林慶國 （山東中醫(yī)藥大學(xué),濟南 250355）

自噬與免疫應(yīng)答

林慶國 （山東中醫(yī)藥大學(xué),濟南 250355）

真核細胞主要存在兩種降解循環(huán)大分子物質(zhì)的系統(tǒng):蛋白酶體和溶酶體[1]。蛋白酶體在桶狀多聚蛋白復(fù)合體中催化降解蛋白底物,而在溶酶體則將底物限制于溶酶體膜內(nèi),在脂肪酶、DNA酶、RNA酶、糖苷酶和蛋白酶的作用下被降解。蛋白酶體主要降解翻轉(zhuǎn)及錯誤折疊的蛋白和短壽命蛋白質(zhì):轉(zhuǎn)錄因子和細胞周期調(diào)控分子[2]。溶酶體在機體穩(wěn)定的狀態(tài)下則主要降解長壽命蛋白質(zhì)、受損的細胞器和內(nèi)吞的物質(zhì),在饑餓等代謝應(yīng)激的狀態(tài)下還可以降解細胞內(nèi)的組成成份,溶酶體是唯一可以降解細胞器的降解系統(tǒng)[3-5]。自噬是一種細胞自我降解的過程,主要經(jīng)自噬溶酶體通路清除受損或多余的蛋白質(zhì)和細胞器。

我們下面主要討論代謝物質(zhì)在由胞漿入溶酶體途徑中可能參與的信號分子,即自噬通路以及胞內(nèi)自噬通路如何限制病原體入侵、活化免疫系統(tǒng)、提呈抗原給T細胞以及維持T細胞和B細胞的功能,研究自噬與免疫應(yīng)答的相互作用,為疾病過程中調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答或免疫耐受提供了可能性。

1 小自噬,大自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬

1.1 自噬的類型 近來的研究表明,自噬是指細胞漿內(nèi)的組成成分轉(zhuǎn)運到溶酶體內(nèi)被降解的過程。Christian de Duve現(xiàn)代細胞生物學(xué)創(chuàng)始人之一,于1963年提出該術(shù)語,用于解釋早期電鏡下觀察的線粒體在雙模囊泡中降解的現(xiàn)象,這個過程被稱為自溶[6]。轉(zhuǎn)運胞漿成分進入溶酶體降解的途徑主要包括3種:小自噬,大自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬（Chaperone-mediated Autophagy,CMA）[7]（見圖1）。

高等真核細胞中,小自噬是溶酶體變形后直接吞噬將要降解的物質(zhì),其分子機制不明。至今研究較多的是大自噬的分子機制和生理作用,一般所說的自噬都指大自噬。大分子自噬首先由來源不明的雙層游離膜樣結(jié)構(gòu)形成杯狀凹陷,然后包裹蛋白質(zhì)、胞液和線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器,形成具有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體,繼而自噬體外膜與晚期內(nèi)體和溶酶體融合,分別形成孢子體和自噬溶酶體,最終自噬體膜和自噬大分子在溶酶體中降解。目前在酵母中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)30多種自噬相關(guān)基因（命名為:ATG）,并證實它們在自噬中發(fā)揮重要的作用。自噬在進化中有高度的保守性,在酵母、果蠅、線蟲和哺乳動物中均發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)的同源基因,目前已經(jīng)被免疫學(xué)家用于固有和適應(yīng)性免疫研究[7]。

1.2 自噬發(fā)生過程 自噬囊泡形成和擴張過程中參與的蛋白分子及機制是當前研究和了解最多的,主要包括Atg8和Atg12兩種泛素樣蛋白系統(tǒng)。A tg4蛋白酶切除Atg8C-端的5個氨基酸,暴露出的C末端甘氨酸結(jié)合位點（G120）與自噬體內(nèi)膜和外膜上的磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合,使Atg8轉(zhuǎn)變?yōu)槟づ悸?lián)蛋白。Atg8與PE的結(jié)合除了需要暴露出其C末端的G120位點,還需要Atg7將其活化,然后與E2泛素樣蛋白A tg3作用共價結(jié)合PE。自噬體形成后,外膜上的Atg8在Atg4的作用下可以再循環(huán)利用;與自噬體內(nèi)膜結(jié)合的Atg8則與囊泡一同最終被溶酶體水解降解。

參與自噬體吞噬底物的蛋白分子目前還沒有明確的報道[8,9]。除了Atg8在自噬體形成中發(fā)揮重要的作用以外,泛素化反應(yīng)也是必需的。過程如下:A tg12在E1活化的Atg7以及E2共價結(jié)合的Atg10的輔助作用下,通過C末端甘氨酸殘基與A tg5蛋白（K149）的賴氨酸殘基結(jié)合,并與Atg16結(jié)合,形成A tg12-Atg5/Atg16復(fù)合體,該復(fù)合體在膜延伸的過程中位于自噬體的外膜,當自噬體形成后則被剪切掉,對于該復(fù)合體的功能目前還不完全了解。該復(fù)合體的組成還包括Ⅲ型磷脂酰肌醇3激酶（PI3K或VPS34）和Atg6/Beclin-1,其他組成成份可以調(diào)節(jié)這兩種蛋白分子,VPS34和Atg6/Beclin1已經(jīng)作為靶點用于調(diào)節(jié)自噬,3-甲基腺嘌呤、渥曼青霉素、LY294002（PI3K抑制劑）和鋰常用于抑制這兩種蛋白分子[10-13]。由于該復(fù)合體是Atg8共價結(jié)合所必需的,研究人員推測Atg5-Atg12/Atg16L1復(fù)合體可以催化Atg8脂化,并決定Atg8的附著位點[14,15]。用小干擾RNA作用于Atg6/Beclin-1或者Atg12-Atg5/Atg16能夠抑制自噬的發(fā)生,而過表達Atg6/Beclin-1自噬則增強[16]。VPS34/Beclin-1,A tg5-Atg12/A tg16L1和Atg8-PE復(fù)合體全都參與形成轉(zhuǎn)運囊泡,通過跨膜通道轉(zhuǎn)運胞漿成份到溶酶體。

分子伴侶介導(dǎo)的自噬（CMA）是通過信號肽轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)到溶酶體。RNAse A,KFERQ等最初認為是傳遞CMA作用底物的信號肽,該信號肽能夠被胞質(zhì)內(nèi)的 HSC70識別,那些未折疊的 CMA底物,在HSP40,Hip,Hop,Bag-1和HSP90的輔助作用下錨定于溶酶體膜,這種伴侶復(fù)合體能夠依賴溶酶體相關(guān)膜蛋白（LAMP-2A）的C末端胞漿區(qū)指導(dǎo)CMA底物的錨定,LAMP-2A是單一跨膜分子,以多聚體的形式形成跨膜通道輔助HSC70將CMA作用底物轉(zhuǎn)運到溶酶體內(nèi)[17-20]。調(diào)節(jié)胞漿內(nèi)HSC70和LAMP-2A能夠影響CMA的轉(zhuǎn)運水平,但是CMA僅在應(yīng)激狀態(tài)時上調(diào),例如:饑餓[18]。

綜上所述,目前認為至少有3條途徑參與胞內(nèi)成份的溶酶體降解,其中的大自噬和CMA,在固有和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中的作用底物和特點已經(jīng)比較明確。

2 自噬對病原體的作用

自噬選擇性清除胞漿內(nèi)細胞器和蛋白的功能還可以用于清除胞內(nèi)細菌、寄生蟲和病毒。自噬是唯一能夠轉(zhuǎn)運大分子到溶酶體的途徑,該途徑參與細胞自主清除胞內(nèi)病原體,如果該功能受損,受感染的細胞只能通過其他途徑導(dǎo)致細胞死亡,然后被吞噬細胞吞噬。

2.1 自噬對細菌的作用 自噬能夠作用于胞漿內(nèi)的微生物,也能夠作用于吞噬體內(nèi)的病原體[21]。自噬清除細胞內(nèi)微生物最好的例子就是對A組鏈球菌屬（GAS）的清除,自噬依賴的GAS清除伴隨著直徑較大的自噬液泡（10μm）的形成,一般哺乳動物自噬體直徑多為0.5～1.5μm,這就說明自噬體有相當大的可塑性,被吞噬物質(zhì)的大小決定了所形成游離膜的大小[5]。立克次體存在類似的現(xiàn)象[22]。

自噬清除胞內(nèi)菌和寄生蟲的另外一種常見機制是作用于包含病原體的吞噬小體,例如:結(jié)核分枝桿菌,巨噬細胞吞噬結(jié)核桿菌后形成吞噬囊泡,并防止其與溶酶體融合[23]。巨噬細胞被IFN-γ活化后增強對細菌的吞噬并促進吞噬囊泡與自噬體融合,從而降解病原體。在小鼠中IFN-γ誘導(dǎo)的免疫相關(guān)p47鳥苷三磷酸酶（IRGs）和LRG-47（IRGs成員之一）的過表達能夠促進自噬體的形成以及自噬依賴的包含結(jié)核桿菌的自噬體的清除[23]。與結(jié)核桿菌類似,通過該機制清除的病原體還有鼠弓形體,與結(jié)核桿菌不同的是小鼠IFN-γ誘導(dǎo)的GTP酶:IIGP1和IGTP能夠破壞包含鼠弓形體的囊泡膜,甚至破壞寄生蟲的膜結(jié)構(gòu),從而使病原體暴露經(jīng)自噬降解[24]。這些研究說明包含病原體的吞噬體可能需要加工處理才能夠被有效清除。沙門氏菌能夠誘導(dǎo)自噬并在囊泡中復(fù)制,只有當包含沙門氏菌的囊泡受損后才能夠有效的通過自噬將其轉(zhuǎn)運到溶酶體降解,這一現(xiàn)象更加證實了上述說法[25]。

圖1 自噬的類型和發(fā)生過程Fig.1 The type and development of autophagy

2.2 自噬對病毒的作用 關(guān)于自噬在固有免疫中對病毒的作用目前了解的相對較少,盡管在幾種病毒感染中發(fā)現(xiàn)了自噬體積聚,例如:人微小病毒B19和丙型肝炎病毒,但是自噬對它們的作用還不是很清楚。在Ⅰ型單純皰疹病毒感染細胞形成的自噬體中能夠觀察到皰疹病毒顆粒的存在[26]。在體內(nèi),Atg6/Beclin-1的過表達能夠抵抗病毒引起的腦炎,然而,自噬如何抵抗這些病毒還不清楚[27]。通過對水泡型口膜炎病毒（VSV）的研究提示,Toll樣受體7可以識別這些病毒,并經(jīng)自噬轉(zhuǎn)運病毒復(fù)制中間體到內(nèi)體。Atg5依賴的TLR7對病毒的識別,以及誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的分泌,均是細胞類型依賴的,VSV感染的小鼠胚胎成纖維細胞（MEFs）自噬存在時誘發(fā)產(chǎn)生的 Ⅰ型干擾素較沒有自噬發(fā)生時減少[28]。RNA解螺旋酶維甲酸誘導(dǎo)基因1（RIG-1）主要介導(dǎo)VSV感染的MEFs細胞IFN的產(chǎn)生,Atg5-Atg12能夠直接與RIG-1和下游IFN-β啟動刺激因子1（IPS-1）相互作用。因此,自噬能夠經(jīng)PAMP受體識別病毒并通過分泌抗病毒Ⅰ型干擾素作用于病毒。

總之,自噬通過直接降解胞內(nèi)微生物或者輔助宿主細胞抗感染等不同的機制介導(dǎo)細菌、寄生蟲和病毒引起的固有免疫反應(yīng)。

3 自噬與抗原提呈

蛋白酶體和溶酶體等胞內(nèi)降解系統(tǒng)不僅可以用于清除不必要的胞內(nèi)物質(zhì)（例如:病原體）,其降解產(chǎn)物還可以用于激活免疫系統(tǒng)。這些降解產(chǎn)物可以活化NKT等固有免疫細胞,也能夠活化T細胞等適應(yīng)性免疫細胞。自噬也具有類似的功能,自噬可以激活固有免疫細胞,此外,自噬作用的底物能夠作為抗原提呈給適應(yīng)性免疫細胞從而啟動適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

CD4+和CD8+T細胞可以分別監(jiān)視溶酶體和蛋白酶體內(nèi)抗原肽的形成,抗原肽與MHCⅠ類分子結(jié)合提呈給CD8+T細胞,與MHCⅡ類分子結(jié)合提呈給CD4+T細胞。MHCⅠ類分子的配體主要是短壽命的胞漿和胞核蛋白,例如:細胞周期蛋白[29]。蛋白酶體水解產(chǎn)物——多肽,通過抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運體（LAMP）被轉(zhuǎn)運到內(nèi)質(zhì)網(wǎng),在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中被氨基肽酶ERAAP進一步加工修飾然后裝載到新合成的MHCⅠ類分子上[30,31]。只有穩(wěn)定的與MHCⅠ類分子高親和力結(jié)合的肽才能夠被釋放到胞漿,轉(zhuǎn)運到細胞表面提呈給CD8+T細胞。MHCⅡ類分子與肽的結(jié)合在晚期內(nèi)體中發(fā)生,即MHCⅡ類分子憩室（MIIC）,MHCⅡ類分子在恒定鏈（Ii）的指導(dǎo)下進入憩室[32]。Ii鏈不僅能夠防止未成熟的肽在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中與MHCⅡ類分子結(jié)合,還能夠傳遞胞內(nèi)選擇信號,運送Ii/MHCⅡ類分子到MIIC中。Ii鏈在MIIC中,在溶酶體蛋白水解酶的作用下降解,最終在HLADM的協(xié)助下被高親和力的肽所替代,抗原肽-MHCⅡ類分子復(fù)合物被轉(zhuǎn)運到細胞表面活化CD4+T細胞。MHCⅡ類分子的配體由溶酶體蛋白水解作用產(chǎn)生,其可以通過內(nèi)吞作用到達M IIC。然而,目前沒有充足的證據(jù)說明MHCⅡ類分子配體來源于胞內(nèi)蛋白的實際比例以及自噬傳遞這些蛋白到MIIC的途徑（見圖2）。

圖2 自噬參與抗原加工處理及提呈的過程Fig.2 Antigen processing for major histocompatibility complex（MHC）classⅡpresentation via autophagy

哺乳動物自噬體與晚期內(nèi)體的融合優(yōu)先于與溶酶體的融合,游離的融合囊泡即晚期內(nèi)體與MIIC具有相同的形態(tài),自噬體也能夠與MIICs融合,采用GFP-Atg8/LC3標記自噬體,可以觀察自噬體與M IICs的融合[33,34,36]。有研究發(fā)現(xiàn)人內(nèi)皮細胞、單核細胞來源的DCs、EB病毒感染的 B淋巴細胞系（LCLs）超過50%的MIICs接受自噬體的融合。免疫金電鏡觀察超微結(jié)果發(fā)現(xiàn),包含GFP-Atg8/LC3-MHCⅡ類分子的小室類似大的多囊泡內(nèi)體。而且,GFPAtg8/LC3和MHCⅡ類分子緊鄰囊泡的內(nèi)膜,主要維持MHCⅡ類分子與抗原肽的結(jié)合以及MHCⅡ類分子與HLA-DM的共區(qū)域化。因此,自噬體能夠與MIICs融合,Atg8/LC3在晚期內(nèi)體階段傳遞底物到囊泡內(nèi)膜與MHCⅡ類分子結(jié)合。

多數(shù)研究認為自噬除了可以參與MHCⅡ類分子的抗原提呈,自噬還可以協(xié)助經(jīng)典的和非經(jīng)典的MHCⅠ類分子的抗原提呈。Levine's實驗室最近研究顯示自噬可以使凋亡細胞更容易被吞噬細胞以及專職抗原提呈細胞DCs等攝入,從而促進交叉提呈。除了通過經(jīng)典的MHC分子提呈抗原,自噬還可能傳遞其他病原體來源的成分到溶酶體降解并被免疫系統(tǒng)所識別。非經(jīng)典的MHCⅠ類分子CD1d在MIICs與其糖脂類配體相結(jié)合[37,38],由于自噬體常與M IICs融合,溶酶體水解可以作用于脂質(zhì),所以自噬能夠傳遞糖脂類配體與CD1d分子結(jié)合,然后提呈給NKT細胞。因此,自噬能夠通過不同的機制提呈抗原給固有免疫和適應(yīng)性免疫細胞。

4 自噬與T和B細胞發(fā)育及免疫應(yīng)答

自噬影響適應(yīng)性免疫應(yīng)答的另外一種機制是影響適應(yīng)性免疫細胞的發(fā)生和存活。自噬缺陷的B細胞和T細胞的分化受影響,免疫應(yīng)答發(fā)生失衡。Atg5敲除的T細胞,CD4+和CD8+T細胞的發(fā)育均受損[39]。Atg5-/-T細胞除了分布到外周的數(shù)目減少,自噬缺陷的T細胞受刺激后增殖能力也下降。因此,自噬可以維持細胞的存活,而且自噬無論在T細胞發(fā)育早期階段還是在外周增殖階段都是必需的。然而,自噬并不一定對所有的免疫應(yīng)答,尤其是不同類型的免疫應(yīng)答都有利。在人類,Th2細胞主要參與體液免疫應(yīng)答,能夠積聚大量的自噬體,甚至到不健康的程度[40],用小干擾RNA作用于Atg7或Atg6/Beclin-1,營養(yǎng)缺乏的情況下可以抑制細胞死亡。而在Th1細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中,通過自噬可以預(yù)防細胞死亡。這些數(shù)據(jù)說明,Th2細胞正常狀況下,已經(jīng)利用高水平自噬維持自身存活,營養(yǎng)成分的缺乏會經(jīng)自噬促進細胞死亡。類似于T細胞的發(fā)生,祖B細胞在他們發(fā)育成前B細胞的過程中需要自噬的參與,B-1a細胞自噬功能減弱后其存活明顯受到影響[41]。這些研究說明在T和B細胞的發(fā)育過程中自噬發(fā)揮重要的維持細胞存活的作用,而且這些淋巴細胞有很強的增殖能力,細胞增殖也需要自噬的參與。

5 自噬在適應(yīng)性免疫應(yīng)答和免疫耐受中的作用

自噬在3個水平上參與免疫應(yīng)答:自噬可以直接清除胞內(nèi)病原體,自噬還可以加工處理抗原后與MHCⅡ類分子結(jié)合提呈給適應(yīng)性免疫細胞,最終在保護性免疫應(yīng)答過程中維持適應(yīng)性免疫淋巴細胞的增殖和存活。

目前有很多證據(jù)顯示自噬對機體還具有保護性作用,自噬能夠維持肌體對自身組織的免疫耐受。T細胞免疫耐受主要包括:中樞免疫耐受和外周免疫耐受,T細胞的陽性和陰性選擇在自噬缺陷的胸腺內(nèi)明顯受損[42-44]。近來有研究報道,5種轉(zhuǎn)基因CD4+T細胞種屬中,其中兩種Atg5缺失的胸腺組織不能進行有效的陽性和陰性選擇,而且,Atg5缺失小鼠可以發(fā)生自身免疫性疾病。因此,自噬對于CD4+T細胞發(fā)育過程中所誘導(dǎo)的中樞免疫耐受是必需的。在胸腺陰性選擇以后,那些逃脫的自身反應(yīng)性T細胞在外周也會誘導(dǎo)耐受的產(chǎn)生,主要有兩種細胞參與這個過程:未成熟DCs和淋巴結(jié)基質(zhì)細胞[43,45]。由上述內(nèi)容可見,自噬參與了CD4+T細胞中樞和外周免疫耐受的形成。

自噬維持免疫耐受的第三種機制是促進凋亡小體的清除,凋亡小體清除發(fā)生障礙可以導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡的形成[46-48]。凋亡小體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者局部聚集,產(chǎn)生了一個較高水平的自身抗原儲存庫,從而導(dǎo)致自身抗體的形成。自噬可以使被吞噬細胞吞噬的凋亡細胞的磷脂酰絲氨酸暴露于細胞表面。Atg6/Beclin-1或Atg5缺失的細胞,凋亡后不能夠被有效吞噬。

因此自噬在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中從不同的水平維持免疫耐受,第一是在中樞和外周耐受誘導(dǎo)過程中加工處理抗原并提呈給MHCⅡ類分子,第二是平衡免疫激活和耐受,第三促進自身抗原清除,避免活化自身反應(yīng)性B細胞。

6 結(jié)論

自噬的分子組成決定了其在固有免疫和適應(yīng)性免疫中的作用,自噬可以清除胞內(nèi)病原體,加工處理病原體成分活化適應(yīng)性免疫應(yīng)答。自噬在CD4+T細胞的發(fā)育過程中通過自身抗原與MHCⅡ類分子結(jié)合,誘導(dǎo)中樞和外周免疫耐受的發(fā)生,并通過提呈抗原活化CD4+T細胞。而且,自噬利用維持細胞存活的功能,在免疫應(yīng)答過程中有效的維持淋巴細胞擴增。自噬這些在固有免疫和適應(yīng)性免疫中的作用目前在不同的模型中已經(jīng)得到證實,但是在體內(nèi),自噬對免疫應(yīng)答抵抗病原體和腫瘤的確切作用還需要更進一步的探討。以自噬作為靶點治療免疫相關(guān)疾病已經(jīng)成為目前研究的熱點。

1 Ciechanover A.Intracellular protein degradation:from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting[J].Cell Death Differ,2005;12（9）:1178-1190.

2 Ciechanover A,Finley D,Varshavsky A.Ubiquitin dependenceof selective protein degradation demonstrated in themammalian cell cyclemutant ts85[J].Cell,1984;37（1）:57-66.

3 Henell F,Berkenstam A,Ahlberg Jetal.Degradation of short-and longlived proteins in perfused liver and in isolated autophagic vacuoles-lysosomes[J].Exp MolPathol,1987;46（1）:1-14.

4 Sandoval H,Thiagarajan P,Dasgupta SKetal.Essential role for Nix in autophagicmaturation of erythroid cells[J].Nature,2008;454（7201）:232-235.

5 Mizushima N,Klionsky D J.Protein turnover via autophagy:implications formetabolism[J].Annu Rev Nutr,2007;27:19-40.

6 Ashford T P,Porter K R.Cytoplasm ic components in hepatic cell lysosomes[J].JCell Biol,1962;12:198-202.

7 Mizushima N,Levine B,Cuervo A Metal.Autophagy fights disease through cellular self-digestion[J].Nature,2008;451（7182）:1069-1075.

8 Pankiv S,Clausen T H,Lamark Tetal.p62/SQSTM 1 binds directly to Atg8/LC3 to facilitate degradation of ubiquitinated protein aggregates by autophagy[J].JBiol Chem,2007;282（33）:24131-24145.

9 Bjorkoy G,Lamark T,Brech Aetal.p62/SQSTM1 forms protein aggregates degraded by autophagy and has a protective effect on huntingtin-induced cell death[J].JCell Biol,2005;171（4）:603-614.

10 Levine B,K roemer G.Autophagy in the pathogenesis of disease[J].Cell,2008;132（1）:27-42.

11 Seglen PO,Gordon P B.3-Methyladenine:specific inhibitorofautophagic/lysosomal protein degradation in isolated rat hepatocytes[J].Proc Natl Acad Sci USA,1982;79（6）:1889-1892.

12 Blommaart E F,K rause U,Schellens JPetal.The phosphatidyli-nositol 3-kinase inhibitorswortmannin and LY294002 inhibit autophagy in isolated rat hepatocytes[J].Eur JBiochem,1997;243（1-2）:240-246.

13 Criollo A,MaiuriM C,Tasdem ir Eetal.Regulation of autophagy by the inositol trisphosphate receptor[J].CellDeath Differ,2007;14（5）:1029-1039.

14 Hanada T,Noda N N,Satom i Yetal.The Atg12-Atg5 conjugate has a novel E3-like activity for protein lipidation in autophagy[J].J Biol Chem,2007;282（52）:37298-37302.

15 Fujita N,Itoh T,OmoriHetal.TheAtg16L complex specifies thesiteof LC3 lipidation formembrane biogenesis in autophagy[J].Mol BiolCell,2008;19（5）:2092-2100.

16 K lionsky D J,Abeliovich H,Agostinis Petal.Guidelines for theuseand interpretation of assays for monitoring autophagy in higher eukaryotes[J].Autophagy,2008;4（2）:151-175.

17 Dice JF.Peptide sequences that target cytosolic proteins for lysosomal proteolysis[J].Trends Biochem Sci,1990;15（8）:305-309.

18 Massey A C,Zhang C,Cuervo A M.Chaperone-mediated autophagy in aging and disease[J].Curr Top Dev Biol,2006;73:205-235.

19 Cuervo AM,Dice JF.A receptor for the selective uptake and degradation of proteinsby lysosomes[J].Science,1996;273（5274）:501-503.

20 Agarraberes FA,Terlecky SR,Dice JF.An intralysosomalhsp70 is required for aselectivepathway of lysosomalprotein degradation[J].JCell Biol,1997;137（4）:825-834.

21 Schmid D,MunzC.Innate and adaptive immunity through autophagy[J].Immunity,2007;27（1）:11-21.

22 Walker DH,Popov V L,Crocquet-ValdesPAetal.Cytokine-induced,nitric oxide-dependent,intracellular antirickettsialactivity ofmouse endothelial cells[J].Lab Invest,1997;76（1）:129-138.

23 Gutierrez M G,Master S S,Singh S Betal.Autophagy is a defense mechanism inhibiting BCG and Mycobacterium tuberculosis survival in infectedmacrophages[J].Cell,2004;119（6）:753-766.

24 Andrade R M,Wessendarp M,Gubbels M Jetal.CD 40 induces macrophage anti-Toxoplasma gondii activity by triggering autophagy-dependent fusion ofpathogen-containing vacuolesand lysosomes[J].JClin Invest,2006;116（9）:2366-2377.

25 Birm ingham C L,Sm ith A C,Bakowski M Aetal.Autophagy controls Salmonella infection in response to damage to the Salmonella-containing vacuole[J].JBiolChem,2006;281（16）:11374-11383.

26 Levine B,Deretic V.Unveiling the roles of autophagy in innate and adaptive immunity[J].Nat Rev Immunol,20;7（10）:767-777.

27 Liang XH,Kleeman LK,JiangH Hetal.Protection against fatal Sindbis virusencephalitisby beclin,a novel Bcl-2-interacting protein[J].J VirolM,1998;72（11）:8586-8596.

28 Jounai N,Takeshita F,Kobiyama Ketal.The Atg5 Atg12 conjugate associateswith innate antiviral immune responses[J].Proc NatlAcad Sci USA,2007;104（35）:14050-14055.

29 Rammensee H,Bachmann J,Emmerich N Petal.SYFPEITHI:database for MHC ligands and peptidemotifs[J].Immunogenetics,1999;50（3-4）:213-219.

30 Hammer G E,KanasekiT,Shastri N.The final touchesmake perfect the peptide-MHC classⅠrepertoire[J].Immunity,2007;26（4）:397-406.

31 Pamer E,Cresswell P.Mechanisms of MHC classⅠrestricted antigen processing[J].Annu Rev Immunol,1998;16:323-358.

32 Trombetta ES,Mellman I.Cell biology of antigen processing in vitro and in vivo[J].Annu Rev Immunol,2005;23:975-1028.

33 Eskelinen E L.Maturation of autophagic vacuoles in mammalian cells[J].Autphagy,2005;1（1）:1-10.

34 ZwartW,Griekspoor A,Kuijl Cetal.Spatial separation of HLA-DM/HLA-DR interactions within MIIC and phagosome-induced immune escape[J].Immunity,2005;22（2）:221-233.

35 Chicz RM,Urban RG,Gorga JCetal.Specificity and promiscuity among naturally processed peptides bound to HLA-DR alleles[J].JExp Med,1993;178（1）:27-47.

36 Schmid D,PypaertM,M¨unz C.MHC classⅡ antigen loading compartments continuously receive input from autophagosomes[J].Immunity,2007;26（1）:79-92.

37 Kang S J,Cresswell P.Regulation of intracellular trafficking of human CD1d by association with MHC classⅡmolecules[J].EMBO J,2002;21（7）:1650-1660.

38 Sullivan BA,Nagarajan NA,Kronenberg M.CD1 andMHCⅡfind differentmeans to the same end[J].Trends Immunol,2005;26（5）:282-288.

39 PuaH H,Dzhagalov I,Chuck Metal.A critical role for the autophagy gene Atg5 in T cell survivaland proliferation[J].JExpMed,2007;204（1）:25-31.

40 Li C,Capan E,Zhao Yetal.Autophagy is induced inCD4+T cellsand important for the growth factor-withdrawal cell death[J].J Immunol,2006;177（8）:5163-5168.

41 M iller B C,Zhao Z,Stephenson LMetal.The autophagy gene ATG5 playsan essential role in B lymphocyte development[J].Autophagy,2008;4（3）:309-314.

42 Starr T K,Jameson SC,HogquistK A.Positive and negative selection of T cells[J].Annu Rev Immunol,2003;21:139-176.

43 Steinman RM,Hawiger D,NussenzweigM C.Tolerogenic dendritic cells[J].Annu Rev Immunol,2003;21:685-711.

44 Nedjic J,Aichinger M,Emmerich Jetal.Autophagy in thymic epithelium shapes the T-cell repertoire and is essential for tolerance[J].Nature,2008;455（7211）:396-400.

45 Lee JW,Epardaud M,Sun Jetal.Peripheral antigen display by lymph node stroma promotes T cell tolerance to intestinal self[J].Nat Immunol,2007;8（2）:181-190.

46 Qu X,Zou Z,SunQetal.Autophagy gene-dependent clearance of apoptotic cells during embryonic development[J].Cell,2007;128（5）:931-946.

47 Mellen M A,de la Rosa E J,Boya P.Theautophagicmachinery isnecessary for removalof cell corpses from thedeveloping retinal neuroepithelium[J].Cell Death Differ,2008;15（8）:1279-1290.

48 BijlM,Reefman E,Limburg PCetal.Inflammatory clearance of apoptotic cells after UVB challenge[J].Autoimmunity,2007;40（4）:244-248.

[收稿2010-06-21 修回2010-08-05]

（編輯 張曉舟）

R392.1

A

1000-484X（2010）12-1146-06

10.3969/j.issn.1000-484X.2010.12.023

林慶國（1970年-）,男,碩士,講師,主要從事心血管免疫方面的研究,E-mail:496487518@qq.com。

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