摘 要：為探究鬼點(diǎn)燈（Bothriospermum zeylanicum）的抗結(jié)直腸癌活性成分，該研究采用ODS反相柱色譜、高壓制備液相色譜等方法對(duì)乙酸乙酯部進(jìn)行分離純化，通過質(zhì)譜及核磁共振等波譜分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)，并釆用CCK8法檢測化合物對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞（SW620、HT-29）及人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞（NCM460） 增殖的影響。結(jié)果表明：（1）從鬼點(diǎn)燈乙酸乙酯部共分離得到12個(gè)化合物，分別鑒定為富馬酸（1）、原兒茶酸（2）、富馬酸單甲酯（3）、3，4，α-三羥基甲基苯丙酸酯（4）、對(duì)羥基苯甲酸（5）、echiumin A（6）、echiumin B（7）、（+）-異落葉松脂素-2a-O-β-D-葡萄糖苷（8）、對(duì)香豆酰-α-L-鼠李吡喃糖苷（9）、對(duì)香豆酸（10）、（-）-5′-甲氧基異落葉松脂醇-3α-O-β-D-葡萄糖苷（11）、rupestrin B（12）?；衔?-12均為首次從鬼點(diǎn)燈中分離得到。（2）化合物8和化合物12對(duì)SW620細(xì)胞增殖具有一定抑制作用，其IC₅₀值分別為（9.34±1.10） μmol·L^-1和（0.33±0.06） μmol·L^-1，化合物12對(duì)HT-29細(xì)胞增殖具有一定的抑制作用，其IC₅₀值為（15.94±1.56） μmol·L^-1。該研究結(jié)果豐富了鬼點(diǎn)燈的化學(xué)成分，進(jìn)一步明確了其抗結(jié)直腸癌活性成分，為鬼點(diǎn)燈的藥效開發(fā)與利用提供了參考。

關(guān)鍵詞：鬼點(diǎn)燈，化學(xué)成分，結(jié)構(gòu)鑒定，抗結(jié)直腸癌活性，乙酸乙酯部

中圖分類號(hào)：Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-3142（2025）02-0328-09

基金項(xiàng)目：2022年度“宿遷英才”群英計(jì)劃青年項(xiàng)目；宿遷市科技局自然科學(xué)基金青年科技人才項(xiàng)目（K202202）；金華市科技局青年人才基金項(xiàng)目（2023KR03）；廣西科技基地和人才專項(xiàng)（桂科AD17195002）。

第一作者：趙小超（1988—），碩士，主管中藥師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理研究，（E-mail）515532094@qq.com。

^*通信作者：林霄，博士，研究員，主要從事海洋天然產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)及活性研究，（E-mail） linxiaolegend@163.com。

Chemical constituents and anti-colorectal cancer activity of Bothriospermum zeylanicum

ZHAO Xiaochao¹，CHAI Ling²，LIN Xiao^3*，SHANG Xun¹，GE Zhumei¹，WAN Guangwen¹

（1. Suqian Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Suqian 223800，Jiangsu，China; 2. Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards，Nanning 530000，China; 3. Institute of Marine Medicine，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530000，China）

Abstract：In order to explore the anti-colorectal cancer activity constituents of Bothriospermum zeylanicum，the compounds were isolated from the ethyl acetate fraction by ODS reversed phase column chromatography，high-pressure preparative liquid chromatography and other methods. MS，NMR and other spectroscopic were used to identify the structure of the compounds. And then the effects of the compounds on the proliferation of human colorectal cancer cells （SW620，HT-29） and human normal colon epithelial cells （NCM460） were detected by CCK8 method. The results were as follows：（1） A total of 12 compounds were identified from the ethyl acetate fraction of B. zeylanicum，including fumaric acid （1），protocatechuic acid （2），monomethyl fumarate （3），3，4，α-trihydroxymethylphenyl propionate （4），p-hydroxybenzoic acid （5），echiumin A （6），echiumin B （7），（+）-isolariciresinol-2a-O-β-D-glucopyranoside（8），p-coumaroyl-α-L-rhamnopyranoside （9），p-coumaric acid （10），（-）-5-methoxyisolariciresinol-3α-O-β-D-glucopyranoside （11），rupestrin B （12）. Compounds 1-12 were isolated from B. zeylanicum for the first time. （2） Compounds 8 and 12 showed a certain inhibitory effect on the proliferation of SW620 cells，with IC₅₀ values of（9.34±1.10） μmol·L^-1 and（0.33±0.06） μmol·L^-1，respectively. Compound 12 showed a certain inhibitory effect on the proliferation of HT-29 cells，with IC₅₀ value of（15.94±1.56） μmol·L^-1. This finding enriches the chemical constituents of B. zeylanicum，and it further clarifies its anti-colorectal cancer activity constituents and which provides a reference for the development and utilization of B. zeylanicum.

Key words：Bothriospermum zeylanicum，chemical constituents，structure identification，anti-colorectal cancer activity，ethyl acetate fraction

鬼點(diǎn)燈為紫草科植物柔弱斑種草（Bothriospermum zeylanicum）的干燥全草，全國各地均有分布，有小毒，具有止咳、止血的功效（國家中醫(yī)藥管理局編委會(huì)，1999；蘇鈺嵐，2021），《民間常用草藥匯編》《中藥大辭典》等均有同樣的功效記載。中藥鬼點(diǎn)燈的臨床使用歷史較久，但其化學(xué)成分及藥理活性研究較少。紫草是現(xiàn)代研究較多的同科植物，其化學(xué)成分主要含有萘醌類、黃酮類、酚酸類、萜類、多糖類等，現(xiàn)代藥理研究表明其主要具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用（沈曉靜等，2023）。張梅等（2022）通過CCK8和Western blot等方法探究紫草素對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞（SW620、HT-29）增殖及凋亡的影響及其機(jī)制，發(fā)現(xiàn)紫草素具有明顯的抗結(jié)直腸癌活性，主要與鐵死亡有關(guān)。斑種草是其同屬植物，從其全株植物中分離出4種酚類化合物，即山萘酚、咖啡酸、山萘酚-3-O-β-3-O-p-D-吡喃葡萄糖苷和山萘酚-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（Jang et al.，2003）。課題組前期僅通過GC-MS化學(xué)成分分析技術(shù)對(duì)其石油醚部進(jìn)行檢測，共鑒定出33個(gè)成分，主要含有脂肪酸、脂肪醇及香豆素等類化合物，并通過DPPH和ABTS⁺自由基清除能力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗氧化活性（趙小超等，2023），然而至今尚未見有鬼點(diǎn)燈具體化學(xué)成分及現(xiàn)代藥理活性相關(guān)的研究報(bào)道。因此，為進(jìn)一步了解鬼點(diǎn)燈的化學(xué)成分，挖掘其抗結(jié)直腸癌活性，探究其活性物質(zhì)，本研究以鬼點(diǎn)燈的干燥全草為研究對(duì)象，依托現(xiàn)代分離鑒定等技術(shù)，采用重結(jié)晶、ODS反相柱色譜、高壓制備液相色譜、CCK8等方法，擬探討以下問題：（1）鬼點(diǎn)燈乙酸乙酯部的化學(xué)成分；（2）所得獲得化合物對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

鬼點(diǎn)燈藥材采于江蘇省宿遷市宿豫區(qū)曹集鄉(xiāng)田間，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院黃云峰研究員鑒定為紫草科植物柔弱斑種草（Bothriospermum zeylanicum）的全草。

1.2 儀器

核磁共振譜儀（Avance Ⅲ 500 MHz，Bruker公司，德國）；旋光儀（JASCO J-1500，JASCO公司，日本）；超高效液相色譜儀-QDa檢測器（Acquity H-CLASS，Waters 公司，美國）；高效液相色譜儀（Prominence-LC-2030C 3D Plus，島津公司，日本）；XBridge BEH Shield RP18制備型色譜柱（10 mm × 250 mm，5 μm）；中壓制備色譜儀（Buchi公司，瑞士）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Eyelan-1100V-W型，東京理化株式會(huì)社，日本）；高壓蒸汽滅菌鍋（MLS-3781L-PC，SANYO公司，日本）；二氧化碳培養(yǎng)箱（MCO-170AICDL-PC，PHCBI公司，日本）；超凈工作臺(tái)（SW-CJ-2F，安泰空氣技術(shù)有限公司，蘇州）；顯微鏡（ICX41，SDPTOP）、離心機(jī)（R-134a，Hitachi Koki公司，上海）。

1.3 試劑

細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)二甲基亞砜（DMSO，北京索萊寶科技有限公司）；L-15 培養(yǎng)基（北京索萊寶科技有限公司）；1640 培養(yǎng)基、青鏈霉素混合液、PBS（北京索萊寶科技有限公司）；胎牛血清（上海達(dá)特希爾生物科技有限公司）；CCK8檢測液（東仁化學(xué)科技有限公司）；胰酶（賽默飛世爾科技公司）；氘代試劑DMSO-d₆、CD₃OD（上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司）；乙腈、甲醇為色譜純（廣東光華科技股份有限公司）；人結(jié)直腸癌細(xì)胞 SW620、 HT-29及人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心；其余化學(xué)試劑均為分析純。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 提取分離 鬼點(diǎn)燈地上部分2.5 kg，切碎后，經(jīng)甲醇冷浸提取3次，每次7 d，濾過，提取液減壓濃縮至無醇味得總浸膏（200.3 g）?？偨嗉铀鞈?，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，得到各萃取部位，其中石油醚萃取物（90.3 g）、乙酸乙酯萃取物（15.0 g）、正丁醇萃取物（23.5 g）。取乙酸乙酯部位（7.5 g）用反相ODS中壓色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水（10%→100%）梯度洗脫，通過薄層色譜檢測，合并得到20個(gè)流分。Fr. F重結(jié)晶后制得化合物BZC-2（1，50 mg）；Fr. H經(jīng)反相ODS中壓色譜、高壓制備液相色譜得到化合物BZC-3（2，16.2 mg）、BZC-4（3，7.4 mg）；Fr. J經(jīng)反相ODS中壓色譜、高壓制備液相色譜得到化合物BZC-5（4，6.1 mg）、BZC-6（5，14 mg）；Fr. L經(jīng)反相ODS中壓色譜、高壓制備液相色譜得到化合物BZC-9（8，12 mg）、BZC-10（9，7.0 mg）、BZC-11（10，3.8 mg）、BZC-12（11，1.0 mg）、BZC-13（12，3.0 mg）；Fr. M經(jīng)反相ODS中壓色譜、高壓制備液相色譜得到化合物BZC-7（6，11 mg）、BZC-8（7，30 mg）。

1.4.2體外抗結(jié)直腸癌活性檢測 釆用CCK8法（Zheng et al.，2022）檢測細(xì)胞增殖情況。樣品用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)DMSO溶解成10 mmol·L^-1的母液，低溫保存，DMSO在最終體系中的濃度控制在不影響檢測活性的范圍之內(nèi)，倍比稀釋為0.1～20 μmol· L^-1的工作濃度。取對(duì)數(shù)生長期的上述癌細(xì)胞，用含10%小牛血清的L-15 （SW620）或RPMI-1640 （HT-29、NCM460）培養(yǎng)液，制成單細(xì)胞懸液每毫升1×10⁶個(gè)，將該懸液加到96孔板中，每孔加入100 μL。于5% CO₂，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，分別加入各濃度受試藥物（化合物6、7、8、12）和陽性對(duì)照藥奧沙利鉑，使其終濃度分別為20、4、0.8、0.16、0.034 μmol·L^-1，每個(gè)樣品均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，陰性對(duì)照為等體積培養(yǎng)基及相應(yīng)的DMSO濃度為溶媒對(duì)照，以消除DMSO對(duì)細(xì)胞生長的影響。于5% CO₂，37 ℃培養(yǎng)箱中孵育72 h后，每孔加入10 μL CCK8溶液。孵育（37℃，5% CO₂） 40～60 min后用酶標(biāo)儀檢測450 nm下的吸光度值（OD）。將測得的OD值計(jì)算抑制率，并用Graphpad Prism 8軟件擬合化合物的IC₅₀值。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

利用2.1方法對(duì)鬼點(diǎn)燈乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，共獲得12個(gè)化合物，經(jīng)質(zhì)譜和核磁等波譜分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，化合物1-12的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。

化合物1 黃色塊狀晶體，ESI-MS m/z：117.0 ［M+H］⁺（C₄H₅O₄，理論值：117.08），分子式為C₄H₄O₄。¹H-NMR（500 MHz，CD₃OD-d₄）δ：6.76（2H，s，H-2，3）；¹³C-NMR（126 MHz，CD₃OD-d₄）δ：166.68（C-1，4），133.77（C-2，3）。以上數(shù)據(jù)與田宇潔等（2013）報(bào)道的一致，故鑒定化合物1為富馬酸。

化合物2 白色粉末，ESI-MS m/z：153.0 ［M-H］^-（C₇H₅O₄，理論值：153.02），分子式為C₇H₆O₄。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.31（1H，s，H-2），7.26（1H，d，J = 8.2 Hz，H-6），6.75（1H，d，J = 8.2 Hz，H-5）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：167.59（1-COOH），150.15（C-3），145.03（C-4），122.09（C-1），121.93（C-6），116.73（C-2），115.34（C-5）。以上數(shù)據(jù)與Ramadan等（2009）報(bào)道的一致，故鑒定化合物2為原兒茶酸。

化合物3 白色粉末，ESI-MS m/z：131.0 ［M+H］⁺（C₅H₇O₄，理論值：131.03），分子式為C₅H₆O₄。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：6.63～6.74（2H，m，H-2，3），3.73（3H，s，H-1′）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：165.9（C-1），165.2（C-4），135.4（C-3），131.4（C-2），52.2（C-1′）。以上數(shù)據(jù)與Ramadan等（2009）報(bào)道的一致，故鑒定化合物3為富馬酸單甲酯。

化合物4 淡黃色無定形固體，ESI-MS m/z：213.1 ［M+H］⁺（C₁₀H₁₃O₅，理論值：213.08），分子式為C₁₀H₁₂O₅。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：8.68（2H，s，3，4-OH），6.60（1H，d，J = 7.9 Hz，H-2），6.58（1H，d，J = 2.1 Hz，H-5），6.41（1H，dd，J = 8.0，2.1 Hz，H-6），5.46（1H，s，8-OH），4.12（1H，t，J = 6.3 Hz，H-8），3.59（3H，s，9-OCH₃），2.74（1H，dd，J = 13.6，5.3 Hz，H-7α），2.63（1H，dd，J = 13.7，7.6 Hz，H-7β）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：174.06（C-9），144.81（C-3），143.73（C-4），128.25（C-1），119.99（C-6），116.78（C-2），115.27（C-5），71.70（C-8），51.32（C-7）。以上數(shù)據(jù)與Wang等（2000）報(bào)道的一致，故鑒定化合物4為3，4，α-三羥基甲基苯丙酸酯。

化合物5 白色固體，ESI-MS m/z：139.0 ［M+H］⁺（C₇H₇O₃，理論值：139.04），分子式為C₇H₆O₃。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.79（2H，d，J = 8.4 Hz，H-2，6），6.82（2H，d，J = 8.1 Hz，H-3，5）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：167.27（1-COOH），161.68（C-4），131.60（C-3，5），121.43（C-1），115.19（C-2，6）。以上數(shù)據(jù)與Li等（2004）報(bào)道的一致，故鑒定化合物5為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物6 無定形黃綠色粉末，［α］+96.3 （c 0.1，MeOH）。 ESI-MS m/z：1 037.3 ［M+Na］⁺（C₄₈H₅₄O₂₄Na，理論值：1 037.29），分子式為C₄₈H₅₄O₂₄。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.78（1H，s，H-7），7.43（2H，d，J = 8.7 Hz，H-2″，H-6″），7.33（1H，d，J = 15.9 Hz，H-7″），7.07（1H，s，H-6），7.02（2H，d，J = 8.8 Hz，H-3″，H-5″），6.50（1H，d，J = 8.1 Hz，H-5′），6.48（1H，d，J = 2.1 Hz，H-2′），6.41（1H，dd，J = 8.2，2.1 Hz，H-6′），5.96（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8″），5.44（1H，d，J = 1.8 Hz，H-1c），5.23（1H，d，J = 3.6 Hz，H-1b），4.84（1H，d，J = 10.5 Hz，H-6aα），4.73（1H，s，H-3a），4.70（1H，s，H-7′），4.22（1H，m，H-5b），4.14（1H，d，J = 11.3 Hz，H-6bα），4.08（1H，m，H-6bβ），4.02（1H，s，H-8′），3.89（1H，d，J = 12.8 Hz，H-6aβ），3.83（1H，s，H-2c），3.83（3H，s，5-OCH₃），3.73（1H，m，H-1aα），3.64（1H，m，H-3c），3.60（1H，m，H-4a），3.60（1H，m，H-3b），3.55（1H，m，H-1aβ），3.46（3H，s，3′-OCH₃），3.43（1H，m，H-5c），3.39（s，1H），3.30（1H，m，H-2b），3.30（1H，m，H-4c），3.11（1H，t，J = 9.6 Hz，H-4b），1.10（3H，d，J = 6.2 Hz，H-6c）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：172.69（C-9′），166.61（C-9），166.18（C-9″），157.69（C-4″），147.51（C-3′），147.08（C-3′），145.41（C-3），145.14（C-4），143.34（C-7″），140.99（C-7），134.85（C-1′），129.74（C-2″），127.74（C-1″），123.85（C-2），121.50（C-8），119.68（C-6′），116.49（C-3″），115.52（C-8″），115.37（C-5′），111.39（C-2′），109.41（C-6），108.10（C-2a），98.23（C-1c），92.74（C-1b），86.21（C-5a），78.49（C-3a），73.74（C-3b），73.33（C-4a），71.83（C-2b），71.75（C-4c），70.79（C-5b），70.47（C-4b），70.40（C-3c），70.08（C-2c），69.71（C-5c），65.26（C-6a），64.13（C-6b），61.39（C-1a′），59.50（3-OCH₃），56.09（5-OCH₃），55.35（3′-OCH₃），48.52（C-8′），37.62（C-7′），17.92（C-6c）。以上數(shù)據(jù)與El-Rokh等（2018）報(bào)道的一致，故鑒定化合物6為echiumin A。

化合物7 無定形黃綠色粉末，［α］+79.1 （c 0.1，MeOH）。ESI-MS m/z：1 007.3 ［M+Na］⁺（C₄₇H₅₂O₂₃Na，理論值：1 007.28），分子式為C₄₇H₅₂O₂₃。¹H-NMR（500 MHz，CD₃OD-d₄）δ：7.74（1H，d，J = 1.1 Hz，H-7），7.34～7.36（3H，m，H-2″，H-6″，H-7″），7.04～7.09（2H，d，H-3″，5″），6.88（1H，s，H-6），6.82（1H，m，H-2′），6.81（1H，m，H-6′），6.55～6.50（2H，m，H-3′，5′），5.85（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8″），5.51（1H，d，J = 1.8 Hz，H-1c），5.43（1H，d，J = 3.6 Hz，H-1b），4.95（1H，dd，J = 12.8，2.7 Hz，H-6aα），4.88（1H，s，H-3a），4.81（1H，br s，H-7′），4.46（1H，m，H-5b），4.35（1H，m，H-6b），4.18～4.21（1H，m，H-8′），4.15～4.18（2H，m，H-6b，5a），4.02～4.06（2H，m，H-2c，6aβ），3.97～4.01（1H，m，H-1aα），3.90（3H，s，5-OCH₃），3.89（1H，br s，H-3b），3.86～3.88（1H，m，H-3c），3.83（1H，m，H-4a），3.73（1H，d，J = 12.5 Hz，H-1aβ），3.64（1H，m，H-5c），3.55（1H，dd，J = 9.5，3.6 Hz，H-2b），3.50（1H，t，J = 9.5 Hz，H-4c），3.43（3H，s，3-OCH₃），3.27～3.31（1H，m，H-4b），1.25（3H，d，J = 6.2 Hz，H-6c）；¹³C-NMR（125 MHz，CD₃OD-d₄）δ：175.27（C-9′），168.88（C-9），168.52（C-9″），159.42（C-4″），157.03（C-4′），149.05（C-5），146.79（C-3），145.45（C-7″），144.44（C-7），142.75（C-7′），136.66（C-1′），130.87（C-2″），130.87（C-6″），129.71（C-1″），129.57（C-6′），129.57（C-2′），129.57（C-6′），125.35（C-2），123.22（C-1），122.85（C-8），117.60（C-5″），117.60（C-3″），116.53（C-8″），116.35（C-5′），116.35（C-3′），110.06（C-2a），109.70（C-6），99.65（C-1c），94.47（C-1b），88.15（C-5a），80.34（C-3a），75.16（C-3b），75.08（C-4a），73.74（C-2b），73.39（C-4c），72.59（C-4b），72.22（C-5b），72.17（C-3c），71.91（C-2c），70.83（C-5c），66.32（C-6a），66.16（C-6b），63.24（C-1a），60.55（3-OCH₃），56.87（5-OCH₃），50.72（C-8′），18.07（C-6c）。以上數(shù)據(jù)與El-Rokh等（2018）報(bào)道的一致，故鑒定化合物7為echiumin B。

化合物8 淡黃色無定形粉末，［α］+20.6 （c 0.2，MeOH）。ESI-MS m/z：521.2 ［M-H］^-（C₂₆H₃₃O₁₁，理論值：521.20），分子式為C₂₆H₃₄O₁₁。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：6.68（1H，d，J = 8.0 Hz，H-5′），6.64（1H，d，J = 2.0 Hz，H-2′），6.61（1H，s，H-8），6.51（1H，dd，J = 8.0，2.0 Hz，H-6′），6.10（1H，s，H-5），3.95（1H，d，J = 7.8 Hz，H-1″），3.70（6H，d，J = 2.8 Hz，3′-OCH₃，7-OCH₃），3.56～3.62（2H，m，H-2a），3.52～3.56（2H，m，H-3a），3.43～3.49（2H，m，H-6″），3.04～3.12（2H，m，H-3″，4″），2.90～2.95（2H，m，H-2″，5″），2.60～2.78（2H，m，H-1），1.83（2H，s，H-2，3）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：147.32（C-3′），145.60（C-7），144.70（C-4′），144.15（C-6），136.99（C-1′），132.17（C-10），127.31（C-9），121.60（C-6′），116.31（C-5），115.30（C-5′），113.23（C-8），111.78（C-2′），102.82（C-1″），76.83（C-3″），76.79（C-5″），73.51（C-2″），69.84（C-2α），68.70（C-4″），63.31（C-6″），60.81（C-3α），55.73（3′-OCH₃），55.53（3-OCH₃），46.21（C-3），43.59（C-4），32.23（C-1）。以上數(shù)據(jù)與張姣等（2019）報(bào)道的一致，故鑒定化合物8為（+）-異落葉松脂素-2a-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9 米黃色羽狀晶體，ESI-MS m/z：309.1 ［M-H］^-（C₁₅H₁₇O₇，理論值：309.10），分子式為C₁₅H₁₈O₇。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.63（2H，d，J = 8.8 Hz，H-2，6），7.52（1H，d，J = 16.0 Hz，H-7），7.06（2H，d，J = 8.8 Hz，H-3，5），6.39（1H，d，J = 16.0 Hz，H-8），5.44（1H，d，J = 1.8 Hz，H-1′），3.83（1H，dd，J = 3.4，1.8 Hz，H-2′），3.64（1H，dd，J = 9.3，3.3 Hz，H-3′），3.43（1H，m，H-4′），3.29（1H，m，H-5′），1.10（3H，d，J = 6.1 Hz，H-6′）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：167.96（C-9），157.60（C-4），143.21（C-7），129.83（C-2，6），128.07（C-8），117.65（C-1），116.63（C-3，5），98.22（C-1′），71.74（C-4′），70.40（C-3′），70.10（C-2′），69.69（C-5′），17.93（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與劉小輝和華燕（2009）報(bào)道的一致，故鑒定化合物9為對(duì)香豆酰-α-L-鼠李吡喃糖苷。

化合物10 白色粉末，ESI-MS m/z：163.0 ［M-H］^-（C₉H₇O₃，理論值：163.04），分子式為C₉H₈O₃。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.47（2H，d，J = 8.3 Hz，H-6，8），7.43（1H，d，J = 15.9 Hz，H-2），6.78（2H，d，J = 8.2 Hz，H-5，9），6.27（1H，d，J = 15.9 Hz，H-3）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：159.39（C-1），142.95（C-3），129.83（C-5，9），125.57（C-4），115.74（C-6，8）。以上數(shù)據(jù)與李春梅等（2012）報(bào)道的一致，故鑒定化合物10為對(duì)香豆酸。

化合物11 白色針晶，［α］-2.4 （c 0.1，MeOH）。ESI-MS m/z：575.2 ［M+Na］⁺（C₂₇H₃₆O₁₂Na，理論值：575.21），分子式為C₂₇H₃₆O₁₂。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：6.61（1H，s，H-8），6.35（2H，s，H-2′，6′），6.13（1H，s，H-5），3.97（1H，d，J = 7.8 Hz，H-1″），3.71（3H，s，7-OCH₃），3.69（6H，s，3′，5′-OCH₃），3.36～3.60（6H，H-4，H-2″，H-3″，H-4″，H-5″，H-6″），3.07（m，2H，H-2a），2.93（m，2H，H-3a），2.66～2.75（m，2H，H-1），1.84（2H，m，H-2，H-3）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：147.80（C-3′，C-5′），145.60（C-7），144.10（C-6），135.95（C-1′），133.84（C-4′），131.97（C-10），127.20（C-9），116.15（C-5），111.74（C-8），106.66（C-2′，C-6′），102.81（C-1″），76.86（C-3″），76.75（C-5″），73.50（C-2″），69.82（C-4″），68.73（C-3a），63.27（C-2a），60.79（C-6″），56.08（3′-OCH₃），55.46（7-OCH₃），46.78（C-4），43.33（C-3），38.90（C-2），32.20（C-1）。以上NMR數(shù)據(jù)與郜嵩等（2005）報(bào)道的一致，故鑒定化合物11為（-）-5′-甲氧基異落葉松脂醇-3α-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物12 黃色粉末，［α］+96.3 （c 0.5，MeOH）。ESI-MS m/z：713.2 ［M+Na］⁺（C₃₂H₃₈O₁₆Na，理論值：713.21），分子式為C₃₂H₃₈O₁₆。¹H-NMR（500 MHz，DMSO-d₆）δ：7.70（1H，s，H-7），7.06（1H，s，H-6），6.77（2H，d，J = 8.3 Hz，H-2′，6′），6.59（2H，d，J = 8.4 Hz，H-3′，5′），5.22（1H，s，H-1），4.82（1H，m，H-6″α），4.71（1H，s，H-3″），4.65（1H，s，H-7′），4.07（1H，d，J = 2.7 Hz，H-5″），3.88（1H，m，H-6″β），3.86（1H，m，H-5），3.84（3H，s，5-OCH₃），3.76（1H，s，H-8′），3.69（1H，m，H-1″α），3.59（1H，m，H-4″），3.57（1H，m，H-3），3.56（1H，m，H-1″β），3.50（1H，br s，H-5），3.39（3H，s，3-OCH₃），3.28（1H，m，H-2），3.26（1H，m，H-4）；¹³C-NMR（125 MHz，DMSO-d₆）δ：172.44（C-9′），166.44（C-9），155.82（C-4′），147.49（C-5），145.44（C-3），140.74（C-7），134.25（C-1′），128.30（C-2′），123.38（C-2），115.15（C-3′），109.45（C-6），108.17（C-2″），92.92（C-1），86.27（C-5″），78.65（C-3″），73.68（C-4″），73.63（C-3），73.05（C-5），71.97（C-2），69.22（C-4），65.30（C-6″），61.31（C-1″），59.87（C-6），59.54（3-OCH₃），56.05（5-OCH₃），49.01（C-8′），37.05（C-7′）。以上 NMR 數(shù)據(jù)與Suo等（2006）報(bào)道的一致，故鑒定化合物12為rupestrin B。

2.2 抗結(jié)直腸癌活性檢測結(jié)果

抗結(jié)直腸癌活性檢測結(jié)果顯示（表1），化合物8對(duì)SW620細(xì)胞增殖具有一定的抑制作用，IC₅₀為9.34 μmol·L^-1，對(duì)人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460細(xì)胞增殖無明顯抑制作用；化合物12對(duì)SW620和HT-29細(xì)胞增殖均具有一定的抑制作用，IC₅₀分別為0.33 μmol·L^-1和15.94 μmol·L^-1，對(duì)NCM460細(xì)胞增殖無明顯抑制作用；化合物6 和化合物7對(duì)NCM460細(xì)胞均無明顯抑制作用。與陽性對(duì)照組比較，化合物12對(duì)SW620細(xì)胞增殖的影響明顯低于陽性對(duì)照藥物奧沙利鉑，說明化合物12具有較強(qiáng)的抗結(jié)直腸癌活性。以上數(shù)據(jù)表明，化合物8和化合物12具有一定的抗結(jié)直腸癌活性且對(duì)正常細(xì)胞無毒性。

3 討論與結(jié)論

目前，暫無鬼點(diǎn)燈的化學(xué)成分及現(xiàn)代藥理作用相關(guān)的研究報(bào)道，研究通過現(xiàn)代分離純化技術(shù)從鬼點(diǎn)燈乙酸乙酯部分離鑒定出12個(gè)化合物，其中，木脂素類5個(gè)、苯丙素類3個(gè)、酚酸類2個(gè)、其他類2個(gè)，均為首次從該植物中獲得。采用CCK8法檢測化合物6-8及化合物12對(duì)SW620、HT-29及NCM460細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)化合物8和化合物12對(duì)SW620、HT-29細(xì)胞增殖具有一定的抑制作用且對(duì)人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞（NCM460）增殖無抑制作用，說明化合物8和化合物12在細(xì)胞層面具有一定的抗結(jié)直腸癌活性且對(duì)正常細(xì)胞無毒性作用，提示具有一定開發(fā)潛力。

天然產(chǎn)物在治療疾病過程中具有一定的優(yōu)勢，是抗腫瘤藥物發(fā)現(xiàn)的重要來源。目前，大約有60%的抗腫瘤藥物來源于天然產(chǎn)物（Seca amp; Pinto，2018）。本研究首先發(fā)現(xiàn)化合物8［（+）-異落葉松脂素-2a-O-β-D-葡萄糖苷］和化合物12（rupestrin B）在體外均具有一定的抗結(jié)直腸癌活性，是天然產(chǎn)物抗腫瘤活性研究的一次有效探索。另有研究者通過細(xì)胞溶血法、自由基清除能力法檢測發(fā)現(xiàn)化合物8具有一定的抗補(bǔ)體作用和抗氧化活性（張姣等，2019）。尚未發(fā)現(xiàn)化合物12其他藥理活性相關(guān)的研究報(bào)道，本研究為首次發(fā)現(xiàn)其具有抗結(jié)直腸癌活性且對(duì)SW620細(xì)胞增殖的抑制作用明顯強(qiáng)于奧沙利鉑，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt; 0.01），因此存在較大開發(fā)潛力，有待開發(fā)利用?；衔?（富馬酸）可用于治療慢性心力衰竭（李洋，2023）、銀屑病（Haghikia et al.，2014）等，因?yàn)槠渚哂锌寡?、抗氧化及有助于重塑肝功能作用而設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)通過富馬酸處理后的大鼠可以使肝臟免受鎘毒性（Kaur et al.，2020）?；衔?（原兒茶酸）可通過改變先天免疫細(xì)胞運(yùn)輸、調(diào)節(jié)代謝和炎癥途徑等對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)揮化學(xué)預(yù)防作用（Dong et al.，2022），并可通過下調(diào) MYOSLID 表達(dá)而抑制結(jié)腸癌 SW620 細(xì)胞的增殖和糖酵解反應(yīng)（劉經(jīng)州等，2021），可以延緩小鼠排卵后卵母細(xì)胞老化（Li et al.，2023），還具有抗炎、抗腫瘤、改善肝臟炎癥、防止肺損傷等作用（林衛(wèi)佳等，2022）?；衔?（富馬酸單甲酯）具有抑菌作用，可用于治療多發(fā)性硬化，可通過誘導(dǎo)耐受性樹突狀細(xì)胞預(yù)防小鼠心臟移植同種免疫排斥反應(yīng)（Berger et al.，2021; Chen et al.，2023）；化合物5（對(duì)羥基苯甲酸）通過腸道微生物群依賴的方式改善黏膜屏障來緩解結(jié)腸炎（Han et al.，2022）；化合物6（echiumin A）能明顯抑制 NO 產(chǎn)生的活性，即具有一定的抗炎活性（孫冰，2022）；化合物10（對(duì)香豆酸）可以減輕大鼠二型糖尿病誘導(dǎo)的神經(jīng)性病變，具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗癌等生物活性（Pei et al.，2016; Abdel-Moneim et al.，2017; 張寶等，2023）；化合物11［（-）-5′-甲氧基異落葉松脂醇-3α-O-β-D-葡萄糖苷］對(duì)酵母菌、枯草桿菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，對(duì)DPPH自由基具有一定清除能力，即具有抗菌和抗氧化活性（Huang et al.，2012；何瑞杰，2021）。以上文獻(xiàn)研究說明，從中藥鬼點(diǎn)燈中分離獲得的化合物具有一定的生物活性，研究具有一定意義。

本研究豐富了鬼點(diǎn)燈的化學(xué)成分，明確了其抗結(jié)直腸癌活性成分，并首先發(fā)現(xiàn)化合物8［（+）-異落葉松脂素-2a-O-β-D-葡萄糖苷］和化合物12（rupestrin B）具有一定的抗結(jié)直腸癌活性，為鬼點(diǎn)燈在抗結(jié)直腸癌方面的開發(fā)利用提供參考。

參考文獻(xiàn)：

ABDEL-MONEIM A，YOUSEF AI，ABD EL-TWAB SM，et al.，2017. Gallic acid and p-coumaric acid attenuate type 2 diabetes-induced neurodegeneration in rats ［J］. Metabolic Brain Disease，32（4）：1279-1286.

BERGER AA，SOTTOSANTI ER，WINNICK A，et al.，2021. Monomethyl fumarate （MMF，Bafiertam） for the treatment of relapsing forms of multiple sclerosis （MS） ［J］. Neurology International，13（2）：207-223.

JANG CH，EUN JS，LIM JP，et al.，2003. Phytochemical components from the whole plants of Bothriospermum tenellum ［J］. Korean Journal of Pharmacognasy，34（2）：119-122.

CHEN J，CAO Y，JIA O，et al.，2023. Monomethyl fumarate prevents alloimmune rejection in mouse heart transplantation by inducing tolerogenic dendritic cells ［J］. Acta Biochimica et Biophysica Sinica，55（5）：866-877.

DONG A，LIN CW，ECHEVESTE CE，et al.，2022. Protocatechuic acid，a gut bacterial metabolite of black raspberries，inhibits adenoma development and alters gut microbiome profiles in ApcMin/+ mice ［J］. Journal of Cancer Prevention，27（1）：50-57.

Editorial Committee of the State Administration of Traditional Chinese Medicine，1999. Chinese materia medica：Vol. 6 ［M］. Shanghai：Shanghai Scientific amp; Technical Publishers：532. ［國家中醫(yī)藥管理局編委會(huì)，1999. 中華本草：第6冊(cè) ［M］. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社：532.］

EL-ROKH AR，NEGM A，EL-SHAMY M，et al.，2018. Sucrose diester of aryldihydronaphthalene-type lignans from Echium angustifolium Mill. and their antitumor activity ［J］. Phytochemistry，149：155-160.

GAO S，F(xiàn)U GM，F(xiàn)AN LH，et al.，2005. Studies on the chemical constituents from roots of Lysidice rhodostegia Hance ［J］. Chinese Journal of Natural Medicines，3（3）：144-147. ［郜嵩，浮光苗，范麗華，等，2005. 單刀根化學(xué)成分的研究 ［J］. 中國天然藥物，3（3）：144-147.］

HAN X，LI M，SUN L，et al.，2022. p-Hydroxybenzoic acid ameliorates colitis by improving the mucosal barrier in a gut microbiota-dependent manner ［J］. Nutrients，14（24）：5383.

HAGHIKIA A，LINKER R，GOLD R，2014. Fumarsure in der therapie der multiplen sklerose ［Fumaric acid as therapeutic agent for multiple sclerosis］ ［J］. Nervenarzt，85（6）：720-726.

HE RJ，2021. Constituents of the bark of Srteblus indicus and their bioactivities ［D］. Guilin：Guangxi Normal University：94-98. ［何瑞杰，2021. 假鵲腎樹樹皮化學(xué)成分及其生物活性的研究 ［D］. 桂林：廣西師范大學(xué)：94-98.］

HUANG XZ，CHENG CM，DAI Y，et al.，2012. A novel lignan glycoside with antioxidant activity from Tinospora sagittata var. yunnanensis ［J］. Natural Product Research，26（20）：1876-1880.

KAUR G，SHIVANANDAPPA TB，KUMAR M，et al.，2020. Fumaric acid protect the cadmium-induced hepatotoxicity in rats：Owing to its antioxidant，anti-inflammatoryaction and aid in recast the liver function ［J］. Naunyn-Schmiedebergs Archives of Pharmacology，393（10）：1911-1920.

LI CM，WU CH，WANG T，et al.，2012. Isolation and identification of chemical constituents from whole plants of Siphonostegia chinensis Benth. ［J］. Journal of Shenyang Pharmaceutical University，29（5）：331-336. ［李春梅，吳春華，王濤，等，2012. 中藥北劉寄奴中化學(xué)成分的分離與鑒定 ［J］. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，29（5）：331-336.］

LI GQ，DENG ZW，LI J，et al.，2004. Chemical constituents from starfish Asterias rollestoni ［J］. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，13（2）：81-86.

LI LJ，CHAO S，ZHAO SX，et al.，2023. Protocatechuic acid delays postovulatory oocyte ageing in mouse ［J］. Molecular Nutrition amp; Food Research，67（4）：e2200363.

LIN WJ，ZHANG YP，LI F，et al.，2022. Protocatechuic acid inhibits apoptosis of alveolar macrophages induced by Mycobacterium tuberculosis Rv1654 ［J］. Chinese Journal of Clinical Pharmacology，38（15）：1747-1751. ［林衛(wèi)佳，張亞平，李峰，等，2022. 原兒茶酸抑制結(jié)核分枝桿菌Rv1654誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究 ［J］. 中國臨床藥理學(xué)雜志，38（15）：1747-1751.］

LI Y，2023. Selection of fumaric acid-producing rhizopus species and transcript level analysis of key enzymes ［D］. Beijing：Beijing University of Chemical Technology：1-70. ［李洋，2023. 產(chǎn)富馬酸的根霉菌種選育及關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄水平分析 ［D］. 北京：北京化工大學(xué)：1-70.］

LIU XH，HUA Y，2009. Study on the phenylpropanoids composition from Desmodium microphyllum ［J］. Journal of Southwest Forestry University （Natural Sciences），29（2）：92-93. ［劉小輝，華燕，2009. 小葉三點(diǎn)金的苯丙素類成分分析 ［J］. 西南林學(xué)院學(xué)報(bào)，29（2）：92-93. ］

LIU JZ，YANG HQ，MA DW，2021. Effects of protocatechuic acid on glycolysis and proliferation of colon cancer SW620 cells ［J］. Chinese Traditional Patent Medicine，43（7）：1914-1918. ［劉經(jīng)州，楊紅群，馬東旺，2021. 原兒茶酸對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞糖酵解及增殖的影響 ［J］. 中成藥，43（7）：1914-1918.］

PEI K，OU J，HUANG J，et al.，2016. p-Coumaric acid and its conjugates：dietary sources，pharmacokinetic properties and biological activities ［J］. Journal of the Science of Food and Agriculture，96（9）：2952-2962.

RAMADAN MA，AHMAD AS，NAFADY AM，et al.，2009. Chemical composition of the stem bark and leaves of Ficus pandurata Hance ［J］. Natural Product Research，23（13）：1218-1230.

SECA AML，PINTO DCGA，2018. Plant secondary metabolites as anticancer agents：Successes in clinical trials and therapeutic application ［J］. International Journal of Molecular Sciences，19（1）：263.

SHENG XJ，YUAN WJ，LIU JY，et al.，2023. Research progress on chemical components and biological activities of Zicao ［J］. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine，41（11）：102-110. ［沈曉靜，袁文娟，劉佳瑤，等，2023. 紫草化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展 ［J］. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，41（11）：102-110.］

SUO MR，YANG JS，LIU QH，2006. Lignan oligosaccharide esters from Eritrichium rupestre ［J］. Journal of Natural Products，69（4）：682-684.

SUN B，2022. The chemicals and their potential bioactive investigation from Onosma bracteatum Wall. and Tricholoma matsutake Sing ［D］. Nanjing：Nanjing University of Science amp; Technology：60-62. ［孫冰，2022. 滇紫草烏飯和松茸的化學(xué)成分及其生物活性的研究 ［D］. 南京：南京理工大學(xué)：60-62.］

SU YL，2021. Investigation and evaluation of medicinal plant resource in Lipu City，Guangxi ［D］. Guilin：Guangxi Normal University：94. ［蘇鈺嵐，2021. 廣西荔浦市藥用植物資源調(diào)查與評(píng)價(jià) ［D］. 桂林：廣西師范大學(xué)：94.］

TIAN YJ，LI JN，F(xiàn)ENG JL，et al.，2013. Chemical constituents from Notopterygium root ［J］. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，15（6）：40-42. ［田宇潔，李金楠，馮金磊，等，2013. 羌活化學(xué)成分研究 ［J］. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，15（6）：40-42.］

WANG ZJ，ZHAO YY，WANG B，et al.，2000. Depsides from Prunella vulgaris ［J］. Chinese Chemical Letters，11（11）：997-1000.

ZHANG B，LIU J，KUANG WM，et al.，2023. Chemical constituents from Potentilla kleiniana and their anti-inflammatory activities ［J］. Guihaia，43（11）：2149-2158. ［張寶，劉佳，匡維米，等，2023. 蛇含委陵菜的化學(xué)成分及抗炎活性研究 ［J］. 廣西植物，43（11）：2149-2158.］

ZHANG J，DE J，F(xiàn)U AL，et al.，2019. Anti-complementary and anti-oxidant activities of constituents from Juniperus convallium ［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，50（13）：3008-3016. ［張姣，德吉，付愛玲，等，2019. 密枝圓柏的化學(xué)成分及其抗補(bǔ)體、抗氧化活性 ［J］. 中草藥，50（13）：3008-3016.］

ZHANG M，HE ZY，HUANG QY，et al.，2022. Effect of ferroptosis inducer Erastin on apoptosis of colorectal cancer induced by shikonin ［J］. Chinese Pharmacological Bulletin，38（5）：692-698. ［張梅，何旨意，黃慶洋，等，2022. 鐵死亡誘導(dǎo)劑Erastin促進(jìn)紫草素誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的作用 ［J］. 中國藥理學(xué)通報(bào)，38（5）：692-698.］

ZHAO XC，HU XX，CHENG YG，et al.，2023. Liposoluble constituents and antioxidant activity of Bothriospermum zeylanicum ［J］. China Pharmaceuticals，32（4）：55-58. ［趙小超，胡筱希，程英歌，等，2023 鬼點(diǎn)燈藥材脂溶性成分及抗氧化活性研究 ［J］. 中國藥業(yè)，32（4）：55-58.］

ZHENG ZW，ZHANG X，BAI J，et al.，2022. PGM1 suppresses colorectal cancer cell migration and invasion by regulating the PI3K/AKT pathway ［J］. Cancer Cell International，22（1）：201.

（責(zé)任編輯 周翠鳴）