【摘要】

目的：探究油菜花粉瑪咖咀嚼片的制備工藝及槲皮素和山奈酚含量測定的方法。方法：通過濕法制粒工藝，制備油菜花粉瑪咖咀嚼片；采用高效液相色譜（HPLC）法對油菜花粉瑪咖咀嚼片中槲皮素和山奈酚的含量進行測定，色譜柱為ODS-C18柱，流動相為甲醇-水，進行等度洗脫，體積流量為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃，檢測波長為370 nm，進樣量為5 μL。結果：油菜花粉瑪咖咀嚼片的制備工藝為油菜花粉∶瑪咖提取物粉末∶填充劑=1∶1∶2，填充劑（微晶纖維素：木糖醇：乳糖=6∶4∶3）。所得咀嚼片表面光潔、甜度適中且質量穩(wěn)定可控。槲皮素和山奈酚的線性范圍分別為2.29～45.83 μg/mL、3.75～75 μg/mL，相關系數(shù)（r）分別為0.9996和0.9992；平均加樣回收率分別為99.79%和101.02%，RSD分別為3.33%和2.56%。結論：油菜花粉瑪咖咀嚼片制備工藝穩(wěn)定可行，槲皮素和山奈酚含量測定方法準確可靠，可用于該咀嚼片的質量控制。

【關鍵詞】

油菜花粉瑪咖咀嚼片；HPLC；槲皮素；山奈酚

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）16-0031-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.16.zgmzmjyyzz202416008

Preparation of Rapeseed Pollen Maca Chewable Tablets and Determination of Quercetin and Caempferol Content

HUANG Xiaoqiang1ZHANG Yanwen1GUO Xiaona1RU Guohua1，2YANG Junjie1WANG Li1JIA An1*

1.Medical School， Huanghe Science & Technology College， Zhengzhou 450063， China;

2.College of Pharmacy，Henan University， Kaifeng 475004， China

Abstract：

Objective To establish the preparation process of rape pollen maca chewable tablets and the determination of quercetin and kaempferol contents.Methods Rape pollen maca chewable tablets were prepared by wet granulation process.Determination of quercetin and kaempferol in Rapeseed Pollen Maca Chewable Tablets by High Performance Liquid Chromatography （HPLC），the chromatographic column is an ODS-C18 column， and the mobile phase is methanol water for isocratic elution， with a volume flow rate of 1.0 mL/min， the column temperature is 35 ℃， the detection wavelength is 370 nm， and the injection amount is 5 μL.Results The preparation procedure of rapeseed pollen Maca chewable tablets was as follows： Rape pollen： Maca extract powder： filler ratio is 1∶1∶2， The ratio of microcrystalline cellulose to xylitol to lactose in the filler is 6∶4∶3.Wet granulation and tablet pressing were carried out.The obtained chewable tablets have a smooth surface， moderate sweetness， and stable and controllable quality.A method for the determination of quercetin and kaempferol was established.The linear ranges of quercetin and kaempferol were 2.29-45.83 μg/mL and 3.75-75 μg/mL， respectively， and the correlation coefficients were 0.9996 and 0.9992， respectively.The average recoveries of quercetin and kaempferol were 99.79% and 101.02%， respectively.Conclusion The preparation procedure of rapeseed pollen Maca chewable tablets is stable and feasible.The method for the determination of quercetin and kaempferol is accurate and reliable and can be used for the quality control of the chewable tablets.

Keywords：

Rape Pollen Maca Chewable Tablets; HPLC; Quercetin; Kaempferol

油菜花粉是我國最常見的蜂花粉之一，具有降血脂、抗前列腺增生、提高免疫力、改善記憶等功效［1-2］，目前臨床上主要用于治療慢性前列腺炎及前列腺增生等疾病［3-5］?，斂赜小澳厦廊藚ⅰ钡拿雷u［6-7］，其中瑪咖酰胺、多糖、瑪咖烯、芥子油苷、甾醇、類固醇等成分是瑪咖的主要成分［8］，具有抗疲勞、抗衰老、調節(jié)內分泌系統(tǒng)、改善性功能、提高生育能力、抗前列腺增生等功效［9-11］，雖然兩者均具有治療前列腺相關疾病、提高免疫力和改善性功能等作用，但還沒有關于油菜花粉與瑪咖聯(lián)合應用的報道。咀嚼片不僅具有實用方便、外觀美觀、口感好，而且藥物溶出迅速、吸收快、生物利用度也高，深受消費者的喜愛。基于此，本研究首先利用藥物制劑技術，以油菜花粉和瑪咖為基礎，制備油菜花粉瑪咖咀嚼片；然后，利用HPLC技術測定槲皮素和山奈酚的含量，本研究可為該制劑的制備及其質量控制提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent 1260 Infinity II液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AL204型電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；DZKW-4型水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；KQ‐250DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2材料油菜花粉瑪咖咀嚼片由實驗室自制；槲皮素對照品（批號：B20527-20 mg，純度≥98%）、山柰酚對照品（批號：B21126-20 mg，純度≥98%）均購自上海源葉生物科技有限公司；色譜級磷酸（天津市科密歐化學試劑有限公司）；色譜級甲醇（德國默克公司）；水為超純水；其他均為分析級試劑。

2方法與結果

2.1油菜花粉瑪咖咀嚼片制備取瑪咖原藥材500 g，經(jīng)粗粉后，加入10倍量蒸餾水，浸泡30 min后，加熱回流2次，每次2 h，合并濾液，減壓濃縮后，采用小型噴霧干燥機噴霧干燥，即為瑪咖提取物粉末。油菜花粉瑪咖咀嚼片處方中，油菜花粉采用全組分入藥，處方配比為油菜花粉∶瑪咖提取物粉末∶填充劑=1∶1∶2，填充劑為微晶纖維素∶木糖醇∶乳糖=6∶4∶3。采用濕法制粒制備片劑，以“握之成團，輕捏即散”為標準制備軟材，然后制粒，并置于50 ℃烘箱中干燥、整粒，壓制成片。

2.2色譜條件參考相關文獻［12-15］并修改色譜條件。色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（60∶40）；等度洗脫20 min；檢測波長：370 nm；體積流量：1.0 mL/min；進樣量：5 μL；柱溫：35 ℃。

2.3溶液配制

2.3.1對照品溶液的制備精密稱取適量對照品槲皮素和山奈酚，加入甲醇溶解制成質量濃度為45.83 μg/mL和75 μg/mL溶液，搖勻，備用。

2.3.2供試品溶液的制備精密稱取油菜花粉瑪咖咀嚼片粉末1 g，置于100 mL圓底燒瓶中，加入25 mL甲醇和5 mL 25%的鹽酸溶液，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再次稱重，并補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4方法學考察

2.4.1系統(tǒng)適用性試驗取混合對照品和供試品溶液，按照“2.1”色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，結果如圖1。由圖2可知，在該色譜條件下槲皮素和山奈酚的分離度均大于1.5，表明該方法系統(tǒng)適用性良好。

2.4.2線性關系考察取“2.2.1”項下混合對照品溶液，逐級稀釋，槲皮素質量濃度分別為45.83 μg/mL、22.92 μg/mL、9.17 μg/mL、4.58 μg/mL、2.29 μg/mL，山奈酚質量濃度分別為75.00 μg/mL、37.50 μg/mL、15.00 μg/mL、7.50 μg/mL、3.75 μg/mL，按照“2.1”色譜條件依次進樣分析，記錄各色譜峰峰面積。以對照品質量濃度（μg/mL）為橫坐標（X），峰面積（mAU）為縱坐標（Y），繪制線性回歸方程，結果如圖2所示，槲皮素和山奈酚的線性回歸方程分別：Y=20.562X-6.853、Y=16.638X-10.411，r=0.9996、0.9992，表明槲皮素和山奈酚分別在2.29～45.83 μg/mL、3.75～75.00 μg/mL濃度范圍內其濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.3精密度試驗取“2.2.1”項下混合對照品溶液，按照“2.1”色譜條件連續(xù)進樣6次，每次進樣5 μL，記錄色譜峰面積，計算槲皮素和山奈酚色譜峰峰面積的RSD分別為1.66%、0.87%，表明該儀器的精密度良好。

2.4.4穩(wěn)定性試驗取“2.3.2”項下供試品溶液，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h在“2.1”色譜條件下進樣分析，記錄各色譜峰峰面積，計算槲皮素和山奈酚色譜峰峰面積RSD分別為0.89%、0.91%，表明供試品溶液在12 h內的穩(wěn)定性良好。

2.4.5重復性試驗取同一批油菜花粉瑪咖咀嚼片粉末，6份，每份約1 g，精密稱定，按“2.2.2”方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件進樣分析，記錄各色譜峰峰面積，計算結果顯示，槲皮素和山奈酚的平均含量分別為0.1421 mg/g、0.5480 mg/g，RSD值分別為2.88%、2.47%，表明方法重復性良好。

2.4.6加樣回收率試驗取已知含量的油菜花粉瑪咖咀嚼片粉末6份，每份約0.5 g，精密稱定。分別精密加入等量的對照品，按照“2.2.2”方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件進樣分析，記錄各色譜峰峰面積，計算得出槲皮素和山奈酚的均回收率分別為98.97%、99.90%。結果見表1。

2.5樣品的含量測定取3個批次油菜花粉瑪咖咀嚼片樣品粉末，按“2.3.2”方法制備供試品溶液，在“2.2”色譜條件進樣分析，記錄各色譜峰峰面積，計算含量，結果見表2。由表2可知，在油菜花粉瑪咖咀嚼片中山奈酚的含量最高，含量為0.5510 mg/g，槲皮素的含量為0.1465 mg/g。

3討論

3.1提取方法的選擇本研究考察了超聲波提取法和回流提取法2種不同的提取方式，結果發(fā)現(xiàn)熱回流提取法供試品色譜峰較多，提取效果更好；在溶劑選擇方面，考察了甲醇和25%鹽酸甲醇2種溶液，結果發(fā)現(xiàn)25%鹽酸甲醇作為提取溶劑時，槲皮素和山奈酚色譜峰面積更大，提取更加充分，其原因在于鹽酸能夠破壞油菜花粉細胞壁，促使細胞內的成分溶出，提取更加充分［16］。故本研究采用回流提取方式，以25%鹽酸甲醇為提取溶劑。

3.2色譜條件的選擇本研究考察了乙腈-水和甲醇-水兩種流動相分別進行等度洗脫，結果發(fā)現(xiàn)當選擇甲醇-水作為流動相時槲皮素和山奈酚色譜峰分離效果較好，滿足分析要求；然后又考察了進樣量，分別考察了5 μL、10 μL、15 μL 3種進樣量，結果發(fā)現(xiàn)隨著進樣量的增大，色譜峰的峰面積也增大，但5 μL的進樣量時色譜峰型更好，因此選擇5 μL進樣量。體積流量的選擇上，考察了0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min 3種流速，結果發(fā)現(xiàn)流速為1.0 mL/min時，槲皮素和山奈酚的色譜峰分離度與峰型較好，故選擇1.0 mL/min作為流動相的洗脫流速。

3.3指標成分的選擇根據(jù)中藥及其制劑分析中含量測定指標選擇的原則，含量測定指標成分應確保藥材及其制劑的安全性、有效性和專屬性，研究首選有效成分作為含量測定指標成分。本研究，選擇槲皮素和山奈酚作為測定指標成分，槲皮素是一種具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤和保護心血管等作用的天然黃酮類成分［17］，山奈酚也是一種天然的黃酮類成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎和抗抑郁等作用［18］。通過文獻研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素和山奈酚是油菜花粉的主要成分［12-15］，槲皮素也是瑪咖的主要成分之一［15］。故選擇槲皮素和山奈酚作為含量測定指標成分。

3.4檢測波長的選擇槲皮素和山奈酚的紫外最大吸收波長均在370 nm和265 nm附近，通過對比各色譜峰發(fā)現(xiàn)選擇370 nm時，樣品色譜峰雜峰較少，從而減少其他成分對檢測成分的干擾，專屬性更強。故選擇370 nm處作為檢測波長。

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（收稿日期：2023-11-22編輯：陶希睿）