摘要：建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法，同時(shí)測定溴吡斯的明片中7種元素雜質(zhì)的含量，并對方法學(xué)進(jìn)行全面的驗(yàn)證。將樣品直接稀釋后，采用ICP-MS法對溴吡斯的明片中的鉛、鎘、砷、鈷、釩、鎳、汞等7種元素雜質(zhì)進(jìn)行含量檢測和方法學(xué)驗(yàn)證，并通過引入多內(nèi)標(biāo)元素進(jìn)行實(shí)時(shí)校正檢測結(jié)果。ICP-MS法檢測結(jié)果顯示，此7種金屬元素含量均遠(yuǎn)低于各元素的限值，確定溴吡斯的明片不存在安全性風(fēng)險(xiǎn)。所建立的方法靈敏度高、干擾少、準(zhǔn)確可靠，可用于溴吡斯的明片中元素雜質(zhì)的分析檢測。

關(guān)鍵詞：溴吡斯的明片；元素雜質(zhì)；限值；ICP-MS法

溴吡斯的明是一種膽堿酯酶抑制劑，具有降低乙酰膽堿被膽堿酯酶水解的能力，保證突觸間隙中乙酰膽堿的積聚，從而提高胃腸道、支氣管平滑肌和全身骨骼肌的肌張力［1］。臨床上用于改善重癥肌無力的癥狀，也適用于尿潴留、手術(shù)后腹脹氣及室上性心動(dòng)過速等［23］。

在溴吡斯的明片生產(chǎn)過程中，生產(chǎn)設(shè)備、原料、催化劑和助劑、藥品包裝材料、生產(chǎn)工藝以及生產(chǎn)環(huán)境中存在的金屬粉塵和煙霧等都可能會(huì)引入元素雜質(zhì)［4］。目前國內(nèi)外藥典收錄的溴吡斯的明元素雜質(zhì)檢測方法中，元素雜質(zhì)限量檢查在準(zhǔn)確度、專屬性、線性范圍等方面均存在不足。為了確保溴吡斯的明片的純度和療效以及保障人體用藥安全，建立可靠、科學(xué)且準(zhǔn)確的溴吡斯的明片中的元素雜質(zhì)測定方法是必要的。本研究創(chuàng)建電感耦合等離子體質(zhì)譜法用于測定溴吡斯的明片中7種元素雜質(zhì)的含量，這種方法具有高靈敏度、低干擾和良好的準(zhǔn)確度，適用于該藥物成品的質(zhì)量控制［5］。

1儀器與試藥

7700X ICP-MS（Agilent，美國）；BT-125D 型電子天平（Sartorius，公司）。溴吡斯的明片（批號：2309001，2309001，2309001，規(guī)格：60 mg/片，吉林省博大偉業(yè)制藥有限公司）；元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/mL，北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院）；鹽酸（分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司）；超純水。

2方法與結(jié)果

本方法依據(jù)USP36版Pharmacopeial Forumlt;233gt;中關(guān)于藥物ICP-MS元素分析法而建立。測試時(shí)，采用多內(nèi)標(biāo)實(shí)時(shí)校準(zhǔn)儀器，用鹽酸處理汞，以減少記憶效應(yīng)。

2.1ICP-MS儀器參數(shù)

金屬離子ICP-MS測定實(shí)驗(yàn)設(shè)置參數(shù)（參數(shù)-設(shè)定值）;

等離子體功率-1 500 W；

鎳采樣錐孔徑-1.2 mm（i.d.）；

霧室壓力-330 bar；

鎳截取錐孔徑-1.0 mm（i.d.）；

冷卻氣流量-15 L/min；

碰撞反應(yīng)氣-He；

輔助氣流量-1.1 L/min。

2.2溶液的配制

2.2.1工作曲線標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置（V、Co、Ni、As、Cd、Pb、Hg）分別精密量取質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的釩（V）、鈷（Co）、鎳（Ni）、砷（As）、鎘（Cd）及鉛（Pb）單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL、0.25 mL、1.00 mL、75.00 μL、25.00 μL于50 mL量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，作為多元素儲(chǔ)備液。精密量取1 000 μg/mL的汞（Hg）單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液30 μL于50 mL量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液定容，搖勻，作為Hg元素儲(chǔ)備液。分別精密量取多元素儲(chǔ)備液0.2、0.5、1.0、1.5、4.0 mL及Hg元素儲(chǔ)備液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于50 mL量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液定容，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2.2.2內(nèi)標(biāo)溶液的配制（Ge、In、Sc、Bi）

精密量取1 000 μg/mL單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液50 μL于50 mL量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液定容，制得質(zhì)量濃度為1 000 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.3供試品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取供試品3.5 g于聚四氟材質(zhì)溶出杯中，再加入0.1 mol/L鹽酸250 mL，照溶出度測定法溶出。經(jīng)120 min后取樣，以3 200 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液，過濾，即得。

2.3精密度測定

選取V、Co、Ni、As、Cd和Pb元素質(zhì)量濃度分別為200、100、400、30、10和10 ng/mL的混合溶液與質(zhì)量濃度為6 ng/mL的Hg溶液，分別引入，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄原始數(shù)據(jù)，計(jì)算各元素的質(zhì)量濃度RSD。結(jié)果表明，元素質(zhì)量濃度RSD均低于20%，說明具有良好的檢測精密度。

2.4定量限與檢測限的確定

以流程空白10次測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）的3倍（3σ）定義為檢測限，10倍（10σ）定義為定量限，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算各元素定量限和檢測限。結(jié)果顯示，各元素定量限與檢測限均低于對應(yīng)元素的檢出限值，表明各元素均能滿足限度要求下的有效檢出及準(zhǔn)確定量測定。

2.5線性與范圍

精密量取各元素雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液和空白溶液（0.1 mol/L鹽酸溶液），分別用ICP-MS測試，記錄濃度及其所對應(yīng)的強(qiáng)度值。對溶液的質(zhì)量濃度（X，單位：ng/mL）與相應(yīng)的比率（Y）作線，計(jì)算其相關(guān)系數(shù)R。結(jié)果顯示，基于限值要求上，各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合系數(shù)均≥0.995，線性關(guān)系良好。

2.6重復(fù)性測定

取待測樣品6份，按2.2.3方法處理，依測定方法分別引入ICP-MS儀，計(jì)算各元素含量的RSD值。結(jié)果，均未檢出Cd和Hg（lt;定量限）；V、Co、Ni、As和Pb含量的RSD均小于20%，重復(fù)性良好。

2.7中間精度的評估。

由不同實(shí)驗(yàn)人員操作，按重復(fù)性測定方法操作。結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)人員所測定各元素含量的RSD以及合并RSD均未超過20%，具有較好的中間精密度。

2.8準(zhǔn)確度

按照供試品溶液的制備方法操作后，在溶出杯中依次加入質(zhì)量濃度分別為4.0、5.0、20.0、1.5、0.5和0.3 μg/mL的各元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，體積分別為2.5、5.0與7.5 mL，作為低、中、高質(zhì)量濃度的溶液（分別為50%、100%、150%），每個(gè)質(zhì)量濃度各制備3份，分別引入ICP-MS儀測定。結(jié)果表明，各檢測元素的回收率均在80%～120%范圍內(nèi)，RSD小于20%，回收率結(jié)果具有良好的精密度，具有較高的準(zhǔn)確性。

2.9專屬性實(shí)驗(yàn)

取空白溶液（0.1 mol/L鹽酸）、對照品溶液（線性3）及供試品溶液（重復(fù)性1）進(jìn)樣，測定結(jié)果見表1，各雜質(zhì)含量均能有效檢出，且空白溶劑不干擾各元素的檢出。

2.10安全性評估

2.10.1安全評價(jià)限度計(jì)算

溴吡斯的明片為口服藥，以溴吡斯的明片每日口服最大攝入量為7.0 g，根據(jù)ICH Q3D規(guī)定的口服藥品中的各元素雜質(zhì)每日允許暴露量（PDE）確定檢測元素的限值，結(jié)果見表2。

2.10.2樣品測定

取3批次樣品和空白輔料，按照2.2.3方法處理后進(jìn)樣分析。計(jì)算樣品和空白輔料中各元素的含量，比較溴吡斯的明片與空白輔料中7種元素各自的檢測限與相應(yīng)的限值。在各元素均能滿足限度要求有效檢出的前提下，溴吡斯的明片自制制劑及空白輔料中7種金屬元素含量均小于各自的限值，結(jié)果完全符合ICH Q3D元素雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則中的口服給藥途徑下各元素雜質(zhì)的限度要求，表明藥品的原料、生產(chǎn)過程和包裝過程等均得到有效管理，控制好元素雜質(zhì)的引入，不再存在安全問題，在生產(chǎn)時(shí)無需采取額外的控制措施。

3結(jié)語

采用ICP-MS法對溴吡斯的明片中V、Co、Ni、As、Cd、Pb和Hg等7種元素雜質(zhì)含量進(jìn)行了檢測，并基于USP36版Pharmacopeial Forumlt;233gt;中關(guān)于藥物中元素分析方法對各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，ICP-MS法的精密度、線性、準(zhǔn)確度與專屬性等參數(shù)均符合方法學(xué)驗(yàn)證要求，因此，該方法重現(xiàn)性高、線性良好、偏差小、準(zhǔn)確可靠，可對溴吡斯的明片中的元素雜質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確評估與檢測，可為溴吡斯的明制劑元素雜質(zhì)分析方法的建立與評估提供參考。

參考文獻(xiàn)：

［1］王丙建.膽堿酯酶抑制劑的藥物分析［J］.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2015，15（66）：250，254.

［2］俞海，蔣雨平.重癥肌無力的治療［J］.中國臨床神經(jīng)科學(xué)，2018，26（6）：658-668，675.

［3］任愛民，楊丹，韓立敏，等.聯(lián)合應(yīng)用坦素羅辛與溴吡斯的明治療宮頸癌術(shù)后尿潴留［J］.復(fù)旦大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008（3）：373-375，379.

［4］王宏亮.金屬參與的化學(xué)合成原料藥元素雜質(zhì)來源淺析［J］.藥物評價(jià)研究，2023，46（12）：2689-2698.

［5］魏瑞麗.ICP-MS技術(shù)在重金屬元素檢測中的應(yīng)用［J］.綠色科技，2019（16）：189-190.

作者簡介：王凌云，女，山東德州人，碩士研究生，研究方向：工業(yè)藥學(xué)。

通信作者：田玉順，女，吉林琿春人，副教授，博士研究生，研究方向：小分子活性化合物的設(shè)計(jì)、合成及生物學(xué)研究。