李楚潮

ELISA,RPR、Trust、TPPA四種方法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析

李楚潮

目的 比較臨床常用的四種梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的特異性和敏感性，探討四種篩查方法的應(yīng)用價(jià)值。方法 對(duì)梅毒患者血清標(biāo)本共1053份及對(duì)照組非梅毒患者血清2098份分別進(jìn)行梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)、梅毒快速血漿反應(yīng)素(RPR)法檢測(cè)。結(jié)果 ELISA，RPR，Trust及TPPA法檢測(cè)梅毒病人血清陽(yáng)性率分別為96.6%，80.2%，86.7%及96.6%。結(jié)論四種方法側(cè)重點(diǎn)各有不同，應(yīng)結(jié)合實(shí)踐情況配合使用，最大程度提高檢出率，降低誤診漏診率。

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)；梅毒快速血漿反應(yīng)素；梅毒抗體

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum，TP)感染所致的性傳播疾病。本病幾乎侵害全身各個(gè)器官，主要通過(guò)血液傳播和性接觸傳播[1]。梅毒的唯一傳染源是梅毒患者，患者的皮損、血液、精液、乳汁和唾液中均有TP存在。同時(shí)，梅毒易造成神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等全身各組織器官的病變，危及生命，并可使艾滋病病毒傳播的危險(xiǎn)性增加3～5倍，是一種危害十分嚴(yán)重的慢性傳染病。因此，早期確診，及時(shí)治療，不僅能使患者獲得良好的療效，并能防止性病的傳播。

近年來(lái)，梅毒發(fā)病率呈逐年上升之勢(shì)，成為危害人類(lèi)健康的主要疾病之一，且其臨床表現(xiàn)極其復(fù)雜，易被誤診或漏診，臨床上易被漏診或誤診為銀屑病、斑禿等皮膚病。因此，梅毒的診斷結(jié)果對(duì)病情的判斷就顯得至關(guān)重要[2]。目前，梅毒檢測(cè)應(yīng)用最普遍的檢測(cè)方法是梅毒血清學(xué)檢查，包括ELISA、TPPA、TRUST、RPR四種，但無(wú)論哪一種方法都無(wú)法做到早期、快速、正確、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)地檢測(cè)出梅毒。本文就這四種檢測(cè)方法對(duì)梅毒的檢出率和假陽(yáng)性率進(jìn)行比較分析。

1 資料

1.1 標(biāo)本來(lái)源 從筆者所在醫(yī)院2004～2008年門(mén)診患者中，提取檢測(cè)組梅毒患者血清標(biāo)本1053份，及對(duì)照組非梅毒患者血清2098份?；颊咧心?02例，女451例，年齡分布17歲至68歲；對(duì)照組男1026例，女1072例，年齡分布16歲至81歲。兩組患者一般資料上不具有顯著差異(P＞0.05)，具有可比性。兩組標(biāo)本隨機(jī)各分成四組，分別進(jìn)行四種方法檢測(cè)。

標(biāo)本靜脈血3ml均采用真空采血管收集，加入3.2%檸檬酸鈉抗凝劑，用羥乙基淀粉兩次離心分離部分紅細(xì)胞和多余的血漿，于-20℃冰箱內(nèi)保存。

1.2 試劑儀器 試劑：RPR試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司)，ELISA試劑盒(廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司)，TRUST試劑盒(上海榮盛科技有限公司)，TPPA試劑盒(日本富士公司)。

儀器：全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)(TECAN RMP200)、振蕩器、離心機(jī)等。

2 方法

TPPA、TRUST、RPR試劑均在有效期內(nèi)使用，ELISA法按照說(shuō)明書(shū)在全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)TECAN RMP200編制運(yùn)行程序進(jìn)行檢測(cè)。所有檢測(cè)操作程序和結(jié)果判斷均按試劑及儀器說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格執(zhí)行，統(tǒng)計(jì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)歸檔，以便后期分析和對(duì)比，具體如下：

2.1 TPPA檢測(cè) 取50μL待測(cè)血清和TPPA混合，用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與血清中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)[3]。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察。該方法對(duì)梅毒特異性抗體檢測(cè)具有高度特異性和敏感性，是目前公認(rèn)的梅毒確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。但該法操作比較復(fù)雜，結(jié)果判定需人工而不能用于自動(dòng)化，限制了其用于大規(guī)模標(biāo)本的篩查。

2.2 ELISA檢測(cè) 利用純化的梅毒螺旋體的重組蛋白為抗原以包被固相板條，加梅毒血清和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人體IgG抗體，利用全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)檢測(cè)患者血清中的特異性的梅毒抗體數(shù)量。此方法可應(yīng)用于自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)，可以進(jìn)行大批量的檢測(cè)，是目前篩查和檢測(cè)梅毒的一種良好方法。

2.3 RPR檢測(cè) 在23～29℃室溫中將RPR抗原懸液一滴加入50μL待測(cè)血清中，用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)紙卡8min，然后3min內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。RPR存在非特異性，某些疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，水痘，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病，瘧疾，以及妊娠等都可由于產(chǎn)生非特異性抗體而引起假陽(yáng)性，所以RPR只能作為篩選試驗(yàn)。但RPR的滴度可作為梅毒治療的監(jiān)測(cè)，判斷復(fù)發(fā)和再感染的指標(biāo)。

表1 四種檢測(cè)方法診斷結(jié)果

2.4 TRUST檢測(cè) 該檢測(cè)方法是使用卵磷脂、心磷脂以及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗(yàn)，TRUST中加入了甲苯胺紅顆粒，可使陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)紅色絮狀凝集。故于紙卡中置入TRUST試劑和50μL待測(cè)血清混勻，10分鐘后觀察紅色絮狀凝集現(xiàn)象。由于TRUST試驗(yàn)在梅毒診斷上出現(xiàn)較高假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，有研究認(rèn)為T(mén)RUST已不再適合作為梅毒篩選試驗(yàn)。

3 結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

TPPA及ELISA在陽(yáng)性及假陽(yáng)性檢出率上，均優(yōu)于TRUST及RPR。且經(jīng)卡方檢驗(yàn)，TPPA與ELISA，RPR與TRUST均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

4 討論

梅毒螺旋體進(jìn)入機(jī)體后產(chǎn)生兩種抗體：一種是非特異性抗體(抗心磷脂體),一種是特異性抗體(抗密螺旋體抗體),目前臨床上檢測(cè)梅毒的方法有非特異性抗體和特異性抗體檢測(cè)兩種方法,非特異性抗體檢測(cè)有RPR、TRUST法等；特異性抗體檢測(cè)有ELISA、TPPA法等[4]。

TPPA是目前公認(rèn)的較好的梅毒確認(rèn)方法，具有很高的敏感性和特異性。因?yàn)槿梭w被梅毒螺旋體感染后，此抗體可在體內(nèi)持續(xù)存在，終身保留，所以TPPA檢測(cè)結(jié)果不隨病情發(fā)展變化，且對(duì)各期梅毒的檢測(cè)結(jié)果都有較好的穩(wěn)定性，不易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)[5]，故TPPA通常作為梅毒的確診試驗(yàn)。本組TPPA檢測(cè)陽(yáng)性率高達(dá)96.60%，假陽(yáng)性率只有0.38%。但TPPA需用肉眼判斷結(jié)果，無(wú)法保存原始數(shù)據(jù)，并且試劑昂貴，操作復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)需將樣本作系列稀釋?zhuān)焕诖笈繕颖竞Y查，也不能用于療效判斷。

ELISA檢測(cè)特異性和靈敏度均較高，是一種基于基因工程的特異性檢測(cè)技術(shù)[6]。因?yàn)樘禺愋钥贵w在梅毒的潛伏期即產(chǎn)生(約感染后2w)，故該法對(duì)梅毒早期輔助診斷較好，可作為檢驗(yàn)科的常規(guī)操作技術(shù)，且試劑價(jià)格比較便宜，操作簡(jiǎn)便。其主要缺陷是該法檢測(cè)的是梅毒IgG和IgM的混合抗體，梅毒IgG抗體在治愈后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)仍然存在較高的陽(yáng)性率，甚至可能終生陽(yáng)性，因此ELISA陽(yáng)性只說(shuō)明曾經(jīng)感染過(guò)或正在感染，而無(wú)法判斷疾病活動(dòng)狀況，故不能作為療效監(jiān)測(cè)手段。

RPR檢測(cè)是用于梅毒診斷的初篩試驗(yàn)。其檢測(cè)原理是檢查梅毒患者血清中的非特異性反應(yīng)素，由于該反應(yīng)素一般在軟性下疳出現(xiàn)4w后才能檢出，而且經(jīng)治療后，滴度可能迅速下降，同時(shí)在疾病非活動(dòng)期和治療后容易消失，故該法對(duì)第二、第三期梅毒以及治療后梅毒的檢出率均低，結(jié)果易受梅毒之外疾病及試驗(yàn)條件影響[7]。其特異性、靈效度較低，易漏檢，本組RPR檢出率僅為80.20%，假陽(yáng)性檢出率達(dá)1.34%。該法用需目測(cè)法判定結(jié)果，故不能單憑此法診斷是否梅毒感染，但可作為判定治愈、再感染或是否復(fù)發(fā)的判定指標(biāo)。

TRUST溶劑是非特異性梅毒篩選試驗(yàn)，采用牛心中提取的脂質(zhì)，組成VDRL抗原懸浮于含有特制的甲苯胺紅溶液制成，用于檢測(cè)血清中的反應(yīng)素。與PRP一樣，其結(jié)果易受自身免疫性疾病及某些傳染病等因素干擾。有研究表明，在無(wú)梅毒感染史的人群中陽(yáng)性率達(dá)0.11%，在70歲以上高齡老人中也有1%會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性[8]。由于TRUST試驗(yàn)在梅毒診斷上出現(xiàn)較大誤差，許多學(xué)者認(rèn)為T(mén)RUST已不再適合作為梅毒篩選試驗(yàn)。但TRUST試驗(yàn)滴度與病程有關(guān)，當(dāng)感染者梅毒復(fù)發(fā)時(shí)則會(huì)轉(zhuǎn)陽(yáng)，滴度升高，在疾病處于非活動(dòng)期或接受治療后，滴度下降。所以根據(jù)其滴度變化，TRUST法有助于判斷梅毒再感染及復(fù)發(fā)，在觀察病程方面有重要價(jià)值。

綜上所述，梅毒診斷是比較復(fù)雜的檢測(cè)過(guò)程，不確定因素會(huì)對(duì)診斷產(chǎn)生明顯影響。在實(shí)踐中，應(yīng)聯(lián)合多種實(shí)驗(yàn)方法同時(shí)進(jìn)行，相互校正，提高檢出率，最大限度的降低漏檢和誤診，以便梅毒患者能及時(shí)得到診治[9]。

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Objective To compare the specif i city and sensitivity of four kinds of commonly used clinical tests of TP, to discuss application value of these four screening method. Methods Apply the ELISA, RPR, Trust, TPPA methods to 1053 serum samples from syphilis patients and 2098 serum samples from control group. Results The positive rate of ELISA, RPR, Trust, TPPA are 96.6%, 80.2%, 86.7% and 96.6%. Conclusion These four methods have different advantages. They should be used in conjunction with the situation in practice, to maximize the detection rate and reduce the misdiagnosis rate of misdiagnosis.

ELISA; TPPA; TRUST; RPR; TP

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.20.006

523000 廣東省泗安醫(yī)院 (李楚潮)