何永恒　劉　麗

摘 要：目的：評價花椒微米粉末、防風(fēng)微米粉末對肛腸病術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛效果及安全性，并對其鎮(zhèn)痛作用機理進(jìn)行初探。方法：分別采用小鼠熱板法及小鼠醋酸扭體法實驗來觀察實驗藥物的整體鎮(zhèn)痛效果；建立小鼠肛腸病術(shù)后疼痛模型，采取酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定該模型小鼠血清中前列腺素E2（PGE2）和β-內(nèi)啡肽（β-EP）水平，初探微米粉末的鎮(zhèn)痛機制；以急性皮膚粘膜刺激實驗觀察藥物外用的毒性與不良反應(yīng)。結(jié)果與結(jié)論：先秦及秦漢時期原創(chuàng)性單味中藥微米粉末—花椒微米粉末及防風(fēng)微米粉末對肛腸病術(shù)后鎮(zhèn)痛是安全有效的，其鎮(zhèn)痛機制可能與降低血清中PGE2含量，提高β-EP含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞：先秦；秦漢；原創(chuàng)性；單味；鎮(zhèn)痛；微米粉末；肛腸病術(shù)后；實驗研究

中圖分類號：R243.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0029-03

清?孫星衍《神農(nóng)本草經(jīng)?卷三?下經(jīng)?蜀椒》：“蜀菽，味辛，溫，主……痹痛……”。清?孫星衍《神農(nóng)本草經(jīng)?卷一?上經(jīng)?防風(fēng)》：“防風(fēng)，味苦，溫，無毒，主大……疼痹（《御覽》作痛）……”。

1 材料與方法

（1）清潔級昆明種小白鼠，雌雄不限，體重為18~22g(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供)，動物合格證：scxk（湘）2004-0005。

（2）實驗器材包括三用恒溫水箱（浙江省余姚市檢測儀表廠生產(chǎn)，浙制02810175），高速離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司生產(chǎn)，TG16-Ⅱ），AO-820組織切片機（美國生產(chǎn)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供），400倍奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（日本生產(chǎn)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供），Thermo multiskanink3酶標(biāo)儀（美國熱電-芬蘭雷勃酶標(biāo)儀MK3）。

（3）實驗藥物包括花椒微米粉末（D50=16.89μm，D90=57.94μm），防風(fēng)微米粉末（D50=7.71μm，D90=32.79μm），由湖南中醫(yī)藥大學(xué)教育部工程技術(shù)研究中心提供。

（4）實驗試劑包括阿司匹林原料藥（山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字號：H37020354，批號：07200），鹽酸曲馬多原料藥（中國科學(xué)院分裝，標(biāo)準(zhǔn)：EP 5.0，批號：070227），PGE2 ELISA試劑盒 （上海森雄科技實業(yè)有限公司進(jìn)口分裝，批號：0711111），β-內(nèi)啡肽 ELISA試劑盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物試劑有限公司原裝進(jìn)口，批號：70621S），冰醋酸溶液（上海試劑一廠生產(chǎn)，批號：AR500mL 050906），分析純，臨用時以蒸餾水配成0.6％濃度。

（5）實驗用藥計算參照《中華人民共和國藥典》（2005版），花椒臨床常用量為5g，防風(fēng)臨床常用量為10g，所有實驗藥物劑量均以其臨床常用量為基準(zhǔn)，參照文獻(xiàn)［1］方法計算。

（6）小鼠熱板法實驗：按文獻(xiàn)［1］方法取合格小鼠（雌性）180只，隨機分為空白組、花椒低劑量組、花椒中劑量組、花椒高劑量組、防風(fēng)低劑量組、防風(fēng)中劑量組、防風(fēng)高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組，觀測指標(biāo)及給藥方法同文獻(xiàn)［2］所述。各組用藥量：空白組：生理鹽水（1mL/只）；花椒低劑量組：0.015g/只；花椒中劑量組：0.03g/只；花椒高劑量組：0.06g/只；防風(fēng)低劑量組：0.03g/只；防風(fēng)中劑量組：0.06g/只；防風(fēng)高劑量組 0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。

（7）小鼠扭體法實驗：按文獻(xiàn)［1］方法將小鼠162只隨機分為9組，各組分組及用藥量同小鼠熱板法實驗，主要觀察指標(biāo)為扭體次數(shù)、扭體抑制率，給藥方法同文獻(xiàn)［1］所述。

（8）肛腸病術(shù)后疼痛模型實驗：參考Milligan-Morgan痔手術(shù)操作方法［4］ 造模，在尾底近端皮膚與粘膜交界處，作尖端向外的倒V字形切口，保持創(chuàng)面約0.5cm×0.5cm大小。隨機選取90只造模成功小鼠，分為模型對照組、花椒高劑量組、防風(fēng)高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組與未造模的正常對照組，共6組，分別給藥如下：正常對照組：適量面粉；模型對照組：適量面粉；花椒高劑量組：0.06g/只；防風(fēng)高劑量組：0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。給藥方式均為用無菌棉簽粘取各藥粉均勻涂于創(chuàng)面，以紗布覆蓋，膠布固定，連續(xù)給藥3天，每天兩次。

（9）小鼠血清中PGE2和β-EP測定：分別采集肛腸病術(shù)后疼痛模型實驗中各組小鼠眼眶靜脈血，分離血清，測定PGE2和β-EP值（采用ELISA法）。

（10）急性皮膚粘膜刺激性實驗：按文獻(xiàn)［3］方法將昆明種小鼠64只隨機分為花椒高劑量組（0.06g/只）、防風(fēng)高劑量組（0.12g/只）。每組中隨機選取一半小鼠保持皮膚完好不受損傷，另外一半小鼠實驗時用75%酒精消毒皮膚，無菌16號針頭將完好皮膚劃#號，滲血為度，用藥方法及觀察方法同文獻(xiàn)［5］所述。

（11）統(tǒng)計學(xué)分析：計量資料以±S表示，統(tǒng)計分析采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板法

從表1可知，花椒、防風(fēng)各組與空白組比較，痛閾提高率有明顯差異（P<0.05），且花椒在痛閾提高率上具有量效關(guān)系；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，痛閾提高率無明顯差異（P＞0.05）；防風(fēng)中劑量組與阿司匹林組比較，痛閾提高率有明顯差別（P<0.05）。br>

2.2 小鼠扭體法

從表2可知，花椒、防風(fēng)各組與空白組比較，抑制率有明顯差異（P<0.05）；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，抑制率無明顯差異（P＞0.05）；防風(fēng)高劑量組與阿司匹林比較，抑制率無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 肛腸病術(shù)后疼痛模型實驗

從表3可知，花椒、防風(fēng)與正常對照組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05）；花椒組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05），與鹽酸曲馬多組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無差異（P＞0.05）；防風(fēng)組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無差異（P＞0.05）。

2.4 急性皮膚粘膜刺激性實驗

由表4、表5可知，用藥前后小鼠體重相當(dāng)，前后比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），肉眼觀察小鼠皮膚毛發(fā)、眼、粘膜、呼吸狀況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等動物的全身情況均未見中毒表現(xiàn)，可認(rèn)為花椒微米粉末與防風(fēng)微米粉末用于皮膚粘膜外用是安全的。

3 討論

花椒在臨床上多入煎劑使用，但也有通過粘膜吸收的報道，歷史上就有通過口腔粘膜及牙周組織吸收治療牙痛的記載?，F(xiàn)代研究有通過鼻粘膜吸收花椒粉末，治療變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的報道［4］，治療時直接經(jīng)鼻孔吸入少許藥粉或用消毒棉簽蘸取藥粉少許供鼻孔吸入，收到明顯效果。臨床還有通過皮膚、粘膜，甚至組織潰瘍面吸收的報道，如李真、周書平［5］等用花椒、食鹽水熏洗坐浴治療肛管疾患術(shù)后，其研究認(rèn)為，花椒、食鹽熏蒸，能使局部血管擴(kuò)張而減輕充血，麻木感覺神經(jīng)而減輕疼痛，取得了良好的臨床效果；周正山［6］用花椒水浸泡治療下肢靜脈曲張潰瘍56例，其中輕度者10天治愈，中度一般7天好轉(zhuǎn)，重度10天好轉(zhuǎn)，有效率100％。以上報道均與本次實驗在用藥方式上有類似之處，為本次實驗提供了有力的證據(jù)。

臧林泉等［7］試驗分析證實，花椒種籽油由棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸及在該種籽油中未見報道的十七碳烯酸組成，主要成分油酸、亞油酸、亞麻酸，混合含量高達(dá)57.549%~87.907%。王軍、梁穎［8］等研究表明α-亞麻酸能顯著抑制大鼠PGE₂的產(chǎn)生，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；本次實驗研究表明，花椒能明顯提高小鼠血清中β-EP的含量，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。

花椒的主要鎮(zhèn)痛成分有花椒酰胺［9］、香豆素類單體化合物香柑內(nèi)酯［10］、hydroxy-α-，β-，γ-sanshool、hydroxy α- sanshool、hydroxy-γ-sanshool［11］，其主要鎮(zhèn)痛機制與中樞去甲腎上腺素能α-受體有關(guān)。王東吉［12］等為了探討花椒的鎮(zhèn)痛作用機制，應(yīng)用電生理學(xué)方法觀察了不同濃度的花椒浸液對蟾蜍離體神經(jīng)干C類纖維動作電位幅度和傳導(dǎo)速度的影響，結(jié)果表明不同濃度的花椒浸液對蟾蜍離體神經(jīng)干C類纖維動作電位幅度和傳導(dǎo)速度均有明顯的抑制作用，且隨著花椒浸液濃度的增高，動作電位消失增快，兩者之間呈顯著負(fù)相關(guān)。

防風(fēng)的主要鎮(zhèn)痛成分有色酮類、香豆素、聚乙炔和1-甘油酯類化合物，divarieatol(8)和(3s)-hydroxydeltoin(12)等，作用最強的是色酮類，其鎮(zhèn)痛機理包括抗炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用和對肝臟代謝酶的抑制作用(延長戊巴比妥誘導(dǎo)的催眠反應(yīng))等［13］。升麻甙(prim-o-glucosylcimifugin)和5-O-甲基維斯阿米醇甙(4，-o-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol)是從防風(fēng)中提取的2種色原酮甙類成分，兩者的作用與強痛定50mg.kg-1組相似。

應(yīng)用小鼠甩尾法(溫浴法)研究結(jié)果表明，升麻甙50mg.kg-1和100mg?kg-1及52O2甲基維斯阿米醇甙25mg?kg-1給小鼠肌肉注射，均有明顯的鎮(zhèn)痛作用?？诜里L(fēng)水煎液40g/kg-1，亦可降低由醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，升高用熱板法測定的痛閾［14］。因此，防風(fēng)有非常明確的鎮(zhèn)痛作用。

防風(fēng)揮發(fā)油對多種炎癥有顯著的抑制作用，并能減少炎癥介質(zhì)PGE₂的含量；防風(fēng)在多個復(fù)方中能提高β-EP的含量，在本次實驗研究中亦表明有此作用。

總之，本次實驗研究證明，花椒、防風(fēng)微米粉末確有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且花椒的鎮(zhèn)痛作用強于防風(fēng)。

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（責(zé)任編輯：陳涌濤）