呂麗娟，劉淑聰，龔寧波，馬林，呂揚

（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院/中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京市 100050）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)從其建立、發(fā)展到今天，在各個行業(yè)、領(lǐng)域的應(yīng)用中扮演著越來越重要的角色。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用不僅是確保產(chǎn)品質(zhì)量的基本要求，而且為材料試驗和化學(xué)分析等提供了測量基準(zhǔn)，并確保了測量方法的溯源性以及可比較性。然而，目前我國尚缺少賦予不確定度的中藥材有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本論文為該項研究中的部分內(nèi)容，以中藥材為對象，選擇了絕對分析方法-重量法-雙人定值，評定其總灰分測定結(jié)果的不確定度。

總灰分系指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化后殘留的無機物?？偦曳殖幬锉旧硭瑹o機鹽（稱為生理灰分）外，還包括泥土、砂石等藥材外表黏附的無機雜質(zhì)（稱為外來雜質(zhì)）。因此，測定總灰分的目的主要是控制藥材中泥土、砂土的量，同時還可以反映藥材生理灰分的量[1]。各國藥典均收載藥材總灰分的檢查方法，并不得超過一定的限量，可見總灰分測定的意義重大。

1 材料

1.1 儀器

SX2.5-10型箱式電阻爐（上海樹立儀器儀表有限公司）；XS105型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；坩堝（常規(guī)）；干燥器（常規(guī)）。

1.2 試藥

穿山龍（產(chǎn)地河北）、梔子（產(chǎn)地江西）、夏枯草（產(chǎn)地山西），經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所馬林教授鑒定，分別為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的干燥根莖、茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實、唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。

中藥材樣品均經(jīng)凈制、粉碎、過篩處理，其中穿山龍樣品過65目篩，梔子樣品過65目篩，夏枯草樣品過24目篩。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

雙人（甲、乙）獨立操作。分別精密稱取供試中藥材標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.3 g，共10份，置熾灼至恒重的坩鍋中，稱定質(zhì)量，緩慢熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣質(zhì)量，計算供試品中總灰分的含量（%）。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2 mL，使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內(nèi)容物完全灰化[2，3]。

2.2 測量數(shù)據(jù)的檢驗（以穿山龍為例計算說明）

各中藥材標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分測定結(jié)果見表1。

通過對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)灰分含量測定得到的甲、乙2組各10個值，經(jīng)格拉布斯（Grubbs）法檢驗，未發(fā)現(xiàn)可疑值。然后進行2次獨立檢測數(shù)據(jù)的t檢驗。

表1 3種中藥材總灰分測定結(jié)果Tab 1 Results of total ash value of 3 kinds of Chinese herbal medicines

查t分布雙側(cè)分位數(shù)表知：當(dāng)f＝18、α＝0.05時，t＝2.101。說明2次獨立檢測數(shù)據(jù)的t值均小于臨界值，表明2次獨立檢測數(shù)據(jù)無顯著性差異。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)值確定（以穿山龍為例計算說明）

將20個值求得的總平均值作為該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分標(biāo)準(zhǔn)值，則穿山龍標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總灰分標(biāo)準(zhǔn)值為1.7167%。

2.4 不確定度評定的數(shù)學(xué)模型[4～7]

不確定度的來源涉及測量的人員、環(huán)境、方法及器具等，總灰分的測定采用重量法，在標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的條件下，溫度、濕度等影響可忽略；測試過程（包括人員操作等）的隨機效應(yīng)、被檢樣品的非均勻性和稱量的變動性等均體現(xiàn)在測量的重復(fù)性中；天平校準(zhǔn)的不確定度可以從檢定證書中獲得；恒重主要影響灰分的質(zhì)量，即m1，可加入到相應(yīng)的質(zhì)量分量中。m1、m2、m3均稱量一次而得，因此，考慮中藥材的總灰分測定中不同因素的影響和重復(fù)性的影響，建立數(shù)學(xué)模型為：

式中，x為中藥材總灰分含量（g·g-1）；m1為恒重坩堝和灰分的質(zhì)量（g）；m2為恒重坩堝的質(zhì)量（g）；m3為恒重坩堝和中藥材樣品的質(zhì)量（g）。

2.5 不確定度計算（以穿山龍為例計算說明）

2.5.2 均勻性產(chǎn)生的不確定度 隨機抽取裝有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的安瓿15支（每支1 g），以0.3 g為取樣量，每支取樣3份，同法測定總灰分，利用單因素方差分析進行樣品均勻性檢驗，3種中藥材均勻性檢驗結(jié)果見表2。

表2 3種中藥材均勻性檢驗結(jié)果Tab 2 Results of uniformity test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

其中，MS組間為組間均方；MS組內(nèi)為組內(nèi)均方；SS組間為組間離差平方和；SS組內(nèi)為組內(nèi)離差平方和；ν組間為組間自由度；ν組內(nèi)為組內(nèi)自由度。

因此，由均勻性產(chǎn)生的不確定度（SH）按照《國際標(biāo)準(zhǔn)化組織指南35》規(guī)定，按照公式：

2.5.3 穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度 由長期穩(wěn)定性考察可知，斜率的不確定度S（b1）用下式計算：

3種中藥材的穩(wěn)定性檢驗結(jié)果見表3。

表3 3種中藥材穩(wěn)定性檢驗結(jié)果Tab 3 Results of stability test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

2.5.4 相對合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc（x）

2.5.5 擴展不確定度U（x）U（x）＝kuc（x），k取2，U（x）＝2×0.07048%＝0.1410%，P＝95%。

2.5.6 結(jié)果表示 穿山龍標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的灰分值為：（1.72±0.15）%，k＝2，P＝0.95。同理，梔子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及夏枯草標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的灰分值分別為：（4.82±0.21）%和（9.39±0.39）%。3種中藥材總灰分測定不確定度分量匯總見表4。

表4 3種中藥材總灰分測定不確定度分量匯總Tab 4 Uncertainty of total ash of 3 kinds of Chinese herbal medicines

3 討論

灰分測定是對中藥材的雜質(zhì)進行檢查的一種方法，對于中藥材及以藥材粉末直接入藥或為原料的中藥制劑進行灰分檢測，對控制中藥及其制劑質(zhì)量、確保用藥安全有效都有積極意義。

有些中藥材生理灰分差異較大，特別是組織中含草酸鈣較多的藥材，需要測定酸不溶性灰分，從而更準(zhǔn)確地反映出外來雜質(zhì)的量。

由表4可見，測量不確定度分量對評定結(jié)果的總不確定度影響較大，樣品均勻性次之，樣品穩(wěn)定性最小。故而，應(yīng)從減少稱量誤差方面著手以提高測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究方法簡便、可行，在中藥材整體質(zhì)量控制方面具有參考價值，同時也為中藥材有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制提供了基礎(chǔ)研究結(jié)果。

[1]劉文英主編.藥物分析[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：422.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄48.

[3]楊 輝.關(guān)于2005年版《中國藥典》（一部）附錄灰分測定法中操作方法的探討[J].中國藥房，2007，18（7）：547.

[4]全國法制計量技術(shù)委員會編.JJF1059-1999測量不確定度評定與表示[S].1999：1566.

[5]中國合格評定國家認(rèn)可委員會編.CNAS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評估指南[S].2006：7.

[6]Leung KSY，Chan CL，Lau ACK，et al.Measurement uncertainty for total ash and acid-insoluble ash determination of Chinese materia medica[J].Accred Qual Assur，2005，10（6）：289.

[7]朱 嵐，魯 波，劉廣輝.重量分析測量不確定度評定的探討[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志，2005，21（6）：761.