【摘 要】 目的：優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的制備工藝。方法：采用HPLC法測定黃榆痔疾洗劑鹽酸小檗堿的含量，以含量和干膏率為評價指標，通過正交設(shè)計考察黃榆痔疾洗劑的煎煮時間、加水量、煎煮次數(shù)，優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝；

同時對黃榆痔疾洗劑進行了濃縮工藝、純化工藝和成型工藝的考察。結(jié)果：黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝為加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h；濃縮采用減壓或常壓濃縮方式，離心除雜純化轉(zhuǎn)速5000 r·min-1，成型工藝加入0.3%的苯甲酸鈉獲得黃榆痔疾洗劑的最佳制備工藝。結(jié)論：優(yōu)選的制備工藝簡單可行，具備科學性，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】 黃榆痔疾洗劑；制備工藝；鹽酸小檗堿

【中圖分類號】R283

【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2024）20-0061-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.20.zgmzmjyyzz202420013

Study on Preparation Technology of Huangyu Zhiji Lotion

PAN Haihua1 LI Zhiyong3 DENG Guizhu1，2* ZHANG Jianjun3 GUO Cai e1 ZHOU Guoyan1

1.Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Qingyuan 511500，China;

2.Engineering Technology Research Center of Fresh Medicine and National Medicine of Guangdong Province，Qingyuan 511500，China;

3.Guangdong Institute of Traditional Chinese Medicine Engineering Technology，Guangzhou 510095，China

Abstract：Objective To optimize the preparation process of Huangyu Zhiji Lotion.Method The content of berberine hydrochloride in Huangyu Zhiji Lotion was determined by HPLC.Taking the content and dry paste rate as evaluation indexes，the decocting time，water addition and decocting times of Huangyu Zhiji Lotion were investigated by orthogonal design，and the best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion was optimized.At the same time，the concentration process，purification process and molding process of Huangyu Zhiji Lotion were investigated.Result The best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion is to add water for three times，add 6 times of water each time，and decoct for 1 hour each time;Concentrating under reduced pressure or normal pressure，centrifugal impurity removal and purification speed of 5000 r·min-1，and adding 0.3% sodium benzoate to the molding process，the best preparation technology of Huangyu Zhiji Lotion was obtained.Conclusion The optimized preparation process is simple，feasible，scientific and suitable for industrial production.

Keywords：Huangyu Zhiji Lotion；Preparation Technology；Berberine Hydrochloride

痔瘡是一種發(fā)病率極高的肛腸疾病，在我國成年人中痔瘡發(fā)病率高達50.10%［1］。其發(fā)病原因往往與飲食習慣改變、生活習慣不良等相關(guān)［2］，痔瘡的癥狀一般表現(xiàn)為肛門瘙癢、肛門灼熱疼痛等，嚴重的還會伴有大便出血、內(nèi)痔脫垂等，嚴重影響患者的生活質(zhì)量［3］?，F(xiàn)代中醫(yī)辨證分型將痔分為風傷腸絡(luò)型、濕熱下注型、氣滯血瘀型、脾虛氣陷型四種［4］。在近30年的我國痔瘡治療研究中，治療方式上更傾向于我國傳統(tǒng)的中醫(yī)療法和中草藥的使用［5］。而傳統(tǒng)的中醫(yī)療法以外治法為主，中醫(yī)外治法不僅可以減少藥物內(nèi)服對胃腸道的不良反應(yīng)，還能快速精準的直接作用于患處，常用外治療法包括熏洗、藥物貼敷等。

我院黃榆痔疾方用于痔瘡屬濕熱下注證，原處方煎湯外洗，臨床療效較好，但存在煎煮、攜帶和使用不便的缺點。在中藥外用制劑中，洗劑具有順應(yīng)性好，可避免頻繁給藥，促進藥物吸收，提高生物利用度的優(yōu)點，非常適合醫(yī)療機構(gòu)制劑生產(chǎn)。因此本處方選擇制備成洗劑，現(xiàn)對其制備、濃縮、純化、成型工藝進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XS205型1/10萬電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；TP-114型分析天平（深圳市君達時代儀器有限公司）；RE-2000A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；DHG 9023A型電熱恒溫干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備），TG16-WS型高速臺式離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212，純度91.0%，中國食品藥品檢定研究院）；所有藥材均購自廣東眾康藥業(yè)有限公司，經(jīng)郭彩娥主任中藥師鑒定均符合《中華人民共和國藥典》2015年版一部各項規(guī)定；黃榆痔疾洗劑成品（批準文號：粵藥制字Z20220006;批號：202308081）；甲醇（色譜純，廣州化學試劑廠）；甲醇（分析純，廣州化學試劑廠）；乙腈（色譜純，廣州化學試劑廠）；磷酸（色譜純，上海麥克林生化科技有限公司），超純水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸小檗堿測定方法建立

2.1.1 鹽酸小檗堿色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸（40∶60） （每100 g含十二烷基磺酸鈉0.1 g）；柱溫25 ℃；1 mL/min流速；檢測波長為345 nm，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計不低于4000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻濾過，取續(xù)濾液，即得每1 mL含248 μg的鹽酸小檗堿對照品儲備溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 按處方比例，稱取黃柏等十五味飲片共計285 g，加10倍量水煎煮二次，每次1 h，濾過，合并，濾液濃縮并定容至500 mL。精密吸取濃縮液2 mL，置25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例，稱取除黃柏外的其他飲片255 g，加水煎煮二次，每次加10倍量水，煎煮1 h，濾過，合并濾液，常壓濃縮并定容至500 mL量瓶中，精密吸取濃縮液2 mL，照“2.1.3”項下供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液。

2.1.5 專屬性考察 分別精密吸取對照品、供試品及陰性對照溶液，按“2.1.1”項下高效液相色譜條件進行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陰性對照圖譜上沒有對應(yīng)的鹽酸小檗堿的峰，表明無干擾，如圖1所示。

2.2 正交試驗優(yōu)選煎煮工藝 采用正交試驗法，以君藥黃柏中鹽酸小檗堿含量和干膏得率為評價指標，對影響煎煮的加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)進行優(yōu)選，因素水平和正交設(shè)計試驗安排及結(jié)果分別見表1和表2。

2.2.1 樣品的制備 按處方比例，稱取黃柏、苦參和桃仁等飲片9份，每份285 g，照表2中正交試驗水平方案煎煮，濾過，合并，濾液濃縮并定容至500 mL。

2.2.2 干膏得率的測定 精密吸取各樣品濃縮液20 mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，照干燥失重測定法（《中國藥典》2015年版四部通則0831［6］103）測定，計算干膏得率。

計算公式：干膏得率%=［W/20xV/飲片重量］×100%。

其中W為20 mL濃縮液中干浸膏重量，V為定容體積。

2.2.3 標準曲線的繪制 分別精密吸取鹽酸小檗堿對照品儲備溶液0.5 mL、1 mL，2 mL、3 mL和4 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，精密吸取10 μL，按“2.1.1”項下高效液相色譜條件進行測定，測得峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖。得標淮曲線的回歸方程為Y=41.114X-66.161，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。表明鹽酸小檗堿在進樣量124～992 ng之間線性關(guān)系良好。

2.2.3 濃縮液鹽酸小檗堿的含量測定 精密吸取“2.2.1”項下的濃縮液2 mL，參照“2.1.3”項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下高效液相色譜條件進行測定，計算各濃縮液中鹽酸小檗堿的含量。

2.2.4 數(shù)據(jù)處理與工藝優(yōu)選 用綜合加權(quán)評分法，以干膏得率和黃柏中鹽酸小檗堿含量為指標，將各指標成分的總量分別轉(zhuǎn)換為評分值，干膏得率的加權(quán)系數(shù)為0.4，鹽酸小檗堿含量的加權(quán)系數(shù)為0.6，將每次試驗的各指標成分評分值乘以相應(yīng)的加權(quán)系數(shù)后求和計算綜合評分值，以綜合評分值進行正交試驗分析和方差分析。結(jié)果表明，由直觀分析可知各因素主次影響為：煎煮次數(shù)（A）>加水量（B）>煎煮時間（C），最佳工藝組合為A3B3C3。方差分析表明，與空白組相比較，因素A（煎煮次數(shù)）對試驗結(jié)果有顯著的影響;因素B（加水量）、因素C（煎煮時間）對試驗結(jié)果無顯著的影響，考慮到縮短生產(chǎn)周期，以及節(jié)能降耗等綜合因素，故選擇煎煮工藝為：A3B1C1，即加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1 h。見表2和表3。

2.2.5 最佳煎煮工藝條件驗證 按處方比例稱取飲片3份，每份285 g，按照優(yōu)選工藝條件煎煮，濾過，合并濾液，濃縮并定容至500 mL，并按上述方法計算干膏得率及鹽酸小檗堿含量，結(jié)果表明，三次平行試驗的鹽酸小檗堿含量平均為1.1935 mg/ mL，平均干浸膏得率為21.03%，綜合評分的平均值為95.21，與正交試驗綜合評分最大值之間差異不大，提示所篩選的煎煮工藝條件基本穩(wěn)定。見表4。

2.3 濃縮工藝的研究 本實驗對比常壓濃縮和減壓濃縮工藝，以鹽酸小檗堿保留率為評價指標，優(yōu)選濃縮工藝。稱取按照驗證工藝條件煎煮的煎煮液二份，每份2000 g，分別采用常壓濃縮和減壓濃縮（真空度-0.085 MPa）進行濃縮，各濃縮液分別濃縮至約180 g，稱定重量，分別測定鹽酸小糪堿的含量，計算保留率。（鹽酸小檗堿保留率=濃縮液中的鹽酸小檗堿含量/煎煮液中的鹽酸小檗堿含量×100%。）結(jié)果發(fā)現(xiàn)減壓濃縮工藝的鹽酸小檗堿保留率略高于常壓濃縮工藝，二者之間無明顯差異，可根據(jù)生產(chǎn)設(shè)備條件，選擇常壓濃縮或是減壓濃縮。見表5。

2.4 純化工藝考察

2.4.1 純化方法的選擇 取相當于飲片量427.5 g的濃縮液2份，分別采用離心除雜（依據(jù)實驗設(shè)備參數(shù)及實驗經(jīng)驗，選擇轉(zhuǎn)速：5000 r·min-1，離心時間15 min）和濾過除雜（200目），收集上清液，再分別加入芒硝30 g，加熱煮沸并保溫30 min，放冷，每份均加純化水調(diào)整至600 mL，裝入200 mL口服液體藥用高密度聚乙烯瓶中（n=3），放置7 d，觀察藥液沉淀情況并測定藥液總固物含量。結(jié)果表明，采用離心除雜與濾過除雜所產(chǎn)生的沉淀均可搖散，但離心除雜所產(chǎn)生的沉淀物量明品少于濾過除雜所產(chǎn)生的沉淀物量，因此，結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備條件，確定本品的除雜方式采用離心除雜。見表6。

2.4.2 離心除雜工藝參數(shù)的確定 按處方比例稱取飲片1140 g，照前述確定的工藝條件提取、濃縮，濃縮液均分為4份，分別在轉(zhuǎn)速為3000 r·min-1、5000 r·min-1的條件下進行離心，收集上清液，再分別加入芒硝20 g，加熱煮沸并保溫30 min，放冷，每份均加純化水調(diào)整至400 mL，裝入200 mL口服液體藥用高密度聚乙烯瓶中（n=2），放置7 d，觀察藥液沉淀情況并測定藥液總固物含量。結(jié)果表明，2種轉(zhuǎn)速除雜后的樣品在放置7 d后，藥液所產(chǎn)生的沉淀均可搖散。其中轉(zhuǎn)速為5000 r·min-1的除雜效果稍優(yōu)于3000 r·min-1。因此，確定本品離心除雜轉(zhuǎn)數(shù)為5000 r·min-1。見表7。

2.5 成型工藝

2.5.1 防腐劑及其用量的選擇 為了保證制劑的質(zhì)量防止微生物生長繁殖，應(yīng)加適量的防腐劑，本品藥液PH值在4.3左右，因此可以選擇苯甲酸鈉作為防腐劑，并結(jié)合抑菌效力檢查法（《中國藥典》2015年版四部通則1121［6］151）進行用量選擇。

2.5.2 供試品的制備 按處方比例稱取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，加熱至沸并保溫30 min，放冷，加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶，作為供試品-1，備用。另按處方比例稱取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，濾液加入苯甲酸鈉1.5 g（0.15%），加熱至沸并保溫30 min，放冷，加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶中，作為供試品-2，備用。另按處方比例稱取飲片762.5 g，照前述優(yōu)選的工藝條件提取、濃縮、除雜，濾液加入苯甲酸鈉3 g（0.3%），加熱至沸并保溫30 min，放冷，再加入純化水定量至1000 mL，均分為10份，每份罐封于200 mL外用液體藥用高密度聚乙烯瓶中，作為供試品-3，備用。

2.5.3 計數(shù)方法適用性試驗 照抑菌效力檢查法（《中國藥典》2015年版四部通則1121［6］151）項下方法檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3份供試品試驗菌的回收率均不低于70%，表明培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定，見表8。

2.5.4 計數(shù)與結(jié)果 照抑菌效力檢查法（《中國藥典》2015年版四部通則1121［6］151）項下方法檢查，測定樣品的抑菌效力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苯甲酸鈉為制成量的0.3%時，使用劑量及抑菌效力均符合有關(guān)規(guī)定，故確定加入苯甲酸鈉的用量為制成量的0.3%，見表9。

2.6 制備工藝的確定 經(jīng)過上述考察得到，黃榆痔疾洗劑的最佳煎煮工藝為加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h； 濃縮采用減壓或常壓濃縮方式，離心除雜純化轉(zhuǎn)速5000 r·min-1，成型工藝加入0.3%的苯甲酸鈉獲得黃榆痔疾洗劑的最佳制備工藝。制備工藝流程圖和樣品成品圖如圖2和圖3所示。

3 討論

黃榆痔疾外用方由黃柏、苦參和地榆等16味中藥組成。黃柏為君藥，小檗堿和黃柏堿為主要活性成分［7］。小檗堿具有抗炎、抗菌的作用，能促進內(nèi)源性NO釋放，介導腸粘膜微血管內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，改善腸道局部微循環(huán)［8］。本研究使用正交試驗法優(yōu)選黃榆痔疾洗劑的煎煮工藝，結(jié)果表明煎煮次數(shù)對試驗結(jié)果影響明顯，而加水量跟煎煮時間對試驗結(jié)果影響不明顯。王抒等［9］通過對紅花等5種飲片在相同劑量煎煮后取汁與在相同體積煎煮后取汁發(fā)現(xiàn)，在劑量相等、品種不同的藥材中，質(zhì)地疏松容積大的飲片，煎煮后取汁量不一定少，即吸水量不一定大。本次試驗結(jié)果分析原因可能是方中飲片吸水性不大，每次煎煮藥液都能快速達到濃度平衡，故煎煮時間加長和增加加水量對結(jié)果基本沒什么影響。通過測定總固物含量來優(yōu)選純化方式，試驗結(jié)果表明離心純化優(yōu)于濾過除雜，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本研究以小檗堿和總固物含量作為考察指標，該研究方法專屬性好，技術(shù)成熟，結(jié)果可靠，可滿足提取考察工藝的需要。本研究不足之處，中藥復方制劑成分復雜，采用小檗堿作為指標專屬性好，但未對其他成分進行測定，評價指標過于單一，后期仍需對其他成分進行深入研究。

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（收稿日期：2024-02-01 編輯：杜玲玉珊）

基金項目：

作者簡介：潘海華（1986—），男，漢族，本科，主管中藥師，研究方向為中藥制劑工藝研究與質(zhì)量評價。E-mail：306136555@qq.com

通信作者：鄧桂珠（1990—），女，漢族，碩士，主管中藥師，研究方向為中藥質(zhì)量控制研究。E-mail：876456340@qq.com