摘要：由禽腺病毒4型（FAdV-4）引起的禽心包積液性肝炎綜合征近年來在我國頻頻發(fā)生，給我國家禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失。長鏈非編碼RNA（incRNA）是病毒感染期間宿主免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，為揭示其在FAdV-4感染時對宿主細胞的作用及機理，本研究以雞肝癌細胞系LMH為對象，通過芯片測序、生物信息學分析及Real-time PCR等方法篩選病毒感染過程中的關(guān)鍵incRNA分子，并通過熒光定位雜交、編碼一非編碼基因共表達（CNC）分析、Real-Lime PCR、酶聯(lián)免疫吸附（ELLSA）、RNA pull-down和蛋白免疫共沉淀（RIP）、流式細胞分析等分子生物學手段對其進行亞細胞定位及互作蛋白的篩選、驗證和功能分析。結(jié)果表明，篩選出了FAdV-4感染引起的關(guān)鍵incRNA分子inc87774，其主要定位在細胞質(zhì)，其靶向結(jié)合互作蛋白為E3泛素連接酶MDM2，過表達inc87774，MDM2和Bcl-2的相對表達量顯著上升，p53和Bax的相對表達量顯著下降，顯著抑制細胞凋亡；沉默inc87774，上述基因表現(xiàn)出相反的變化趨勢且顯著促進細胞凋亡；進一步沉默MDM2后，p53的表達量顯著上調(diào)，但同時過表達／沉默inc87774對FAdV-4引起的細胞凋亡沒有影響，表明FAdV-4感染LMH細胞過程中inc87774通過MDM2靶向調(diào)控p53介導的細胞凋亡進程。該研究結(jié)果將增加我們對FAdV-4與宿主細胞互作的認識，為宿主抗病毒防御機制提供理論支持。

關(guān)鍵詞：禽腺病毒4型；長鏈非編碼RNA；蛋白互作；細胞凋亡；先天性免疫；致病機理

中圖分類號：S858.31 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2025）01-0142-09

禽腺病毒4型是一種無囊膜的dsDNA病毒。近年來，F(xiàn)AdV -4引起的禽心包積液性肝炎綜合征廣泛流行。對我國家禽綠色健康養(yǎng)殖構(gòu)成巨大的威脅。被FAdV-4感染的家禽通常會出現(xiàn)急性死亡，死亡高峰集中在感染1周之內(nèi)，死亡家禽出現(xiàn)典型的心包積液以及包涵體肝炎癥狀。此外，F(xiàn)AdV-4感染能夠?qū)е滤拗鞯拿庖咭种疲纱藢е碌拿庖呤?、繼發(fā)感染、混合感染進一步加劇了HHS的危害。FAdV-4宿主廣泛，不僅感染規(guī)模養(yǎng)殖的蛋雞、肉雞、肉種雞，也可以感染鴨、鵝以及多種野生鳥類，F(xiàn)AdV-4感染宿主的多樣性增加了跨宿主傳播的潛在風險，給該病的科學防控增加了難度。FAdV-4抵抗力強，即可以水平傳播，也可以垂直傳播，導致其防控難度大。因此，為保障養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，加強對FAdV-4致病機制的研究十分必要。

天然免疫是機體抵抗病原體入侵的第一道屏障，具有保護機體免受外源病原微生物入侵和清除自身衰老或損傷細胞的重要功能。長鏈非編碼RIVA（long noncoding RNA，IncRNA）作為一種新的調(diào)節(jié)因子，在病毒和宿主相互作用過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，廣泛參與病毒的感染過程并雙向調(diào)控宿主天然免疫反應(yīng)。研究表明IncRNA參與各種不同的生物學過程并在其中發(fā)揮著重要作用，包括細胞生長和分化、凋亡、自噬、免疫反應(yīng)和腫瘤的發(fā)生等。例如，IncRNA-ELIT-l作為Smad3的輔助因子能促進TCF-B/Smad信號傳導和上皮一間質(zhì)的轉(zhuǎn)化。聚核梭桿菌靶向lrtcRNA EN01-IT1促進結(jié)直腸癌的糖酵解和腫瘤發(fā)生。在官頸癌研究中，LncRNA TUG1能夠競爭性結(jié)合miRNA-381-3p導致MDM2靶基因表達量升高以減輕細胞凋亡。

病毒已經(jīng)進化出多種策略來逃避免疫系統(tǒng)的消除，越來越多的研究表明，IncRNA在宿主抗病毒反應(yīng)中起到至關(guān)重要的作用，是病毒感染期間宿主免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。目前，關(guān)于IncRNA的研究在動物疾病方面也有很多的報道。例如IncRNA TCONS_0179042在Mare-145細胞中能抑制豬繁殖與呼吸道綜合征病毒的復制。Lu等鑒定并分析了H5Nl亞型禽流感病毒感染鴨后得到的IncRNA表達譜，并發(fā)現(xiàn)其中58條IncRIVA與抗H5Nl亞型禽流感病毒免疫反應(yīng)相關(guān)：Li等鑒定并分析了禽傳染性支氣管炎病毒感染HD11細胞的IncRNA表達譜，發(fā)現(xiàn)IneRNA在宿主抗IBV反應(yīng)中起到至關(guān)重要的作用；Chai等在流感病毒與宿主相互作用研究中發(fā)現(xiàn)，IncRNA ISG20在流感病毒感染和復制過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用，并揭示了IneRNA ISG20作為一種新型干擾素誘導基因在宿主抗病毒天然免疫防御系統(tǒng)中的作用。因此，我們推測IncRNA在FAdV-4對宿主細胞的感染過程中也可能扮演著重要的角色，而其在宿主細胞中的作用與機理還不清楚，有待深入研究。本研究以雞肝癌細胞系LMH為宿主細胞，通過芯片測序等手段篩選FAdV-4感染過程的關(guān)鍵IncRNA及互作蛋白，并利用多種分子生物學方法探究其作用機制，以期為FAdV-4的防治提供理論支持。