摘要：通過生物信息學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以及實驗驗證相結(jié)合的方法，預(yù)測并驗證柴胡-白芍藥對抗乳腺癌配伍機(jī)制。獲取癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫中乳腺癌基因表達(dá)數(shù)據(jù)，篩選得到乳腺癌靶點；通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（Traditional" Chinese Medicine Systems Pharmacology Database，TCMSP）數(shù)據(jù)庫、SEA（Similarity" Ensemble Approach）數(shù)據(jù)庫、Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫和Super" PRED數(shù)據(jù)庫收集柴胡、白芍潛在活性成分及靶點，對靶點進(jìn)行京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析；構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)與成分-靶點網(wǎng)絡(luò)，篩選得到乳腺癌關(guān)鍵靶點絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（Polo-like kinase 1， PLK1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶1（cyclin dependent kinase 1， CDK1）及柴胡-白芍抗乳腺癌關(guān)鍵成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D和芍藥苷；通過Autodock 軟件對關(guān)鍵成分及靶點進(jìn)行分子對接驗證，并通過細(xì)胞實驗驗證關(guān)鍵成分的抗乳腺癌活性，其中通過Chou-Talalay 模型證明了柴胡皂苷D與芍藥苷之間存在協(xié)同增效作用；通過流式細(xì)胞術(shù)及蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）實驗證明了柴胡皂苷D和芍藥苷能夠通過阻滯細(xì)胞周期于G2/M期發(fā)揮抗乳腺癌作用。

關(guān)鍵詞：生物信息學(xué)；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；柴胡；白芍；乳腺癌

中圖分類號：R285.；5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：0253-2395（2025）02-0278-11

0引言

乳腺癌是發(fā)生于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，現(xiàn)有統(tǒng)計顯示我國乳腺癌發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位于首位，中國的乳腺癌發(fā)病率每年以2%～3% 的速度增長，全國每年新增約21 萬乳腺癌患者［1］。乳腺癌屬中醫(yī)學(xué)“乳巖”“乳石癰”等范疇，名老中醫(yī)們認(rèn)為乳腺癌是由于正氣不足，七情所傷，肝、脾、腎等臟腑功能失調(diào)，氣血不足、沖任失調(diào)等多種致病因素長期作用下導(dǎo)致的氣滯、痰濁、瘀血、邪毒等相互作用于乳房而形成的腫塊［2］。中醫(yī)藥對于乳腺癌的治療原則基于“瘀、毒、虛”這一基本病機(jī)，多采用疏肝健脾、化瘀解毒等法，常見的方劑有逍遙散（柴胡、當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)、甘草、生姜、薄荷）、柴胡疏肝散（柴胡、陳皮、川芎、香附、枳殼、芍藥、甘草）、四逆散（柴胡、白芍、枳實、甘草）等調(diào)肝理脾方劑［3-4］。劉杉杉通過對乳腺癌患者的中藥處方進(jìn)行藥物組合規(guī)律統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)高頻藥物組合及藥對組合主要以逍遙散藥物加減組成為主，其中柴胡- 白芍為最常用的藥物組合之一，并且在臨床常用于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌，注重疏肝解郁、調(diào)肝理脾的主要治法。柴胡升發(fā)陽氣、疏肝解郁，白芍柔肝且養(yǎng)血，與柴胡相輔相成，兩者聯(lián)用即可疏肝行氣，又可調(diào)肝郁血虛之證［4］。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種利用系統(tǒng)生物學(xué)方法研究藥物作用機(jī)制的學(xué)科，其已在中藥抗乳腺癌的研究中得到越來越多的應(yīng)用。近年來有大量研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法揭示了中藥抗乳腺癌的作用機(jī)制，如四物湯中的山柰酚、β -谷甾醇、沒食子酸等能通過調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程、血管生成等通路發(fā)揮治療乳腺癌的作用，表明了其具有多成分和多通路協(xié)同作用的特點［5］。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法也發(fā)現(xiàn)了逍遙散能夠通過干預(yù)腫瘤免疫、炎癥反應(yīng)等多類型細(xì)胞通路協(xié)同發(fā)揮抗三陰性乳腺癌的作用［6］。中藥復(fù)方中的藥物常包含多種活性成分，各自具有不同的藥理活性，作為逍遙散的主要組成部分，柴胡- 白芍藥對抗乳腺癌的作用有待進(jìn)一步探究。

本研究基于基因表達(dá)數(shù)據(jù)，將生物信息學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法相結(jié)合，篩選柴胡- 白芍發(fā)揮抗乳腺癌作用的成分、靶點和通路，預(yù)測得到的潛在活性成分與靶蛋白進(jìn)行分子對接，通過體外細(xì)胞實驗進(jìn)行初步驗證，闡明柴胡- 白芍抗乳腺癌的作用機(jī)制，不僅能為以該藥為基礎(chǔ)的中藥復(fù)方抗乳腺癌研究提供科學(xué)依據(jù)，同時也為含該藥對的中藥復(fù)方臨床治療乳腺癌提供應(yīng)用參考，有助于揭示傳統(tǒng)中藥的作用機(jī)制，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化發(fā)展。

1材料

1.1細(xì)胞株

小鼠乳腺癌細(xì)胞（4T1）購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

1.2藥品與試劑

Roswell Park Memorial Institute Medium（RPMI）1640 培養(yǎng)基、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）購自武漢塞維爾生物科技有限公司；胰蛋白酶、Radio Immunoprecipitation Assay（RIPA）強(qiáng)裂解液、噻唑藍(lán)（MTT）購自上海碧云天生物科技有限公司；柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D、芍藥苷購自成都埃法生物科技公司；細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 1（cyclin dependentkinase 1，CDK1）抗體、β - 肌動蛋白（β-actin）抗體、Horseradish Peroxidase（HRP）標(biāo)記的二抗PLK1 抗體購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.3儀器

CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀購自Thermo FisherScientific公司；流式細(xì)胞儀購自美國BD公司（Becton，Dickinson and Company）；低溫高速離心機(jī)購自Eppendorf 公司；垂直電泳儀、凝膠成像儀購自Bio-Rad 公司。

2方法

2.1乳腺癌靶點獲取

在癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫（https：//portal. gdc. cancer.gov/）中獲取乳腺癌基因表達(dá)數(shù)據(jù)，將基因表達(dá)譜進(jìn)行l(wèi)og2 轉(zhuǎn)換，差異表達(dá)基因（differential expressiongenes，DEGs）分析使用limma 軟件包，并以|log2 fold change|≥2 和Plt;0.05 為條件進(jìn)行篩選，篩選后得到的差異基因作為乳腺癌靶點［7］。

2.2乳腺癌關(guān)鍵靶點篩選

String在線網(wǎng)站用于構(gòu)建乳腺癌靶點的蛋白-蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)出文件并使用Cytoscape3.9.1軟件中的分子復(fù)合體檢測（MolecularComplex Detection，MCODE）插件進(jìn)行高密度子網(wǎng)的分析，所有條件為默認(rèn)值：度閾值（Degree Cutoff）＝2，節(jié)點評分閾值（Node Score Cutoff）＝0.2，k- 核心（k-Core）＝2，最大深度（Max.Depth）＝100；將得分最高的子網(wǎng)作為乳腺癌關(guān)鍵靶點。

2.3柴胡、白芍潛在活性成分收集及靶點預(yù)測

在TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：//old. tcmsp-e.com/tcmsp.php）中以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、藥物相似性（drug-likeproperties，DL）≥0.18 為條件，篩選柴胡、白芍潛在活性成分，并獲取活性成分對應(yīng)的靶點。此外，通過查詢文獻(xiàn)，補充數(shù)據(jù)庫中未收錄但具有抗癌活性的成分，獲取成分的簡化分子線性輸入規(guī)范（Simplified Molecular Input Line EntrySystem，SMILES）號，并導(dǎo)入到SEA 數(shù)據(jù)庫、Super PRED 數(shù)據(jù)庫和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行靶點預(yù)測，將上述靶點合并、去重即為柴胡-白芍靶點［8］。

2.4拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及通路富集分析

將乳腺癌靶點與柴胡- 白芍靶點取交集，即為柴胡-白芍抗乳腺癌靶點。在Cytoscape 軟件中構(gòu)建成分- 靶點（C-T）網(wǎng)絡(luò)，用于分析成分與靶點之間的相互作用關(guān)系。在DAVID 網(wǎng)站（https：//david.ncifcrf.gov/tools.jsp）中進(jìn)行柴胡- 白芍抗乳腺癌靶點的KEGG 通路富集分析［9］。

2.5關(guān)鍵活性成分及靶點篩選

將乳腺癌關(guān)鍵靶點與柴胡- 白芍靶點取交集，即得柴胡-白芍抗乳腺癌關(guān)鍵成分及靶點。

2.6關(guān)鍵成分與靶點分子對接驗證

通過Autodock 軟件進(jìn)行分子對接驗證，簡單來說，分別從Pubchem 數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi. nlm. nih. gov/）及RCSB PDB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org/）獲取小分子sdf 文件及蛋白pbd結(jié)構(gòu)，使用Autodock Tools 進(jìn)行蛋白和小分子的前處理，然后進(jìn)行對接。分子對接得到的結(jié)合能越低表示結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定，最后使用Pymol 軟件進(jìn)行可視化處理。

2.7關(guān)鍵靶點生物信息學(xué)分析

在UCSC數(shù)據(jù)庫（（https：//xenabrowser.net/））中下載經(jīng)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化的泛癌數(shù)據(jù)集，并提取關(guān)鍵靶點在乳腺癌各個樣本中的表達(dá)數(shù)據(jù)，進(jìn)行l(wèi)og2轉(zhuǎn)換，繪制靶點在腫瘤組織及正常組織中的基因表達(dá)量圖。提取TCGA 數(shù)據(jù)庫中乳腺癌的臨床信息，繪制關(guān)鍵靶點的臨床分期、生存時間與表達(dá)量的關(guān)系圖，以及免疫細(xì)胞浸潤的相關(guān)性等。

2.8細(xì)胞存活實驗及藥物協(xié)同作用驗證

將處于對數(shù)生長期的4T1細(xì)胞接種于96孔板中，每孔5000個細(xì)胞，同時設(shè)置對照組，待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行藥物處理，然后每孔加入10μL的MTT，孵育4h后加入DMSO置于酶標(biāo)儀上測定吸光度，檢測細(xì)胞存活率。通過Chou-Tatalay 模型探究兩個單體成分之間的協(xié)同關(guān)系，藥物組合指數(shù)（CI）lt;1為協(xié)同作用。

2.9流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布

將細(xì)胞接種于6 孔板中，待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行藥物處理，然后收集細(xì)胞使用體積分?jǐn)?shù)75%乙醇4 ℃ 固定，使用PI 進(jìn)行染色，置于BD AccuriC6流式細(xì)胞儀檢測，使用Modfit 軟件分析各周期的分布情況。

2.10Western blot法檢測蛋白表達(dá)

將細(xì)胞接種于6孔板中，進(jìn)行給藥處理，收集細(xì)胞后使用RIPA裂解液在冰上裂解細(xì)胞，離心獲取上清液，蛋白變性后進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜，使用快速封閉液進(jìn)行封閉，對應(yīng)的一抗4 ℃ 孵育過夜，洗膜后二抗室溫孵育1 h，置于化學(xué)發(fā)光成像儀上檢測蛋白表達(dá)情況。

2.11統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 9.0 軟件進(jìn)行處理，方法采用單因素方差分析（One-way" ANO?VA），Plt;0.05表示有差異。

3結(jié)果

3.1柴胡-白芍抗乳腺癌成分及靶點

對TCGA 基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異基因分析，結(jié)果顯示共有1926個差異基因，其中上調(diào)550個，下調(diào)1 376 個（圖1（a））。通過檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選并進(jìn)行文獻(xiàn)補充，整理得到柴胡有17個潛在活性成分，白芍有10 個活性成分（表1）。通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫、SEA數(shù)據(jù)庫、Swiss targetprediction 數(shù)據(jù)庫及Super PRED 數(shù)據(jù)庫預(yù)測得到柴胡靶點341個、白芍靶點269 個，與乳腺癌靶點取交集得到柴胡-白芍潛在抗乳腺癌成分20個，其中柴胡13個，白芍7個，對應(yīng)抗乳腺癌靶點76個，其中柴胡獨自調(diào)控28個，白芍獨自調(diào)控20個，兩者共同調(diào)控28 個（圖1（b），圖1（c））。

3. 2 KEGG通路富集分析

分別對柴胡及白芍抗乳腺癌靶點進(jìn)行通路富集，根據(jù)pvalue 進(jìn)行排序，分析可發(fā)現(xiàn)，柴胡和白芍所調(diào)節(jié)的20條通路中，兩藥共同調(diào)控的通路有11 條。其中柴胡調(diào)控的前5條通路分別為癌癥通路、鈣信號通路、表皮生長因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑抵抗、白細(xì)胞介素17（IL-17）信號通路、膀胱癌；白芍調(diào)控的前5條通路分別為癌癥通路、鈣信號通路、EGFR 酪氨酸激酶抑制劑抵抗、IL-17信號通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用（圖2）。

3.3關(guān)鍵活性成分及靶點篩選

為了進(jìn)一步探索柴胡-白芍抗乳腺癌的關(guān)鍵成分及靶點，首先對乳腺癌靶點進(jìn)行關(guān)鍵靶點分析，通過Cytoscape軟件中的MCODE插件分析得到關(guān)聯(lián)最密切的PPI 網(wǎng)絡(luò)包含靶點99個（圖3（a）），再與柴胡、白芍靶點取交集得到柴胡抗乳腺癌靶點5個（BIRC5、CCNA2、CCNB1、PLK1、TOP2A），白芍抗乳腺癌靶點2個（AURKA、CDK1）（圖3（b）），對應(yīng)的成分有芍藥內(nèi)酯苷（AURKA）、芍藥苷（CDK1）、槲皮素（BIRC5、CCNB1、TOP2A）、異鼠李素（CCNA2）、柴胡皂苷A（PLK1）、柴胡皂苷B2（PLK1）、柴胡皂苷D（PLK1）。

3.4分子對接驗證結(jié)果

使用分子對接技術(shù)預(yù)測柴胡、白芍關(guān)鍵成分與靶點之間的結(jié)合活性，在3.3所篩選的關(guān)鍵成分中，槲皮素和異鼠李素存在于較多中藥，不具有相對的特異性，同時依據(jù)文獻(xiàn)報道成分所在中藥中的含量及其抗肝癌活性，最終選取柴胡中的柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D及白芍中的成分芍藥苷，與對應(yīng)的靶點PLK1 和CDK1 進(jìn)行對接，通過Pymol 軟件對關(guān)鍵成分及靶點對接情況進(jìn)行可視化，結(jié)果如圖4 所示，各成分與靶點之間均能通過形成氫鍵的方式進(jìn)行結(jié)合，且結(jié)合活性均較強(qiáng)，各單體與靶點之間的結(jié)合能分別為-3.37 kJ/mol、-5.32 kJ/mol、-4.66 kJ/mol、-5.37 kJ/mol。

3.5關(guān)鍵靶點的生物信息學(xué)分析

為了探究關(guān)鍵靶點在乳腺癌進(jìn)展中的作用，通過生物信息學(xué)對關(guān)鍵靶點在腫瘤組織及正常組織中的表達(dá)、關(guān)鍵靶點與乳腺癌臨床分期、關(guān)鍵靶點在乳腺癌中的免疫浸潤等進(jìn)行分析。結(jié)果顯示PLK1 和CDK1在乳腺癌組織和正常組織中的表達(dá)據(jù)有顯著性差異，見圖5（a）、圖5（d），并且這兩個基因的高表達(dá)與乳腺癌的生存時間縮短以及臨床分期有明顯相關(guān)性見圖5（b）、圖5（c）、圖5（e）、圖5（f），以及免疫浸潤分析結(jié)果顯示PLK1 和CDK1 與免疫細(xì)胞浸潤均顯著相關(guān)，見圖5（g）。

3. 6柴胡、白芍活性成分抗乳腺癌作用及藥物協(xié)同作用研究

如圖6（a）所示，不同濃度的柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D、芍藥苷作用24h后對乳腺癌細(xì)胞的增殖有抑制作用，且呈劑量依賴性，各成分作用的半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）分別為柴胡皂苷A 8.01μmol/L，柴胡皂苷B2 75.84μmol/L，柴胡皂苷D 4.89μmol/L，芍藥苷104.40 μmol/L。

為了進(jìn)一步探究柴胡- 白芍藥對成分配伍的抗乳腺癌協(xié)同作用，根據(jù)各單體藥物對細(xì)胞存活率的影響，分別在柴胡和白芍中選取毒性最強(qiáng)的單體，利用Chou-Talalay 數(shù)學(xué)模型來評價篩選得到的關(guān)鍵成分——柴胡皂苷D 和芍藥苷之間是否存在一種協(xié)同作用。結(jié)果顯示，相較于單獨使用柴胡皂苷D 或芍藥苷，兩者聯(lián)合使用顯示出了更強(qiáng)的抑制作用。為了探究兩藥組合是否具有協(xié)同作用，使用CompuSyn 軟件進(jìn)行協(xié)同作用的計算，將所得抑制率輸入到軟件中，結(jié)果表明除了6 μmol/L 的組合之外，其余組合均表現(xiàn)出協(xié)同作用（CIlt;1），且最佳協(xié)同計量為10 μmol/L 的組合。

3.7柴胡皂苷D與芍藥苷對細(xì)胞周期的影響

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，各濃度的柴胡皂苷D和芍藥苷均能將細(xì)胞周期阻滯于G2/M 期，且呈劑量依賴性。相對于單用藥來看，柴胡皂苷D與芍藥苷聯(lián)合使用（10 μmol/L+10 μmol/L）表現(xiàn)出明顯的增效作用（Plt;0. 01）。

3. 8Western blotting 法檢測蛋白表達(dá)

蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，柴胡皂苷D（10 μmol/L）、芍藥苷（10 μmol/L）均能降低細(xì)胞周期調(diào)控蛋白CDK1 及激酶PLK1 的表達(dá)，且兩藥聯(lián)合使用（10 μmol/L、10 μmol/L）作用更顯著。

4討論

中醫(yī)多認(rèn)為乳腺癌早期常為肝氣郁結(jié)，其后則出現(xiàn)氣滯血瘀的癥狀，因此通常將溫陽扶正、疏肝解郁、補益沖任作為治療原則［10］。逍遙散組方嚴(yán)謹(jǐn)，首載于宋代《太平惠民和劑局方》卷九：“治婦人諸疾”，是常用的疏肝解郁類方劑，目前臨床上廣泛應(yīng)用于乳腺癌及乳腺癌患者相關(guān)性疲乏、乳腺癌相關(guān)抑郁發(fā)展等疾病的治療［11-14］。柴胡- 白芍為逍遙散中的君藥、臣藥，柴胡苦、辛，歸肝、膽經(jīng)，具有疏肝解郁，升舉陽氣的功效；白芍柔肝止痛，歸肝、脾經(jīng)［15］。作為逍遙散中的核心藥對，柴胡- 白芍抗乳腺癌的潛在作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本研究旨在通過結(jié)合多種藥理研究中常用的方法如生物信息學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接等預(yù)測柴胡- 白芍抗乳腺癌的作用成分和機(jī)制，同時探究其配伍協(xié)同機(jī)制。結(jié)果顯示，柴胡- 白芍抗乳腺癌成分共20 個，其中柴胡13個，白芍7 個，對應(yīng)76 個抗乳腺癌靶點，其中柴胡獨立調(diào)控28 個，白芍獨立調(diào)控20個，共同調(diào)節(jié)28個。通過KEGG通路富集分析預(yù)測得到柴胡和白芍共調(diào)節(jié)29 條抗乳腺癌通路，共同調(diào)控11條，以上結(jié)果從成分到通路都說明柴胡和白芍之前的協(xié)同配伍組作用。

為了進(jìn)一步明確其發(fā)揮抗乳腺癌作用的關(guān)鍵成分及靶點，首先對乳腺癌靶點進(jìn)行關(guān)鍵子網(wǎng)的篩選，進(jìn)一步得到柴胡- 白芍中主要是柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D 以及芍藥苷發(fā)揮關(guān)鍵抗乳腺癌作用，其作用靶點為CDK1 和PLK1。PLK1是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，能夠通過調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂、G2/M 的DNA 損傷應(yīng)答等，已被證實在乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌等多種腫瘤組織中高表達(dá)［16-17］。同樣，CDK1作為調(diào)控G2/M 期的關(guān)鍵蛋白，也在腫瘤增殖進(jìn)程的調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，CDK1過表達(dá)使腫瘤細(xì)胞過度增殖［18］。分子對接結(jié)果顯示芍藥苷、柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D 與CDK1 和PLK1 均有較高的結(jié)合活性，研究發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷D 能夠降低MDA-MB-231細(xì)胞周期調(diào)控因子cyclin B1的表達(dá)，將細(xì)胞周期阻滯于G2/M 期，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖［19-20］。通過細(xì)胞實驗驗證了該藥對中4個關(guān)鍵成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D和芍藥苷，均能顯示出抗乳腺癌細(xì)胞生長的作用；選取柴胡中效果最佳的柴胡皂苷D 與芍藥苷進(jìn)行協(xié)同作用評價，發(fā)現(xiàn)兩藥之間確存在協(xié)同作用，最佳濃度協(xié)同劑量為10 μmol/L。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與western blot 結(jié)果也顯示，兩成分使用能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞周期阻滯于G2/M 期，且能夠協(xié)同抑制周期蛋白CDK1 及PLK1 的表達(dá)。

本研究基于TCGA 數(shù)據(jù)庫乳腺癌基因表達(dá)數(shù)據(jù)，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法及體外細(xì)胞實驗驗證了柴胡、白芍能夠通過多成分間的協(xié)同作用以及誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯發(fā)揮抗乳腺癌的作用，并存在協(xié)同增效作用。本研究可為柴胡-白芍抗乳腺癌應(yīng)用提供一定參考，在中藥研究領(lǐng)域具有重要意義，有助于推動中藥在癌癥治療中的發(fā)展，為中藥的臨床應(yīng)用提供更深入的理論支持，但有關(guān)結(jié)果有待進(jìn)一步的體內(nèi)試驗加以驗證。