羥孕酮（南京先河制藥有限公司，批號為20051106，用蒸餾水配置成質(zhì)量濃度為3 mg/mL的溶液）；白細胞介素 1α（IL-1α）試劑盒（批號為 EK0391），白細胞介素 6（IL-6）試劑盒（批號為 EK0411），腫瘤壞死因子 α（TNF- α）試劑盒（批號為EK0527），均由博士德公司提供。

1.2 試驗方法

建立癌性惡病質(zhì)動物模型：在無菌條件下，剝離Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤塊，用手術(shù)刀切取瘤塊外周供血豐富的瘤塊組織，剪碎，放入細胞勻漿器中勻漿，將勻漿液用200目過濾網(wǎng)過濾，取過濾液顯微鏡下計數(shù)并調(diào)整濃度到1×107個瘤細胞（活細胞），取制好的瘤細胞混懸液接種于C57小鼠右上肢腋窩皮下處，每只0.1 mL（1×107個瘤細胞）。接種第8天各荷瘤組出現(xiàn)瘤塊；接種第14天后，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現(xiàn)厭食、虛弱、衰竭，進入惡病質(zhì)狀態(tài)。

分組及試驗方法：將40只小鼠隨機均分成4組，非荷瘤空白對照（NTB）組、癌性惡病質(zhì)（CC）組、supportan（ST）組、醋酸甲羥孕酮治療（MPA）組，每組10只。取0.1 mL細胞混懸液按常規(guī)方法接種于CC，ST，MPA 3組小鼠的右上肢腋窩皮下，NTB組小鼠同部位注射等量生理鹽水。接種14 d后惡病質(zhì)狀態(tài)出現(xiàn)，ST組予supportan腸內(nèi)免疫營養(yǎng)治療，200 mL/kg，灌胃，連續(xù)10 d；MPA組予醋酸甲羥孕酮，120 mg/kg灌胃，連續(xù)10 d。除ST組予supportan腸內(nèi)免疫營養(yǎng)外，其余各組均予同一飼料和自來水飲食。

1.3 觀察與測定指標

每2天稱重1次，精確到0.1 g，稱重時間選在上午8點至10點，各接種腫瘤組小鼠體重為除去瘤重（按腫瘤體積計算）后的體重。皮下接種第8天開始用游標尺測定腫瘤的三徑，公式為腫瘤體積（V）=π/6·L·W·D。其中 L，W，D分別代表腫瘤的長、寬、深。取小鼠眼眥靜脈血，放置1 h左右，待凝后經(jīng)2 500 r/min離心15 min，即得小鼠血清標本，置-20℃凍存?zhèn)錂z。用ELISA試劑盒測定（博士德公司，測定方法根據(jù)試劑盒說明）TNF-α，IL-1，IL-6。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

荷瘤組小鼠接種Lewis肺癌瘤細胞第8天右腋下出現(xiàn)瘤塊；接種第14天后，瘤塊明顯增大，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現(xiàn)厭食、活動減少，進入惡病質(zhì)狀態(tài)；第21天，CC組小鼠較其他組小鼠明顯消瘦，活動減少，攝食量下降，體重下降明顯，并有1只雌性小鼠死亡；第24天，荷瘤組小鼠更加虛弱，攝食量減少，以CC組更明顯。各組小鼠體重變化見表1?？梢姡?4天CC組、ST組、MPA組小鼠體重明顯較NTB組下降，差異有顯著性（P＜0.05）。治療后ST組、MPA組小鼠在第18天體重無明顯下降，與CC組比較有顯著性差異（P＜0.05），第24天有非常顯著性差異（P＜0.01），提示經(jīng)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)治療和醋酸甲羥孕酮治療后體重無明顯下降。

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

注：與 NTB組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與 CC組比較，□P＜0.05，■P ＜0.01（下表同）。

第24天23.47±0.58 16.10±1.85 20.03±1.32■20.04±1.16■組別NTB組CC組ST組MPA組第8天21.78±0.75 21.09±1.46 20.96±2.74 20.94±2.20第14天22.47±0.62 20.52±2.29△20.31±1.88▲20.51±2.31△第18天22.83±0.71 18.62±1.20 20.09±1.35□20.22±1.75□

血清細胞因子測定結(jié)果見表2?？梢姡琁L-1，IL-6及TNF-α CC組、ST組、MPA組較NTB組均有不同程度升高，CC組升高最明顯（P＜0.01）；用藥后ST組及MPA組較CC組明顯下降，有顯著性差異（P＜0.05）；ST組與MPA組相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 各組小鼠血清細胞因子測定結(jié)果（± s，pg/mL）

表2 各組小鼠血清細胞因子測定結(jié)果（± s，pg/mL）

組別NTB組CC組ST組MPA組IL-1 14.67±5.68 32.93±14.69▲22.89±6.18△□21.27±7.74△□IL-6 69.87±27.73 126.32±30.63▲85.79±19.48□92.63±31.18□TNF-α 63.42±12.94 89.03±12.90▲75.89±9.83△□73.97±10.82□

3 討論

癌癥患者發(fā)生惡病質(zhì)的一個重要原因是營養(yǎng)底物代謝異常[2]。碳水化合物代謝異常主要表現(xiàn)為糖異生增加和胰島素敏感性下降引起的葡萄糖利用下降。脂肪代謝異常表現(xiàn)為脂肪動員（包括脂肪降解和脂肪酸氧化）增加。腫瘤細胞由于缺乏脂肪代謝的關(guān)鍵酶，因此對脂肪利用障礙，主要利用葡萄糖作為能量來源。由于乳酸和成糖氨基酸大量糖異生時需要消耗大量的熱量，致使基礎代謝增加，蛋白分解加速。

在一些惡病質(zhì)模型中，細胞因子IL-1，IL-6，TNF-α與惡病質(zhì)的嚴重程度呈正相關(guān)。Bossola等[3]的研究中，TNF-α被認為是導致惡病質(zhì)的一個重要因子，持續(xù)靜脈注射TNF-α可引起試驗動物厭食、體重減輕、蛋白質(zhì)和脂肪分解。本研究證實，IL-1，IL-6，TNF-α均隨著小鼠的去瘤體重下降而升高。因TNF-α能抑制脂蛋白脂酶（LPL）活性，由此推測IL-1和IL-6兩種細胞因子也能抑制LPL活性，增加脂肪分解，降低蛋白質(zhì)合成，從而導致小鼠體重減輕，出現(xiàn)惡病質(zhì)。應用IL-1受體拮抗劑、抗IL-6抗體均可抑制惡病質(zhì)的進一步發(fā)展[4]。

目前，尚無有效的治療方法可以逆轉(zhuǎn)進行性消瘦。近年來研究表明，免疫營養(yǎng)對腫瘤手術(shù)患者的免疫和炎性反應具有調(diào)節(jié)作用，可以減少手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生[5]。supportan是根據(jù)癌癥患者的代謝特點而設計的腸內(nèi)免疫營養(yǎng)制劑，其組成特點是高熱量密度，高蛋白、高脂肪含量（占熱量的50%），富含免疫營養(yǎng)物ω-3脂肪酸、核苷酸和抗氧化劑維生素A，E，C。ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA）被認為在減緩腫瘤生長和癌性惡病質(zhì)方面具有一定的治療效果，其可能機制在于抑制NF-κB以減少環(huán)氧化酶2（COX-2）的表達，減少由NF-κB誘導產(chǎn)生的其他細胞因子對腫瘤細胞的促進作用。ω-3脂肪酸同時具有強有力的抗炎作用，可以抑制免疫抑制物前列腺素E2（PGE2）的產(chǎn)生。核苷酸具有免疫增強作用，可以提高腫瘤患者的免疫功能[6]。維生素E、維生素C可以幫助清除氧自由基，對手術(shù)創(chuàng)傷引起的缺血-再灌注損傷具有防治作用[7]。

由本試驗結(jié)果可知，supportan具有明顯抑制體重下降，明顯下調(diào)與癌性惡病質(zhì)發(fā)生相關(guān)的細胞因子TNF-α，IL-1，IL-6的血清水平，其抗癌性惡病質(zhì)的作用機理與其配方符合腫瘤患者的代謝特點。與甲羥孕酮相比，無論是在改善攝食量、增加體重方面還是在下調(diào)細胞因子水平方面都無顯著性差異，這肯定了supportan抗癌性惡病質(zhì)的作用。

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[2]De Blaauw I，Deutz NEP，Von Meyenfeldt MF.Metabolic changes in cancer cachexia:first of two parts[J].Clin Nutr，1997，16（4）:169-176.

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[4]Strassmann G，F(xiàn)ong M，Kenney JS，et al.Evidence for the involvement of interleukin 6 in experimental cancer cachexia[J].J Clin Invest，1992，89（5）:1 681-1 684.

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