鄧小蕓,祁小樂(lè),高玉龍,高宏雷,秦立廷,王永強(qiáng),王笑梅*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 禽傳染病研究室,黑龍江哈爾濱 150001;2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150030;3.黑龍江畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院,黑龍江雙城 150111)

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥流行現(xiàn)狀及檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展*

鄧小蕓1,2,3,祁小樂(lè)1,高玉龍1,高宏雷1,秦立廷1,王永強(qiáng)1,王笑梅1*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 禽傳染病研究室,黑龍江哈爾濱 150001;2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150030;3.黑龍江畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院,黑龍江雙城 150111)

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(RE)是禽類一種重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外雞群中網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)流行比較嚴(yán)重;REV與馬立克病病毒(MDV)、雞貧血病病毒(CAV)和J亞群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)幾種免疫抑制性病毒的混合感染在我國(guó)部分養(yǎng)雞場(chǎng)中均普遍存在,使得雞群處于免疫力低下的狀態(tài),導(dǎo)致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失敗,并容易造成繼發(fā)感染,使疫病的診斷和防控難度加大。另外,REV可以整合到MDV和雞痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因組中,從而導(dǎo)致商品化疫苗受到污染,并可用做將外源基因插入到雞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)載體;基于REV傳統(tǒng)檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上,新型的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)如PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、LAMP提高了診斷REV的敏感性和特異性。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥;流行;感染;基因重組;檢測(cè)技術(shù)

*通訊作者

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(Reticuloendotheliosis,RE)是由網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起雞、鴨、鵝、火雞及其他禽類的,以急性網(wǎng)狀細(xì)胞腫瘤形成、矮小綜合征、淋巴組織和其他組織的慢性腫瘤形成為特征的一群病理綜合征[1]。REV病毒群可分為完全復(fù)制型和不完全復(fù)制型(缺陷型),不完全復(fù)制型T株基因組主要是由于gag-pol基因的大段缺失和env部分缺失所致,其含有1個(gè)0.8 kb～0.9 kb具有轉(zhuǎn)化作用的替代片段V-rel基因,復(fù)制需要一個(gè)輔助病毒即完全T株REV-A。REV分離株存在以下亞型:網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒(REV)、脾壞死病毒(Spleen necrosis virus,SNV)和鴨傳染性貧血病毒(Duck infectious anaemia virus,DIAV)以及雞合胞體病毒(Chick syncytia virus,CSV)。目前已分離到的REV都具有相似的抗原性,只有一個(gè)血清型[2]。

REV感染不僅能引起腫瘤,還可引起感染雞胸腺、法氏囊等免疫器官萎縮,使雞的免疫功能下降、甚至喪失,導(dǎo)致免疫抑制,使感染雞極易繼發(fā)感染其他病毒病和細(xì)菌病。在我國(guó),REV感染及在雞群中造成的危害已相當(dāng)普遍并且愈發(fā)嚴(yán)重。

1 流行現(xiàn)狀

REV感染的自然宿主有火雞、雞、鴨、鵝和日本鶴鶉,該病呈世界性分布。雞和雞胚是最常用的試驗(yàn)宿主。REV有些毒株對(duì)鴨的致病作用比雞更強(qiáng)。REV不僅造成免疫抑制,引起急性腫瘤。研究表明,REV也可以導(dǎo)致腺胃腫瘤病變并表現(xiàn)為腺胃腫大,與馬立克病病毒(Marek＇s disease virus,MDV)協(xié)同或與雞貧血病病毒(Chicken anemia virus,CAV)協(xié)同作用腺胃腫大癥狀就更加明顯[3]。近年,世界各地不斷有REV流行的報(bào)道。調(diào)查表明,韓國(guó)[4]和埃及[5]有34%～75%的雞群有 REV抗體。在臺(tái)灣,2006年對(duì)某一雞群進(jìn)行抗體檢測(cè)和病毒分離,結(jié)果表明16周齡以上雞群的血清中REV抗體陽(yáng)性率達(dá)92.8%(39/42)[6]。在雅典,2006年通過(guò)病毒分離和PCR方法測(cè)得血液或腫瘤樣品中REV陽(yáng)性率為59.5%(28/47),組織中有淋巴肉瘤率為37%(10/27)[7]。

在中國(guó),20世紀(jì) 80年代REV感染僅偶見(jiàn)報(bào)道。近年來(lái),國(guó)內(nèi)一些雞群中REV流行也比較嚴(yán)重。崔治中等[8]對(duì)來(lái)自全國(guó)從南到北5省市9個(gè)公司100個(gè)雞群的約2 400份血清樣品的ELISA檢測(cè)表明,有60%以上的雞群在不同時(shí)期感染過(guò) REV,不同地區(qū)不同雞群的REV抗體陽(yáng)性率從0到100%不等,平均約為20%;張洪海[9]結(jié)合血清學(xué)檢測(cè)(主要通過(guò)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA)、免疫組織化學(xué)和PCR檢測(cè)方法對(duì)山東省境內(nèi)4周齡以上的AA種雞進(jìn)行檢測(cè),REV平均抗體陽(yáng)性率分別為40.36%;倪楠[10]用nested-PCR從山東省121份鴨的組織DNA中檢出 REV特異性核酸,陽(yáng)性率為55%,這說(shuō)明當(dāng)?shù)匾延邢喈?dāng)部分的鴨群感染或感染過(guò)REV。對(duì)上述樣品同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒、點(diǎn)雜交和常規(guī)PCR檢測(cè),但均為陰性。說(shuō)明 REV在感染鴨體內(nèi)病毒含量很低,或前病毒DNA與鴨基因組發(fā)生整合的機(jī)率比雞低。2009年哈爾濱免疫抑制病實(shí)驗(yàn)室從寧夏、湖北、廣東、遼寧、吉林39個(gè)蛋雞場(chǎng)收集樣品184份,測(cè)得5個(gè)省樣品均存在不同程度的 REV感染,樣品陽(yáng)性率為 11.5%～84.6%,平均陽(yáng)性率為19.0%[11]。

2 混合感染情況

REV、MDV、CAV和ALV-J等是養(yǎng)禽業(yè)中最常見(jiàn)的幾種免疫抑制性病毒,在我國(guó)部分養(yǎng)雞場(chǎng)中均普遍存在,這些病毒在生產(chǎn)雞群中的混合感染是導(dǎo)致當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)性能下降的重要因素之一,并且兩種或兩種以上病毒同時(shí)或先后感染某一個(gè)體時(shí),則會(huì)相應(yīng)增強(qiáng)各自的致病性,加重免疫抑制狀態(tài)。

1999年-2007年,崔志中等[12]從疑似患J亞群禽白血病雞群中,分離到27株ALV-J,其中有12株同時(shí)有REV共感染;2000年-2005年,從疑似患MDV腫瘤的雞群中,分離到11株MDV野毒株,有6株同時(shí)有REV共感染;并且REV和ALV-J對(duì)于地方雞來(lái)說(shuō)已成為地方病,可以通過(guò)水平和垂直傳播,病毒也可感染某些商品雞、種雞和蛋雞,很難徹底消滅[13]。另外,2009年哈爾濱獸醫(yī)研究所免疫抑制病實(shí)驗(yàn)室對(duì)寧夏、湖北、廣東、山東、遼寧、吉林、黑龍江39個(gè)蛋雞場(chǎng)184份樣品檢測(cè)結(jié)果表明,REV與ALV-J的混合感染率為13.6%(25/184)[11]。

張洪海[9]對(duì)山東省境內(nèi)57份活雞進(jìn)行剖檢取樣,通過(guò)病理組織學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明,發(fā)病雞在肝臟、脾臟、腎臟、腺胃、骨髓等組織內(nèi)存在 REV、ALV-J或 MDV抗原的陽(yáng)性信號(hào)。REV+MDV雙重陽(yáng)性率為5.26%;REV+ALV-J雙重陽(yáng)性率為8.77%;MDV+ALV-J+REV三重陽(yáng)性率為3.51%。PCR檢測(cè)結(jié)果表明REV+MDV雙重陽(yáng)性率為10.53%,REV+ALV-J雙重陽(yáng)性率為12.28%,MDV+ALV-J+REV三重陽(yáng)性率為7.02%。

3 基因組的整合

REV以重組的形式污染MDV[14]和FPV[15-16]基因組的現(xiàn)象比較普遍。只有插入到病毒基因組中的REV前病毒序列接近完整時(shí)才可能造成危害[15]。Liu Q 等[15]從 FPV疫苗中分離出兩株REV,并測(cè)定其全基因組序列。Hertig C等[16]詳細(xì)研究了REV在禽痘病毒(Fow l poxvirus,FPV)中的整合位置。Singh P等[17]分離了一株整合到FPV的幾乎完整的REV前病毒cDNA。Zhang Z等[18]在國(guó)內(nèi)外首先從腫瘤病雞中分離到整合有REV LTR的MDV天然重組野毒株,而且丁家波等[19-20]還證明了從國(guó)內(nèi)收集到FPV弱毒疫苗及野毒株都帶有REV LT R。整合REV前病毒的FPV仍能夠有效的抵御 FPV[21];截掉整合到 MDV的 REV LTR后,就會(huì)降低馬立克病毒的致病作用,但能增強(qiáng)其水平傳播能力[22]。因此,整合REV可導(dǎo)致這些病毒遺傳發(fā)生變異,從而加快這些病毒的致病性及抗原性變異,REV的這種流行病學(xué)上的潛在危害,更是不能忽視。

REV作為反轉(zhuǎn)錄病毒的成員,在其生命周期中可以整合到宿主細(xì)胞的基因組中,因此REV可用做將外源基因插入到雞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)載體[23],這類載體在轉(zhuǎn)基因雞和人的基因治療方面有很大用途。因此,可以利用該重組質(zhì)粒并對(duì)之進(jìn)行改造,使之發(fā)展成為一種病毒載體,在基因治療等方面發(fā)揮作用。

4 檢測(cè)技術(shù)

4.1 傳統(tǒng)檢測(cè)方法

盡管國(guó)內(nèi)外先后建立起了 REV瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、間接免疫熒光抗體試驗(yàn)、間接ELISA方法以及ABC-ELISA等方法檢測(cè)REV抗體。但是當(dāng)抗體水平極低時(shí),容易造成假陰性的判斷,因此確診需進(jìn)行病原檢測(cè)。病毒分離培養(yǎng)是最經(jīng)典、最準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。采集病料,進(jìn)行研磨、分離上清液、過(guò)濾除菌后,接種雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)單層,吸附2 h,加入含有10 mL/L犢牛血清的培養(yǎng)基,培養(yǎng)7 d。然后再消化和傳代一次,繼續(xù)培養(yǎng)7 d,電鏡下觀察病毒粒子的形態(tài)。同時(shí)將樣品消化傳代至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,培養(yǎng)7 d,用REV特異性抗血清做免疫熒光試驗(yàn)(IFA),這一過(guò)程至少需要數(shù)10 d,耗時(shí)太長(zhǎng)靈敏性也不夠。另外,取患病禽的組織器官,制成組織切片,REV囊膜糖蛋白單克隆抗體作為一抗,加入FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體作為二抗,細(xì)胞漿內(nèi)有綠色熒光染色者,則判為陽(yáng)性,從而建立了可以直接從組織切片中檢測(cè) REV的免疫熒光技術(shù)[24]。此方法能夠清晰地顯現(xiàn)出 REV抗原的存在、位置及組織病理變化,檢測(cè)時(shí)間短,檢出率高,可以直接對(duì)病毒抗原進(jìn)行定位,但是不適合大量檢測(cè)。

4.2 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

近幾年隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,REV的診斷技術(shù)也有了很大進(jìn)步,首先 PCR技術(shù)應(yīng)用到REV檢測(cè)中。該方法基于 REV前病毒DNA可插入到宿主DNA中,故直接使用組織DNA擴(kuò)增出目的片段。REV的LT R較穩(wěn)定,可擴(kuò)增出約300 bp的序列[25]。此后,又相繼設(shè)計(jì)了來(lái)自REV基因組env、gag區(qū)的脫氧核苷酸引物[25],利用PCR技術(shù)檢測(cè)REV。PCR技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、特異性和敏感性強(qiáng)的特點(diǎn),可以檢測(cè)出帶毒而未出現(xiàn)臨床癥狀的雞只,確定早期感染。可以作為REV流行病學(xué)調(diào)查的一種方法,應(yīng)用范圍廣,同時(shí)亦可作為REV確診的一種手段,進(jìn)行大批量檢測(cè)。

基于 Light Cycler平臺(tái),利用 SYBR GreenI染料能特異性與雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)熒光的特性,建立了一種熒光PCR方法檢測(cè)REV。以前病毒基因組DNA模板,熒光定量PCR可以使PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析的全部過(guò)程都在單管封閉條件下進(jìn)行,并通過(guò)微機(jī)控制,實(shí)現(xiàn)了對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)和自動(dòng)分析結(jié)果,減少了PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染[26]。宋麗等[27]根據(jù)LT R保守區(qū)域設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物,建立基于SYBR Green I模式的實(shí)時(shí)熒光PCR方法(Real-time PCR)。以常規(guī)PCR產(chǎn)物為標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,該方法只從REV陽(yáng)性樣本檢出擴(kuò)增信號(hào),不與其他病原出現(xiàn)交叉反應(yīng);在1.01×102～1.01×109拷貝之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.999,擴(kuò)增效率為99.7%,最低可檢測(cè)101拷貝/反應(yīng)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品;對(duì)16例臨床疑似病例進(jìn)行檢測(cè),陽(yáng)性率為81.25%(13/16),隨機(jī)抽取7份陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,證實(shí)為 REV序列。SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光PCR特異性強(qiáng)、通量高、靈敏度高、檢測(cè)速度快,為REV的快速檢測(cè)、分子流行病學(xué)調(diào)查以及監(jiān)測(cè)REV污染疫苗情況提供新方法。

哈爾濱獸醫(yī)研究所免疫抑制病課題組實(shí)驗(yàn)室又建立了針對(duì)pol基因的快速診斷REV的LAMP方法(即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法),其特點(diǎn)是針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物,利用一種鏈置換DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在等溫條件(65℃左右)保溫幾十分鐘,即可完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)。不需要模板的熱變性、長(zhǎng)時(shí)間溫度循環(huán)及特殊的儀器設(shè)備,只需一個(gè)簡(jiǎn)單的恒溫器,適合疫區(qū)現(xiàn)地檢測(cè)。結(jié)果判定:①加入SYBR GreenⅠ熒光染料,觀察 LAMP反應(yīng)液是否發(fā)生顏色變化,再將PCR反應(yīng)管置于紫外燈下照射,觀察是否有強(qiáng)烈的熒光產(chǎn)生;②副產(chǎn)物-焦磷酸鎂的濁度檢測(cè)具有極高的特異性,只要用肉眼觀察或濁度儀下,陽(yáng)性的PCR反應(yīng)管中有白色沉淀;(3)電泳,將擴(kuò)增產(chǎn)物跑電泳后在紫外燈下觀察可見(jiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物呈梯狀條帶。其敏感性至少是PCR的25倍,特異性也很好,而且簡(jiǎn)單易操作,有望成為未來(lái)檢測(cè)REV的得力工具。

5 展望

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥是禽類重要的致瘤性和免疫抑制性疾病之一。然而,由于臨床癥狀不典型,該病長(zhǎng)期以來(lái)沒(méi)有得到足夠的重視。近些年來(lái),該病在全球迅速蔓延,我國(guó)的陽(yáng)性率也逐步升高,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的直接和間接的危害日趨嚴(yán)重。免疫抑制、致腫瘤、混合感染、污染疫苗、基因組重組使人們對(duì)REV重要性的認(rèn)識(shí)得到了逐步加強(qiáng)。

混合感染,特別是REV與其他免疫抑制病的混合感染,使得雞群處于免疫力低下的狀態(tài),導(dǎo)致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失敗,并容易造成繼發(fā)感染,使疫病的診斷和防控難度加大。而且,REV容易以重組的方式污染其他疫苗株,進(jìn)而感染免疫雞群。另外,非SPF雞胚生產(chǎn)的禽類弱毒疫苗也是該病得以蔓延的重要原因之一。

REV的危害不僅僅在于其自身,而且間接地影響到疫病的綜合防控。為了預(yù)防REV感染,一是應(yīng)嚴(yán)格杜絕弱毒疫苗污染REV,制備活疫苗的雞胚必須嚴(yán)格保證是SPF雞胚,尤其是MDV和FPV苗,及其他雞胚來(lái)源的弱毒疫苗;二是凈化種雞群,對(duì)種雞群進(jìn)行檢測(cè),剔除陽(yáng)性雞,從源頭上阻斷該病毒的傳播;三是將分子生物學(xué)技術(shù)和傳統(tǒng)檢測(cè)手段很好的結(jié)合,更有效的確診REV,加強(qiáng)其流行病學(xué)調(diào)查,為綜合防控提供必要的參考;四是研究開(kāi)發(fā)REV疫苗,免疫種雞,通過(guò)母源抗體預(yù)防垂直傳播和早期感染;五是深入開(kāi)展REV的基因功能研究,研究REV的致瘤和免疫抑制機(jī)制。

[1]Witter R L,Johnson D C.Epidemiology of reticuloendotheliosis virus in broiler breeder flocks[J].Avian Dis,1985,29:1140-1154.

[2]Chen P Y,Cui Z Z,Lee L F,et al.Serologic difference among nondefective reticuloendotheliosis viruses[J].Arch Virol,1987,93:233-246.

[3]張洪海,成子強(qiáng).禽腫瘤性疾病世界流行現(xiàn)狀及分析[J].中國(guó)家禽,2007,29(17):1-4.

[4]Seong H W,Kim S J,Kim J H,et al.Outbreaks of retieuloen-dotheliosis in Korea[J].RDA J Agri Sci Vet,1996,38:707-715.

[5]A ly M M,Hassan M K,Elzahr A A,et al.Serological survey on retieuloendotheliosis virus infection in comercial chicken and turkey flocks in Egypt.Proceedings of the 5thScience Conference[C].Egypt Vet Poultry A ssociation,1998:51-68.

[6]Cheng W H,Huang Y P,Wang C H.Serological and virological surveys of reticuloendotheliosis in chickens in Taiwan[J].J Vet M ed Sci,2006,68(12):1315-1320.

[7]Zavala G,Cheng S,Barbosa T,et al.Enzootic reticuloendotheliosis in the endangered Attwater's and G reater Prairie chickens[J].Avian Dis,2006,50(4):520-525.

[8]崔治中.禽反轉(zhuǎn)錄病毒與DNA病毒間的基因重組及其流行病學(xué)意義[J].病毒學(xué)報(bào),2006,22(2):150-154.

[9]張洪海.山東省家禽腫瘤性疾病流行病學(xué)調(diào)查及 GIS預(yù)警系統(tǒng)的建立[D].山東泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2009:1-2.

[10]倪 楠.鴨群中REV感染的流行病學(xué)調(diào)查及囊膜糖蛋白基因的序列分析[D].山東泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2008:1-2.

[11]秦立廷,高玉龍,潘 偉,等.我國(guó)部分地區(qū)蛋雞群A LV-J及與 REV、MDV、CAV混合感染檢測(cè)[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2010,32(2):90-93.

[12]崔志中,孫淑紅,王 輝,等.雞群中馬立克氏病毒、J-亞群白血病毒和網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒的多重感染[C].中英家禽腫瘤病理及腫瘤病毒研討會(huì),山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2009:18.

[13]Cui Z,Sun S,Zhang Z,et al.Simultaneous endemic infections with subgroup J avian leukosis virus and reticuloendotheliosis virus in commercial and local breeds of chickens[J].Avian Pathol,2009,38(6):443-448.

[14]Bagust T J,Grimes T M,D Dennett P.Infection studies on a reticuloendotheliosis virus contaminant of a commercial Marek＇s disease vaccine[J].Aust Vet J,1979,55:153-157.

[15]Liu Q,Zhao J,Su J,et al.Full genome sequences of two reticuloendotheliosis viruses contaminating commercial vaccines[J].Avian Dis,2009,53:331-346.

[16]Hertig C,Coupar B E H,Gould A R,et al.Field and vaccine strains of fowlpox virus carry integ rated sequences from the avian retrovirus,reticuloendotheliosis virus[J].Virology,1997,235:367-376.

[17]Singh P,Schnitzlein W M,T ripathy D N.Reticuloendotheliosis virus sequences within the genomes of field strains of fowlpox virus display variability[J].J Virol,2003,77(10):5855-5862.

[18]Zhang Z,Cui Z Z.Isolation of reeombinant field strains of M arek's disease virus integrated with retieuloendotheliosis virus genome fragments[J].Science in China,2005,48:81-88.

[19]丁家波,崔治中,于立娟.含有禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒基因組片段的天然重組禽痘病毒的研究[J].微生物學(xué)報(bào),2004,44(5):589-592.

[20]于立娟,崔治中.禽痘疫苗病毒中網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒5'LTR整合位點(diǎn)序列分析[J].微生物學(xué)報(bào),2006,46(4):660-662.

[21]Hauck R,Prusas C,Hafez H M,et al.Serologic response against fowl poxvirus and reticuloendotheliosis virus after experimental and natural infections of chickens with fowl pox virus[J].Avian Dis,2009,53(2):205-210.

[22]Sun A J,Xu X Y,Petherbridge L,et al.Functional evaluation of the role of reticuloendotheliosis virus long terminal repeat(LTR)integ rated into the genome of a field strain of M arek＇s disease virus[J].Virology,2009,11:17-23.

[23]Robert A B,Hsu R Y,Bogg s T.Replication-defective vectors of reticuloendotheliosis virus transduce exogenous genes into somatic stem cells of the unincubated chicken embry o[J].J Virol,1989,63(6):2680-2689.

[24]杜 巖,崔治中.禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染引起的雞群免疫抑制[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2001,21(2):122-124.

[25]吉 榮,劉岳龍,秦愛(ài)建.免疫抑制雞群雞傳染性貧血病毒和網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒共感染檢測(cè)[J].中國(guó)獸藥雜志,2001,35(4):1-3.

[26]Hauck R,Prusas C,Hafez H M,et al.Quantitative PCR as a tool to determine the reticuloendotheliosis virus-proviral load of fowl poxvirus[J].Avian Dis,2009,53(2):211-215.

[27]宋 麗,岳 華,李明義,等.SYBR G reenⅠ實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒方法的建立[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2008,25(8):26-29.

Progress on Epidemiology and Detection Technique of Reticuloendotheliosis

DENG Xiao-yun1,2,3,QI Xiao-le1,GAO Yu-long1,GAO Hong-lei1,QIN Li-ting1,WANG Yong-qiang1,WANG Xiao-mei1

(1.Division of Avian In fectious Diseases,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute of CAAS,Harbin,Heilongjiang,150001,China;
2.College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Harbin,Heilongj iang,150030,China;
3.Vocational College of HeiLongjiang Animal Husbandry and Veterinary Science,Shuangcheng,Heilongjiang,150111,China)

Reticuloendotheliosis is an oncogenic and immunosuppressive disease for avian.Recently,REV is prevailing in avian in the world.Mixed infections with MDV,CAV and ALV-J exist in poultry in our country,which make chicken hypoimmunity and immune failure after injecting AIV and NDV vaccines,and may cause secondary infection.So it is very difficult to diagnose and control REV.Otherwise,REV can integrate into the Marek＇s disease virus(MDV)and fowl poxvirus(FPV)genome,which contaminate commercial vaccines and it can contain exogenous genes insert in cell of chicken and mammal.Based on the traditional detection technique,new molecular biology skills,for example,PCR,real-time PCR,LAMP,elevate the sensitivity and specificity in diagnosing REV.

Reticuloendotheliosis;epidemiology;infection;genome recombination;detection technique

S856.5

A

1007-5038(2010)09-0093-04

2010-03-22

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)基金(nycytx-42-G3-01);公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)基金(200803020-03)

鄧小蕓(1980-),女,內(nèi)蒙古巴彥淖爾人,博士研究生,講師,主要從事分子病毒學(xué)研究。