摘要：為了調(diào)查我國浙江地區(qū)中小型規(guī)模豬場豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬?。≒R）的疫苗免疫情況，2023年下半年對浙江不同地區(qū)中小型規(guī)模豬場的121份血清樣品采用了酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）進(jìn)行抗體檢測及分析。結(jié)果顯示，豬場CSF、PR的免疫情況較好，PRRS的抗體水平整齊度不高；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽性率為90.9%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽性率為65.3%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽性率為86.8%、gE的抗體陽性率為18.2%，存在野毒感染的情況。本調(diào)查結(jié)果為完善浙江地區(qū)豬場防疫工作，科學(xué)評價豬場免疫情況，切實提升豬場疫病防控質(zhì)量和水平提供一定依據(jù)。

關(guān)鍵詞：抗體檢測；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟，曾稱“豬霍亂、爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（Classical swine fever Virus， CSFV）引起的豬（包括野豬）一種高度接觸性傳染病。一旦發(fā)生豬瘟疫情，將會造成養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失 [1-2]。PRRS又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV）引起豬的一種急性、高度傳染的病毒性傳染病，嚴(yán)重威脅生豬養(yǎng)殖業(yè)[3-5]。臨床上主要表現(xiàn)為繁殖障礙和呼吸困難，由于發(fā)病后，病豬的耳部皮膚會出現(xiàn)發(fā)紺的現(xiàn)象，故又稱該病為 “藍(lán)耳病”[6]。豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬群呈暴發(fā)性流行，可引起妊娠母豬流產(chǎn)，不發(fā)情等繁殖功能障礙；公豬不育；新生仔豬大量死亡；育肥豬呼吸困難等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之

一[7]。目前這幾種病毒性傳染病嚴(yán)重影響豬場的生物安全，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，而疫苗免疫接種是目前最好的預(yù)防措施。為了更好地了解浙江不同地區(qū)中小規(guī)模豬場免疫水平， 2023年下半年對浙江不同地區(qū)中小型規(guī)模豬場的121份血清樣品采用了酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）進(jìn)行抗體檢測及分析，為完善浙江地區(qū)豬場防疫工作，科學(xué)評價豬場免疫情況，切實提升豬場疫病防控質(zhì)量和水平提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）樣品來源。2023年下半年分別對浙江4個地區(qū)（湖州、慈溪、金華、衢州）中小型豬場隨機(jī)采取121份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進(jìn)一步分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

（3）主要儀器。酶標(biāo)儀，型號Infinite?200 PRO，瑞士帝肯集團(tuán)公司；高速離心機(jī)，型號5424，德國Eppendoft；移液器，德國Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號Leopard70-2A，普萊特科學(xué)儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 實驗方法

目前血清學(xué)診斷技術(shù)在生產(chǎn)實際中一般使用具有較低的成本，可被大范圍地使用的幾種技術(shù)，如酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、間接血凝試驗、中和實驗、瓊脂擴(kuò)散實驗、補(bǔ)體結(jié)合實驗。其中ELISA 的最大優(yōu)勢是高靈敏性和高特異性、成本低、操作簡單、效率高、穩(wěn)定性強(qiáng)等各項優(yōu)點(diǎn)，是目前實驗室檢測各類動物疫病抗體的常用方法。本試驗通過ELISA方法對血清樣本中CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 抗體進(jìn)行檢測。

1.3 操作步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)

（1）操作步驟。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。基本操作過程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標(biāo)抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測定與分析

（2）判定標(biāo)準(zhǔn)。3種病毒抗體檢測結(jié)果按說明書標(biāo)準(zhǔn)判定（表 1）。注意所有檢測試劑盒組分在使用前需恢復(fù)至 18～25 ℃條件下操作。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測情況

在采集的浙江省四個地區(qū)共121份樣品中，CSFV抗體陽性率為90.9 %，變異系數(shù)為0.28，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達(dá)到國家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)免疫（抗體合格率保持在70 %以上）；PRRSV抗體陽性率為65.3 %，變異系數(shù)為0.86，免疫水平不達(dá)標(biāo)且抗體水平整齊度不高，未達(dá)到國家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)；PRV-gB的陽性率為86.8 %，變異系數(shù)1.18，免疫效果較好但整齊度不高；PRV-gE抗體陽性率為18.2 %，其結(jié)果表明該地區(qū)存在野毒感染的情況。具體結(jié)果見表2。

2.2 不同病原抗體檢測情況

（1）CSFV抗體檢測結(jié)果。CSFV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表3）表明：湖州、慈溪、金華、衢州在四個地區(qū)中免疫水平最好的為湖州100 %，最低為慈溪有79.1 %，其結(jié)果表明，浙江部分地區(qū)CSF抗體陽性率均保持在較高水準(zhǔn)，且變異系數(shù)較低，總體免疫狀態(tài)良好。

（2）PRRSV抗體檢測結(jié)果。PRRSV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表3）表明：浙江四個地區(qū)的PRRSV抗體水平差異較大其中慈溪抗體水平最高，其抗體陽性率為95.8 %，其余三個地區(qū)免疫效果均未達(dá)到國家免疫標(biāo)準(zhǔn)，抗體水平較低，其中衢州地區(qū)抗體陽性率不到50 %。

（3）PRV抗體檢測結(jié)果。PRV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表3）表明：金華地區(qū)PRV-gB抗體陽性率最高，為92.7 %；其次是湖州、衢州和慈溪。湖州地區(qū)存在一定比例的PRV-gE抗體陽性，其抗體陽性率為88 %，提示當(dāng)?shù)匾岸靖腥颈容^嚴(yán)重。

3 討論

據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)計，近期豬新發(fā)傳染病多達(dá)20種，其中豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病是目前危害中國養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的3種主要傳染病[8]。疫苗接種是目前規(guī)?；i場預(yù)防重要傳染病的基本措施，但由于不同豬場使用的疫苗種類、生產(chǎn)廠家以及免疫程序都有不同，導(dǎo)致免疫后豬群血清抗體水平參差不齊。對豬瘟、豬藍(lán)耳病、偽狂犬抗體水平進(jìn)行免疫檢測，既可以及時了解疫苗免疫效果，又可有效地評估疫病的感染壓力和風(fēng)險 [9]。

根據(jù)本次調(diào)查的CSFV抗體結(jié)果表明浙江各地區(qū)CSFV抗體陽性率均在90 %以上，均超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部70 %的標(biāo)準(zhǔn)，整體免疫效果好。近年來，我國市場上已有60余家企業(yè)獲得豬瘟疫苗的政府生產(chǎn)批文[10]，疫苗的種類是影響免疫效果的主要因素，選擇優(yōu)質(zhì)的疫苗加上合理的免疫程序?qū)τ谪i場起到關(guān)鍵性作用[11]。疫苗具有更高的安全性和穩(wěn)定性，這可能是大部分豬場CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率逐年升高的原因，也表明浙江省各地區(qū)都比較重視豬瘟的免疫預(yù)防工作，與劉錦韋[12]調(diào)查了蒼南縣地區(qū)CSFV抗體陽性率的結(jié)果相似，由此也說明該地區(qū)對豬瘟免疫工作比較到位，豬瘟疫苗的免疫效果較好，從而對豬瘟防控工作取得顯著的成效。

本次調(diào)查經(jīng)ELISA檢測PRRSV血清樣本共121份，總體抗體陽性率僅為65.3 %，從不同區(qū)域?qū)Ρ葋砜?，其中慈溪地區(qū)抗體陽性率為95.8 %，達(dá)到了我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的PRRS 疫苗抗體陽性率 70 % 的標(biāo)準(zhǔn)；金華、湖州、衢州地區(qū)抗體陽性率分別為65.4 %、52 %、41.2 %，并沒有達(dá)到70 %的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致這種情況分析原因有以下幾點(diǎn)：一是2017年我國取消PRRS強(qiáng)制性免疫政策影響[13]，豬場依據(jù)自身豬場情況和經(jīng)驗制定適合自身豬場的免疫防護(hù)策略；二是2018年以來，非洲豬瘟傳入我國，很多生豬規(guī)模廠由于人力和資源有限等原因， 防控重心轉(zhuǎn)移到非洲豬瘟上，導(dǎo)致 PRRS免疫無法做到全覆蓋；三是地方州市可能財政緊缺， PRRS疫苗無法根據(jù)實際情況納入財政采購預(yù)算有關(guān)[14]。

本次調(diào)查PRV-gB血清樣本陽性率為86.8 %，其中抗體陽性率最高的地區(qū)為金華，其次為湖州、衢州、慈溪，抗體陽性率分別為92.7 %、88 %、82.4 %和79.2 %。龐超等[15]、呂素芳等[16]研究發(fā)現(xiàn)豬偽狂犬的毒力因子是gE基因，我國實際生豬養(yǎng)殖過程中多采用PRVgE基因缺失疫苗預(yù)防豬偽狂犬病，有檢測到gE抗體陽性，則可辨別豬存在野毒感染[17]，湖州地區(qū)檢測到PRV-gE抗體陽性率為88 %，說明該地區(qū)野毒感染情況較為嚴(yán)重，需要調(diào)整免疫程序，完善生物安全防控體系。

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