趙 劍，楊思進，蒲清榮，陳玉蘭

（瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000）

蛭龍活血通瘀膠囊是由黃芪、桂枝、大血藤、水蛭、地龍等藥組成的中藥復方膠囊，處方中含有皂苷、黃酮類及氨基酸類等有效成分，主要成分黃芪甲苷[1－2]易溶于甲醇、乙醇、丙醇。筆者綜合考慮藥材性質，采用煎煮法提取，以其黃芪甲苷收率為指標，采用正交設計法研究最佳工藝條件，報道如下。

1 儀器與試藥

Alltech ELSD 2000型檢測器（島津2010A）；BCD－176DA型電冰箱（海爾）；SHH V21型長風三用電熱恒溫水浴箱；ZK072型電熱真空干燥箱。黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110781－200613，供含量測定用）；黃芪、桂枝、大血藤（購于百草堂中藥飲片公司，經(jīng)鑒定全部合格）；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芪甲苷含量測定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：菲羅門C18柱（150 mm×4.60 mm，5μm）；流動相：乙腈－水（32∶68）；柱溫：30℃；流速：1.0mL/L；漂移管溫度：105℃；載氣流速：2.7 L/min；進樣量：10μL。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.2 溶液制備[3－4]

將煎煮液濃縮成干浸膏，精密稱取浸膏2 g，置索氏提取器中，加甲醇50mL，水浴回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇并濃縮至干，殘渣加水10mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20mL，棄去氨試液，蒸干，殘渣加10％乙醇5mL使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂，用水30mL洗脫，棄去洗脫液，再用40％乙醇20mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10mL量瓶中，定容，作為供試品溶液。精密稱取黃芪甲苷對照品1.18mg（60℃減壓干燥24h），置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.1.3 方法學考察

標準曲線繪制：分別精密吸取對照品貯備液0.5，1，2.5，3，5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別注入液相色譜儀。結果黃芪甲苷質量濃度（C）在2.36～23.60μg/mL范圍內(nèi)與峰面積（A）呈良好的線性關系，回歸方程為 A=1.041 6C+0.273，R2=1.000 0（n=5）。

精密度試驗：精密吸取黃芪甲苷對照品溶液（11.80μg/mL）10μL，連續(xù)進樣5次，測定峰面積。結果的 RSD=1.15％（n=5），表明該方法、儀器測定黃芪甲苷的精密度符合要求。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取黃芪甲苷對照品溶液10μL，分別于0，2，4，8，12，24h時注入高效液相色譜儀，結果黃芪甲苷峰峰面積的RSD為1.37％（n=6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：取1號試驗供試品（即加8倍量水、浸泡30min、煎煮1次、煎煮30 min）的煎煮液，按優(yōu)選的黃芪甲苷提取工藝制備并測定。結果黃芪甲苷含量的 RSD=1.28％（n=6），表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗：取1號試驗（即加8倍量水、浸泡30min、煎煮1次、煎煮30min）的煎煮液，照優(yōu)選的黃芪甲苷提取工藝提取，按高、中、低3個量級加入黃芪甲苷對照品適量，依法測定。結果見表1。

2.2 正交試驗

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果（n=6）

黃芪、桂枝、大血藤采用煎煮法提取有效成分，以加水量（倍）為因素A、浸泡時間（min）為因素B、煎煮時間（min）為因素C、煎煮次數(shù)（次）為因素D 4因素3水平，采用L9（4）3正交表設計，因素水平表見表2。正交試驗結果見表3，由表3可知影響因素由大到小排列是C＞D＞B＞A，故提取的最佳方案為A3B2C2D3，其提取量為1.439 1mg/g，即用12倍水量、浸泡60min、煎煮3次、每次60min，可使蛭龍活血通瘀膠囊中黃芪的提取率達到最高且穩(wěn)定。

表2 因素水平表

表3 正交試驗結果表

2.3 驗證試驗

根據(jù)最佳工藝條件，即用12倍量水、浸泡60min、煎煮3次、每次60min，提取3批蛭龍活血通瘀膠囊。測得批號為20091201，20091202，20091203的3批樣品黃芪甲苷收得量分別為1.420 1，1.399 7，1.400 3mg/g。

3 討論

根據(jù)本病病機特點，蛭龍活血通瘀膠囊處方重用補氣藥，提出了“益氣祛風通絡”的治療方法，較以前單一的活血化瘀或以化瘀通絡為主的治療方法，更全面、更加符合中風病的發(fā)病機制；且方中佐以“風藥”，體現(xiàn)了“風藥”清輕流動、善走上位，且能增效的配伍特點。

黃芪甲苷僅在200 nm波長附近有弱的末端吸收，用高效液相色譜－紫外光譜法測定的條件非常嚴格，噪音對其結果影響較大。因此，本研究采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測法進行測定，更為科學。

[1]范可青，劉 偉，熊 慧，等.HPLC－ELSD法測定腦立通合劑中黃芪甲苷的含量[J].臨床合理用藥，2009，2（7）：64－65.

[2]侯 璐.HPLC－ELSD法測定復方養(yǎng)心片中黃芪甲苷的含量[J].天津藥學，2008，20（2）：23－24.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2005：212－213.

[4]歐國燈，楊立偉，蔣忠軍，等.HPLC－ELSD法測定鹿尾補腎丸中黃芪甲苷的含量[J].中藥材，2008，31（8）：1 259－1 260.