〔摘要〕 目的 探索自擬益氣止咳方對(duì)肺脾氣虛證大鼠的影響及其機(jī)制。方法 將60只SPF級(jí)健康SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（n=12）和造模組（n=48），造模組以脂多糖氣管滴注加煙熏建立肺氣虛證模型，煙熏2周后番瀉葉灌胃建立脾氣虛證模型。4周后，造模組大鼠隨機(jī)分為模型組（灌胃等體積生理鹽水）、陽性對(duì)照組（灌胃香砂六君子丸混懸液2.7 g/kg）及益氣止咳方低、高劑量組（灌胃益氣止咳方藥液2.45、9.8 g/kg），每組12只，均灌胃治療4周。治療結(jié)束后，稱量大鼠體質(zhì)量；檢測抓力觀察大鼠肌肉力量；HE染色觀察大鼠肺和胃組織病理改變；磷鉬酸比色法檢測肺、胃、股四頭肌組織中腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate， ATP）含量；ELISA法檢測肺和胃組織中炎癥因子腫瘤壞死因子-α（tumour necrosis factor-α， TNF-α）和白細(xì)胞介素-8（interleukin-8， IL-8）的含量。結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量、抓力均降低（P<0.01或P<0.05）；肺組織小支氣管管壁充血、炎癥細(xì)胞浸潤，黏膜上皮細(xì)胞纖毛粘連、倒伏，甚或脫落，管腔內(nèi)有炎性滲出物，胃黏膜出現(xiàn)腺體排列不規(guī)則、炎癥細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象；肺、胃和股四頭肌組織中ATP含量降低（P<0.01）；肺和胃組織中TNF-α和IL-8含量升高（P<0.01）。與模型組比較，益氣止咳方低、高劑量組大鼠體質(zhì)量和抓力增加（P<0.01）；肺組織中炎癥細(xì)胞浸潤改善，管壁增厚減輕，炎性滲出物及充血減輕，胃組織中腺體層數(shù)增加，排列較整齊，炎癥細(xì)胞浸潤減少；肺、胃和股四頭肌組織中ATP的含量增加（P<0.01或P<0.05），肺和胃中TNF-α和IL-8的含量減少（P<0.01）。結(jié)論 自擬益氣止咳方能有效改善肺脾氣虛證大鼠的臨床癥狀，其機(jī)制可能與抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)ATP合成有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 益氣止咳方；肺脾氣虛證；藥效；炎癥；藏醫(yī)藥

〔中圖分類號(hào)〕R285.5 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.10.007

Efficacy and mechanism of self-drafted Yiqi Zhike Formula on rats

with lung and spleen qi deficiency pattern

WANG Zhuwei1， SUN Shengnan1， YE Fei1， XIA Weina1， BAI Junjie2*， LIAO Xingxu3， ZHAXI Dongzhi3， WANG Kun1， DU Qinghong1， XU Ya1*

1. School of Chinese Medicine， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China;

2. Dongfang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100078， China;

3. Xizang Golden Khada Pharmaceutical Co.， LTD， Lhasa， Xizang 100037， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To explore the effects and mechanism of a self-drafted Yiqi Zhike Formula （YQZKF） on rats with lung and spleen qi deficiency pattern. Methods Sixty SPF-grade healthy SD male rats were randomly divided into normal （n=12） and modeling groups （n=48）. In the modeling group， the lung qi deficiency model was established by intratracheal lipopolysaccharide （LPS） instillation with fumigation， and then the spleen qi deficiency model was established by intragastric administration of Fanxieye （Sennae Folium） after two weeks of fumigation. After four weeks， the rats in the modeling group were randomly subdivided into model group （gavage with normal saline of equal volume）， positive control group （gavage with Xiangsha Liujunzi Pill Suspension 2.7 g/kg）， and low- and high- dose YQZKF groups （gavage with YQZKF solution 2.45 and 9.8 g/kg）， with 12 rats in each group. All rats were treated by gavage for four weeks. At the end of the treatment， the body mass of the rats was weighed; the muscle strength of rats was observed by detecting the grip force; HE staining was used to observe the histopathological changes in the lung and stomach tissues of rats; phosphomolybdic acid colorimetric assay was used to determine the content of adenosine triphosphate （ATP） in the lungs， stomach， and quadriceps tissue， and ELISA was used to test the levels of inflammatory factors tumour necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-8 （IL-8） in the lung and stomach tissues. Results Compared with the normal group， the body weight and grip strength of rats in model group were lower （P<0.01 or P<0.05）. In the lung tissue， the small bronchial walls exhibited congestion， inflammatory cell infiltration， and the ciliated epithelial cells showed adhesion， lodging， or even detachment of cilia， with inflammatory exudates present in the lumens. The gastric mucosa showed irregular arrangement of glands and inflammatory cell infiltration. Additionally， ATP content decreased in lung， stomach， and quadriceps tissues （P<0.01 or P<0.05）， while TNF-α and IL-8 levels increased in lung and gastric tissues （P<0.01 or P<0.05）. Compared with the model group， the body mass and grip strength of rats in the low- and high- dose YQZKF groups increased to different degrees （P<0.01 or P<0.05）; the inflammatory cell infiltration in the lung tissue was reduced， with reduced wall thickening， decreased inflammatory exudates and congestion; in the gastric tissue， the number of glandular layers increased， arranged more neatly， and inflammatory cell infiltration decreased. The ATP content increased in the lung， gastric， and quadriceps muscle tissues （P<0.01 or P<0.05）， while the levels of TNF-α and IL-8 decreased in the lung and stomach （P<0.01）. Conclusion Self-drafted YQZKF can effectively alleviate the clinical symptoms of rats with lung and spleen qi deficiency pattern， and its mechanism may be related to inhibition of inflammatory response and promotion of ATP synthesis.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Yiqi Zhike Formula; lung and spleen qi deficiency pattern; efficacy; inflammation; Tibetan medicine

肺脾氣虛證是指肺脾兩臟氣虛，以咳嗽、氣喘、腹脹、食少、便溏為主要表現(xiàn)的證候[1]，多由久病咳喘，耗傷肺氣，子病及母，運(yùn)化失常；或飲食勞倦，脾胃受損，土不生金，累積于肺，宣降失司所致。多種呼吸道疾病，如慢性阻塞性肺氣腫穩(wěn)定期[2]、支氣管哮喘緩解期[3]、非小細(xì)胞肺癌晚期[4]、新型冠狀病毒感染恢復(fù)期[5]等均可出現(xiàn)以肺脾氣虛證為主的臨床表現(xiàn)。本團(tuán)隊(duì)根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論及杜慶紅教授在藏區(qū)工作的經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)肺脾氣虛證自擬益氣止咳方。此方由炙黃芪、訶子、榜嘎（藏藥）、沉香組成，在補(bǔ)益肺脾的同時(shí)，清熱斂肺、降氣平喘止咳。本實(shí)驗(yàn)通過制備經(jīng)典的肺脾氣虛證大鼠模型，研究益氣止咳方對(duì)肺脾氣虛證大鼠的影響及其機(jī)制，旨在為藥物的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量為（220±10） g，購于北京斯貝福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，許可證號(hào)為SCXK（京）2019-0010。動(dòng)物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房，自由進(jìn)食、飲水，喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，適應(yīng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本研究通過北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查，編號(hào)：BUCM-2023041902-2023。嚴(yán)格按照北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論動(dòng)物中心管理規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器

大小鼠抓力儀（型號(hào)：KW-ZL，南京卡爾文生物科技有限公司）；iMark吸收光酶標(biāo)儀（型號(hào)：1681130，美國Bio-Rad公司）；超分辨顯微成像系統(tǒng)（型號(hào)：Aperio Versa）、包埋機(jī)（型號(hào)：EG1150H）、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（型號(hào)：HistoCore BIOCUT）、組織攤片機(jī)（型號(hào)：HI1210）、烘片機(jī)（型號(hào)：HI1220）均購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)主要藥物及試劑

炙黃芪、訶子、沉香、榜嘎、番瀉葉均購自北京上醫(yī)仁家中醫(yī)診所有限公司；香砂六君子丸（國藥準(zhǔn)字：Z11020657，規(guī)格：6 g×12袋，批號(hào)：22081293，北京同仁堂制藥有限公司）；戊巴比妥鈉（批號(hào)：20170318，美國Sigma公司）；白細(xì)胞介素-8 （interleu-kin-8，IL-8）ELISA試劑盒（批號(hào)：LotApr2023）、腫瘤壞死因子-α（tumour necrosis factor-α，TNF-α）ELISA試劑盒（批號(hào)：LotMar2023）均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate， ATP）含量檢測試劑盒（批號(hào)：20230314，南京建成生物有限公司）；中華牌香煙（焦油量11 mg/支，批號(hào)：10609444594514604，上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司）；BCA蛋白定量試劑盒[批號(hào)：2023QOFP1511，普利萊（北京）基因有限公司]；伊紅染色液（批號(hào)：2307001）、蘇木素染色液（批號(hào)：2307100）、返藍(lán)液（批號(hào)：2307002）、中性樹膠（批號(hào)：221W021）均購自北京索萊寶科技有限公司；1%酸性乙醇分化液（批號(hào)：0714A23，北京雷根生物技術(shù)有限公司）。

1.4 益氣止咳方的煎藥方法

參考2015年版《中華人民共和國藥典》[6]及《中華本草·藏藥卷》[7]，并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，創(chuàng)制益氣止咳方。藥物組成：炙黃芪12 g，訶子4 g，榜嘎1.6 g，沉香2 g。根據(jù)人用量折合成大鼠用量[8]準(zhǔn)備藥物。

益氣止咳方高劑量組：每10只大鼠1周需要炙黃芪168 g、訶子56 g、榜嘎22.4 g、沉香28 g。首煎加入4倍藥量的水，煮40 min。二煎加入3倍藥量的水，繼續(xù)煎煮30 min。兩次煎液合并，最后濃縮定容至280 mL，每1 mL含生藥0.98 g。

益氣止咳方低劑量組：每10只大鼠1周需要炙黃芪42 g、訶子14 g、榜嘎5.6 g、沉香7 g。煎煮法同益氣止咳方高劑量組，每1 mL含生藥0.245 g。

1.5 香砂六君子丸混懸液的配制

香砂六君子丸具有益氣化痰、行氣溫中的作用，作為本研究的陽性對(duì)照藥。根據(jù)說明書最大人用量折算成大鼠用量，即大鼠給藥量為2.7 g/kg。香砂六君子丸混合藥液濃縮至每1 mL含生藥0.27 g。

1.6 番瀉葉的煎煮方法

將番瀉葉投入沸水中浸泡1 h，番瀉葉∶水的比例為1（g）∶10（mL），濾出藥液后存放于4 ℃冰箱備用。

1.7 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的配制

將1 mg LPS重懸于1 mL無菌平衡鹽溶液中，輕輕旋渦振蕩直至粉末完全溶解，即得到1 g/L的儲(chǔ)存液。

1.8 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模、給藥方法

1.8.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，按照隨機(jī)數(shù)字表法將其隨機(jī)分為正常組（12只）、造模組（48只）。造模結(jié)束后，造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性對(duì)照組、益氣止咳方高劑量組、益氣止咳方低劑量組，每組12只，分組后進(jìn)行耳標(biāo)編號(hào)。

1.8.2 肺脾氣虛證模型建立及給藥 應(yīng)用LPS氣管滴入加香煙煙熏法制作肺氣虛證模型[9]。在第1天和第14天，將200 μL的LPS（1 g/L）滴入造模組大鼠氣管內(nèi)，次日將大鼠連同鼠籠一起置于吸煙染毒箱中，每個(gè)箱子中放24只大鼠，1次/d，每次8支香煙，每次煙熏時(shí)間約40 min（第1天、第14天滴注LPS，不煙熏）。造模周期4周，自由進(jìn)食飲水。應(yīng)用番瀉葉灌胃法制作脾氣虛證模型[10]。從煙熏第15天開始按大鼠體質(zhì)量灌胃番瀉葉（1 mL/100 g），每天1次，周期2周。

肺脾氣虛證造模成功后，按照組別分別灌胃生理鹽水、香砂六君子丸混懸液（2.7 g/kg）、高劑量益氣止咳方藥液（9.8 g/kg）、低劑量益氣止咳方藥液（2.45 g/kg），灌胃體積為1 mL/100 g，治療時(shí)間為4周。治療結(jié)束后各組大鼠禁食不禁水12 h，稱重后用4%戊巴比妥鈉（0.5 mL/100 g）麻醉，取材。

1.9 指標(biāo)檢測方法

1.9.1 大鼠的死亡情況 每天記錄大鼠死亡情況，并計(jì)算死亡率。死亡率=大鼠死亡總數(shù)/大鼠總數(shù)量×100%（不包括人為因素死亡）。

1.9.2 體質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)第0、28、56天上午8：00稱量大鼠體質(zhì)量，記錄各組大鼠體質(zhì)量增長情況并進(jìn)行比較分析。

1.9.3 抓力實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)選用北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心的抓力測定儀，于第4、8周進(jìn)行抓力實(shí)驗(yàn)，大鼠的前爪抓住抓力測定儀的前橫桿，抓握穩(wěn)定后再拉助大鼠尾根部拉回來。每只大鼠進(jìn)行3次測試，以平均值為統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，觀察大鼠肌肉力量。

1.9.4 HE染色 取大鼠肺、胃（胃底）組織，修剪成1 cm3大小組織塊，取材后立即將大鼠肺和胃組織放入4%多聚甲醛液中固定，進(jìn)行石蠟包埋、切片，脫蠟。按蘇木素10 min、1%酸性乙醇分化液5 s、返藍(lán)液30 s、伊紅2 min的順序染色。最后脫水封片，顯微鏡下觀察。

1.9.5 磷鉬酸比色法 取肺、胃、股四頭肌組織各0.05 g，分別按重量（g）∶體積（mL）=1∶9的比例，加入9倍體積的冷雙蒸水450 μL，冰水浴勻漿，制成10%的勻漿液。再置于沸水浴中煮10 min，取出混勻1 min，3 500 r/min離心（離心半徑為38 mm）10 min，取上清液待測。按照ATP試劑盒說明書檢測肺、胃、股四頭肌組織中ATP含量。

1.9.6 ELISA法 取肺、胃組織于-80 ℃凍存，按照ELISA試劑盒說明書步驟，檢測IL-8、TNF-α含量。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 20.0軟件處理數(shù)據(jù)，采用“ｘ±s”描述計(jì)量資料。各組數(shù)值若符合正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，則進(jìn)行單因素方差分析，組間比較用LSD法；若不符合正態(tài)性檢驗(yàn)或方差齊性檢驗(yàn)，則使用非參數(shù)檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠死亡率

造模期間，大鼠共死亡17只；取材時(shí)，正常組因麻醉不當(dāng)致死2只。死亡率約為29.31%。

2.2 益氣止咳方對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響

造模前，各組大鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。造模后，與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.01）。治療后，與模型組比較，陽性對(duì)照組、益氣止咳方各劑量組大鼠體質(zhì)量均升高（P<0.05）；陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組大鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表1。

與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量增長率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型組比較，陽性對(duì)照組、益氣止咳方各劑量組大鼠體質(zhì)量均升高（P<0.01）；陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組大鼠體質(zhì)量增長率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表1。

2.3 益氣止咳方對(duì)大鼠抓力的影響

造模后，與正常組比較，模型組大鼠抓力顯著降低（P<0.01）。治療后，與模型組比較，陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組抓力顯著升高（P<0.01）；陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組大鼠抓力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表2。

2.4 HE染色結(jié)果

2.4.1 大鼠肺組織HE染色 正常組大鼠肺組織小支氣管黏膜上皮完整，纖毛未見粘連、脫落，管壁結(jié)構(gòu)完整，未見炎癥細(xì)胞浸潤，管腔內(nèi)未見炎性滲出物，肺間質(zhì)未見充血等。模型組小支氣管管壁充血、增厚，管壁有淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，黏膜上皮細(xì)胞纖毛粘連、倒伏，甚或脫落，管腔內(nèi)有炎性滲出物。陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組炎癥細(xì)胞浸潤改善，管壁增厚減輕，炎性滲出物及充血減輕。詳見圖1。

2.4.2 大鼠胃組織HE染色 正常組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞完整，腺體密集，層數(shù)較多，排列整齊。模型組大鼠胃組織出現(xiàn)腺體排列不規(guī)則、炎癥細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象。與模型組相比，陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組腺體層數(shù)增加，排列較整齊，炎癥細(xì)胞浸潤減少。詳見圖2。

2.5 益氣止咳方對(duì)大鼠肺、胃、股四頭肌組織中ATP含量的影響

與正常組比較，模型組大鼠肺、胃、股四頭肌組織中ATP含量顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，陽性對(duì)照組、益氣止咳方各劑量組大鼠肺、胃、股四頭肌組織中ATP含量升高（P<0.01或P<0.05）。與益氣止咳方低劑量組比較，益氣止咳方高劑量組大鼠肺組織中ATP含量升高（P<0.05）。陽性對(duì)照組與益氣止咳方各劑量組肺、胃、股四頭肌中ATP含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表3。

2.6 益氣止咳方對(duì)大鼠肺和胃組織中細(xì)胞因子IL-8、TNF-α的影響

與正常組比較，模型組大鼠肺和胃組織中IL-8含量顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，陽性對(duì)照組、益氣止咳方各劑量組肺和胃組織中IL-8含量顯著降低（P<0.01）。陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組肺和胃組織中IL-8含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表4。

與正常組比較，模型組大鼠肺、胃組織中TNF-α含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，陽性對(duì)照組、益氣止咳方各劑量組肺、胃組織中TNF-α含量顯著降低（P<0.01）。陽性對(duì)照組及益氣止咳方各劑量組肺和胃組織中TNF-α含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表5。

3 討論

益氣止咳方包含炙黃芪、訶子、沉香、榜嘎4味藥物。其中，黃芪能健脾補(bǔ)中、升陽舉陷、益衛(wèi)固表；訶子能澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽；榜嘎為藏醫(yī)常用藥物，能清熱解毒利濕，可清除余邪；沉香能行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘。四藥相合，補(bǔ)益肺脾、清熱斂肺、降氣平喘止咳。本方以補(bǔ)虛為主，清肺平喘為輔?？v觀全方，清補(bǔ)與收澀兼用，補(bǔ)虛不斂邪；升中有降，使氣機(jī)暢達(dá)。

目前，肺氣虛證常見的造模方法有單純煙熏[11]、煙熏加LPS[12]等；脾氣虛證常見的造模方法有灌胃大黃[13]、灌胃番瀉葉[14]等。在肺氣虛證模型制備上，本研究選用香煙霧熏聯(lián)合LPS氣道滴注的方法。相比于單純煙熏，聯(lián)合LPS氣道滴注可使肺功能急劇下降、氣道黏液高分泌，更能促進(jìn)炎癥細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致肺組織氣管壁增厚，通氣能力下降[15]，從而使肺氣虛證表現(xiàn)于外的癥狀非常明顯，更符合臨床常見呼吸道疾病肺損傷的病理過程。在脾氣虛證模型制備上，本研究選擇番瀉葉灌胃的方法。大黃因鞣質(zhì)含量較高，產(chǎn)生瀉下作用的同時(shí)又可導(dǎo)致便秘[16]，而番瀉葉純?yōu)a無補(bǔ)，瀉下作用較強(qiáng)于大黃[17]。本研究結(jié)果顯示，肺脾氣虛證大鼠體質(zhì)量減輕，抓力減小，與肺脾氣虛證患者倦怠乏力、納差等癥狀相吻合，說明造模成功。經(jīng)益氣止咳方治療后，大鼠體質(zhì)量增長加快，乏力癥狀明顯減輕。益氣止咳方各劑量組與陽性對(duì)照組的大鼠體質(zhì)量及抓力結(jié)果比較，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可見益氣止咳方與香砂六君子丸改善氣虛的療效相似。

HE染色結(jié)果顯示，大鼠造模后肺組織炎癥損傷明顯，胃黏膜腺體數(shù)量減少、排列紊亂，這與田津等[18]研究結(jié)果相吻合。經(jīng)益氣止咳方治療后，肺組織中小支氣管炎癥損傷減輕，胃組織中腺體層數(shù)增加、排列較整齊，表明益氣止咳方能有效緩解肺、胃組織結(jié)構(gòu)的損傷。

ATP是生物體進(jìn)行各項(xiàng)生命活動(dòng)所需的直接能源物質(zhì)[19]。研究表明，肺脾氣虛狀態(tài)下，機(jī)體中的Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase的活性均降低，使肺、胃和肌肉中ATP能量生成不足，導(dǎo)致臨床患者及大鼠模型出現(xiàn)氣短、倦怠乏力、嘔惡納差的癥狀[20-22]。本研究結(jié)果顯示，益氣止咳方各劑量組肺、胃、股四頭肌組織中的ATP含量顯著增高，表明益氣止咳方能促進(jìn)ATP的能量釋放。在促進(jìn)肺組織中ATP生成方面，益氣止咳方藥效隨劑量增加而增強(qiáng)。

本實(shí)驗(yàn)所用肺脾氣虛證模型的機(jī)制與炎癥因子引發(fā)的炎癥反應(yīng)有關(guān)，如IL-8、TNF-α[23]。IL-8是趨化細(xì)胞因子，能對(duì)白細(xì)胞如中性粒細(xì)胞產(chǎn)生一定的趨化、激活作用，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)[24]。TNF-α是一種促炎細(xì)胞因子，能增加粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子和IL-8的分泌[25]。本研究結(jié)果顯示，益氣止咳方能有效降低肺和胃組織中TNF-α和IL-8的合成，與HE染色肺和胃組織中炎癥減輕結(jié)果一致，由此說明益氣止咳方能顯著緩解肺脾氣虛證大鼠肺和胃組織中的炎癥反應(yīng)。在緩解炎癥方面，益氣止咳方與香砂六君子丸效果相似。

綜上所述，益氣止咳方可有效改善肺脾氣虛證大鼠的癥狀，減輕肺的炎性滲出和胃的組織學(xué)改變，其機(jī)制可能與抑制炎癥因子合成、促進(jìn)ATP合成有關(guān)，上述研究結(jié)果可為益氣止咳方的臨床應(yīng)用提供有力支撐。

參考文獻(xiàn)

[1] 任 健. 中醫(yī)診斷學(xué)[M]. 濟(jì)南： 山東科學(xué)技術(shù)出版社， 2020： 174.

[2] 張 麗， 申 暢， 曾龍歡. 補(bǔ)肺健脾方+縮唇-腹式呼吸訓(xùn)練治療穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛證的臨床觀察[J]. 中國中醫(yī)藥科技， 2023， 30（5）： 912-913.

[3] 賀月星. 基于絡(luò)病理論自擬補(bǔ)氣通絡(luò)湯對(duì)兒童哮喘肺脾氣虛兼瘀阻型的臨床觀察[D]. 哈爾濱： 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)， 2023.

[4] 趙桂俠， 鄒善思， 周曉蕾， 等. 參芪解毒湯加味聯(lián)合TP方案治療肺脾氣虛型晚期非小細(xì)胞肺癌[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào)， 2023， 38（9）： 1999-2006.

[5] 丁 波， 劉令令， 段 飛. 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討新型冠狀病毒肺炎肺脾氣虛證恢復(fù)期復(fù)方的作用機(jī)制[J]. 中醫(yī)研究， 2022， 35（9）： 63-69.

[6] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典： 2015年版 一部[M]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2015： 186-187， 303.

[7] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 《中華本草·藏藥卷》[M]. 上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2002： 306-307.

[8] 邵義祥. 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教程[M]. 南京： 東南大學(xué)出版社， 2016： 223-224.

[9] 呂 磊， 王成陽， 劉向國， 等. 六味補(bǔ)氣膠囊對(duì)肺氣虛型慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道重塑中病理形態(tài)和MMP-9、MMP-12表達(dá)的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志， 2013， 33（24）： 6181-6184.

[10] 張永輝， 孫 鑫， 邵建彬， 等. 益氣固表方對(duì)于肺脾氣虛型免疫低下RRTIs小鼠IgA、IgG、IgM和SIgA的干預(yù)作用[J]. 世界科學(xué)技術(shù)： 中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2022， 24（9）： 3589-3595.

[11] 任秀玲， 趙清樹， 程振芳， 等. “肺氣虛”大鼠模型肺、皮膚、大腸Fas、Fas-L表達(dá)相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2007， 22（7）： 478-480.

[12] 吳孝政， 陸麗青， 蒲水莉， 等. 玉屏風(fēng)散對(duì)肺氣虛證大鼠氣道黏液高分泌因子MUC5AC、NE水平的影響[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2023， 19（9）： 20-26.

[13] YOU Y， LUO L， YOU Y Y， et al. Shengmai Yin formula modulates the gut microbiota of spleen-deficiency rats[J]. Chinese Medicine， 2020， 15： 114.

[14] XIONG R， LI Y D， ZHENG K X， et al. Er Shen Wan extract alleviates polyuria and regulates AQP 2 and AVPR 2 in a rat model of spleen-kidney Yang deficiency-induced diarrhea[J]. Biomed Pharmacother， 2019， 110： 302-311.

[15] 盧心鵬， 劉 蓉， 黃文博， 等. 不同方法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的比較研究[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)， 2022， 42（3）： 201-206.

[16] 周 萍. 生大黃“先瀉后斂”藥效作用及基于代謝組學(xué)的作用機(jī)制研究[D]. 北京： 中國中醫(yī)科學(xué)院， 2022.

[17] 曲長江， 林庶如， 夏淑杰， 等. 苦寒瀉下兩種脾虛模型的免疫學(xué)比較研究[J]. 遼寧中醫(yī)雜志， 1999， 26（3）： 37-38.

[18] 田 津， 葉佐玉， 付丹丹， 等. 升陽益胃湯對(duì)慢性阻塞性肺疾病肺脾氣虛證模型大鼠組織病理學(xué)及血清炎癥因子、外周血Th17/Treg平衡的影響[J]. 中醫(yī)雜志， 2023， 64（1）： 62-70.

[19] 李小兵， 沈麗萍， 劉小虹， 等. 補(bǔ)肺化痰方對(duì)肺虛痰阻證模型大鼠Na+-K+-ATP酶活性的影響[J]. 中醫(yī)雜志， 2010， 51（7）： 648-650.

[20] 曾益宏， 劉友章， 徐 升. 益氣健脾法對(duì)脾虛證大鼠模型骨骼肌線粒體ATPase活性的影響[J]. 長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009， 25（2）： 171-172.

[21] 劉德芳， 張耀雷， 劉碧瑩， 等. 基于脾虛濕阻研究佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型炎性因子、鈉鉀ATP酶及病理組織學(xué)變化[J]. 風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎， 2023， 12（1）： 1-5， 18.

[22] NATH S. Analysis of molecular mechanisms of ATP synthesis from the standpoint of the principle of electrical neutrality[J]. Biophysical Chemistry， 2017， 224： 49-58.

[23] 吳鎮(zhèn)湖. 慢性阻塞性肺病穩(wěn)定期IL-8、TNF-α水平與中醫(yī)證型及吸煙的相關(guān)性研究[D]. 廣州： 廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 2010.

[24] 劉 梅， 賀飛燕. 白細(xì)胞介素-8基因多態(tài)性與疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2012， 12（9）： 1769-1771.

[25] MA X J. TNF-α and IL-12： A balancing act in macrophage functioning[J]. Microbes and Infection， 2001， 3（2）： 121-129.