胡曉靜

【摘要】 目的 應(yīng)用丙型病毒性肝炎核心抗原(HCV 2cA g) EL ISA 檢測(cè)試劑, 用于診斷早期丙型肝炎(HCV ) 病毒標(biāo)志物。方法 78份懷疑為HCV 感染患者血清中采用EL ISA 法檢測(cè)的HCV 核心抗原,并以HCV RNA PCR 法和抗- HCV 檢測(cè)結(jié)果作為比較。結(jié)果 78份樣本中,PCR法測(cè)HCV RNA,陽(yáng)性36例,陰性42例,EL ISA法測(cè)HCV核心抗原,陽(yáng)性34例,陰性44例,RT 2PCR熒光定量法測(cè)抗-HCV,陽(yáng)性29例,陰性49例;結(jié)論 以PCR 法測(cè)HCV RNA與多種方法檢測(cè)丙型肝炎病毒核心抗原的臨床價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 HCV 核心抗原; HCV - RNA ; 抗- HCV ; HCV RT2PCR

輸血和注射是我國(guó)丙型肝炎病毒重要的傳播途徑,目前采用抗- HCV 抗體檢測(cè)對(duì)血液進(jìn)行篩查和疾病的診斷,使輸血后丙型肝炎的發(fā)生率大大降低。但是在HCV 感染后至抗-HCV 抗體產(chǎn)生之前有一段長(zhǎng)約40～70 d 的窗口期,此時(shí)已具有傳染性, 盡管使用的抗2HCVEL ISA 試劑盒均為國(guó)家“批批檢”合格產(chǎn)品,但由于廠家之間使用HCV 基因重組抗原質(zhì)量及各抗原片段包被比例的不同, 各廠家試劑間的靈敏度和特異性存在著一定差異, 從而導(dǎo)致抗2HCV 檢測(cè)結(jié)果不一致,易產(chǎn)生假陽(yáng)性或漏檢等情況。由于在HCV 感染后2～5 周HCV RNA 即可出現(xiàn)在感染者的外周血中 ,被視為HCV 病毒復(fù)制的直接標(biāo)志,可以縮短感染后血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前的檢測(cè)窗口期,以實(shí)現(xiàn)HCV 感染的早期診斷。本實(shí)驗(yàn)采用EL ISA 法檢測(cè)HCV 核心抗原, 并分別與HCVRNA PCR 法測(cè)抗- HCV 檢測(cè)結(jié)果相比較;評(píng)估HCV 核心抗原檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)對(duì)河南省安陽(yáng)市中心血站懷疑HCV78份病例進(jìn)行檢測(cè)分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 懷疑HCV 感染的門(mén)診及住院患者血清標(biāo)本78份。

1.2 試劑 HCV 核心抗原檢測(cè)丙型肝炎病毒核心抗原試劑盒，HCV RNA 檢測(cè)HCVRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒?？? HCV 檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒。

1.3 主要儀器 洗板機(jī)(ST236W )和酶標(biāo)儀(ST2360)均為上?？迫A實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)。PCR 擴(kuò)增儀(L igh t Cycler L)

1.4 方法 78份血清標(biāo)本分別用HCV 2cA g EL ISA 試劑和HCV RNA 熒光定量RT 2PCR 試劑檢測(cè), 對(duì)其余血清標(biāo)本僅行熒光定量RT 2PCR 試劑檢測(cè)。各種操作方法, 結(jié)果判斷嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求。

2 結(jié)果

78份樣本中,PCR 法測(cè)HCV RNA ,陽(yáng)性36例,陰性42 例,EL ISA 法測(cè)HCV核心抗原,陽(yáng)性34例,陰性44 例, RT 2PCR 熒光定量法測(cè)抗- HCV ,陽(yáng)性29例,陰性49例; HCV RNA PCR、HCV 核心抗原、抗-HCV 陽(yáng)性率分別為46. 15 %、43.58%、37.17%。同HCV RNA PCR 檢測(cè)結(jié)果比較:HCV 核心抗原檢測(cè)符合率90. 08 %、假陽(yáng)性率3. 31 %、假陰性率6. 61 %;抗- HCV 檢測(cè)符合率81. 81 %、假陽(yáng)性率4. 13 %、假陰性率14. 05 %。

3 討論

PCR 法檢測(cè)的影響因素較多,在樣本收集、儲(chǔ)存和檢測(cè)方面都有嚴(yán)格的要求。而且要求昂貴精密的儀器、較高的實(shí)驗(yàn)技藝,試劑也比較昂貴,又容易出現(xiàn)交叉污染導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,使得PCR 技術(shù)的推廣受到了極大的限制。目前對(duì)丙肝的檢測(cè)主要為檢測(cè)抗2HCV 和HCV RNA。RT2PCR 可定性和定量檢測(cè)出的HCVRNA , HCV 感染后1～ 13 d, 應(yīng)用HCVRNA 和RT 2PCR 即可檢測(cè)到HCV RNA , 2周后可檢出HCV 2cA g, 比抗體檢出平均約早30 d。所以上述兩種方法對(duì)HCV 感染的早期診斷價(jià)值相類似。建立早期簡(jiǎn)便、敏感、特異的檢測(cè)丙肝抗原試劑, 縮短感染的“窗口期”是降低丙型肝炎感染的有效途徑。如果單用第三代抗2HCV 試劑A 或試劑B 檢測(cè)的陽(yáng)性標(biāo)本, 再用HCV RNA 熒光定量RT 2PCR 檢測(cè)陽(yáng)性率分別為43.58% 和37.1% , 其中就可能存在漏檢或假陽(yáng)性。其特異性和靈敏度都比較高,但由于各廠商所用抗原質(zhì)量和各抗原片段包被比例的不同,因此生產(chǎn)的試劑在靈敏度和特異性方面存在一定差異,從而導(dǎo)致抗2HCV 結(jié)果的不一致,易產(chǎn)生漏檢和假陽(yáng)性等情況。我國(guó)研制抗HCV不同基因區(qū)抗體報(bào)道較多,亦有實(shí)驗(yàn)室對(duì)制備的抗體進(jìn)行雙抗體夾心檢測(cè)HCV 抗原 。國(guó)內(nèi)外近幾年來(lái)探索應(yīng)用HCV 2cA g 檢測(cè)HCV 的報(bào)道較多。結(jié)果顯示,抗原檢測(cè)陽(yáng)性率比文獻(xiàn)報(bào)道的在抗2HCV 陽(yáng)性標(biāo)本中HCV 2cA g 陽(yáng)性率(34. 48% )明顯要高。比較而言, HCV 2cA g EL ISA 法快速、便捷,較適用于安全輸血中獻(xiàn)血者的血液篩檢。HCV 核心抗原檢測(cè)技術(shù)反映了HCV 復(fù)制的間接指標(biāo),且實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、快捷、價(jià)廉,可以在3 h 內(nèi)完成,所需設(shè)備簡(jiǎn)單,可進(jìn)行批量檢測(cè)。HCV 2cA g EL ISA 技術(shù)與抗2HCV 有互補(bǔ)作用,二者同時(shí)檢測(cè)能提高HCV 檢出結(jié)果的準(zhǔn)確性, 可明顯降低抗2HCV 檢測(cè)的假陽(yáng)性, 減少血液資源的浪費(fèi),當(dāng)然這還有待進(jìn)一步研究。 由于HCV RNA RT 2PCR 測(cè)定方法操作復(fù)雜、技術(shù)要求高、費(fèi)用高, 不能作為普查或常規(guī)應(yīng)用。

丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)檢出率不高的原因筆者認(rèn)為①丙肝病毒增殖未達(dá)到高峰, 抗原在血清中未達(dá)到檢出水準(zhǔn)。②在血流中形成免疫復(fù)合物狀態(tài)。③檢測(cè)方法的敏感度不夠靈敏。為提高檢出的準(zhǔn)確性,有必要尋找一種快速、便捷的輔助確證診斷技術(shù)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 朱忠政,叢文銘.乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒在肝癌發(fā)生中的用研究進(jìn)展.中華肝臟病雜志，2003，11(9):5741.

［2］ 汪國(guó)華,張賀秋,李少波,等. 丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)試劑的研制及初步應(yīng)用. 中國(guó)輸血雜志, 2004，17: 299-301.

［3］ 孟淑芳,李秀華,尹紅章,等. 丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)方法的建立.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志, 2001,15: 287-230.

［4］ 鄭懷競(jìng).獻(xiàn)血者丙型肝炎病毒“窗口期”感染的篩查技術(shù)原理.中華肝臟病雜志,2002 ,10 (2)：211.

［5］ 洪俊,饒永彩. HCV 核心抗原測(cè)定用于丙型肝炎早期診斷臨床價(jià)值的評(píng)估.臨床檢驗(yàn)雜志,2005 ,23 (2) :133.