摘 要：近些年，江西桃紅嶺梅花鹿國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)植被正向演替明顯，大量梅花鹿（Cervus nippon）開始向保護(hù)區(qū)外圍擴(kuò)散和聚集，調(diào)查桃紅嶺梅花鹿?jié)撛诓≡瓟y帶情況，有利于掌握其種群健康狀況，進(jìn)而制定精確的保護(hù)管理對(duì)策，因此在該保護(hù)區(qū)不同區(qū)域（核心區(qū)、緩沖區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)）采集梅花鹿新鮮糞便樣品，并基于宏基因組測(cè)序技術(shù)分析其病原攜帶情況。結(jié)果表明：桃紅嶺梅花鹿攜帶病原微生物包括細(xì)菌、真菌、放線菌、支原體、衣原體和螺旋體，共34屬63種，其中包含大量人獸共患病病原；病原豐度最高的5個(gè)屬分別是擬梭菌屬（Clostridioides）、李斯特菌屬（Listeria）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、志賀氏菌屬（Shigella）和沙門氏菌屬（Salmonella），豐度最高的5個(gè)種分別是艱難擬梭菌（Clostridioides difficile）、單核增生李斯特氏菌（Listeria mono?cytogenes）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）、腸炎沙門氏菌（Salmonella enter?itidis）和福氏志賀氏菌（Shigella flexneri）；不同研究區(qū)域中，核心區(qū)梅花鹿攜帶病原數(shù)量顯著低于緩沖區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)。以上結(jié)果表明，桃紅嶺梅花鹿攜帶有多種病原，存在一定疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。建議在保護(hù)區(qū)核心區(qū)積極開展棲息地矮化工作，同時(shí)開展高危病原的持續(xù)性監(jiān)測(cè)及預(yù)警，并加強(qiáng)對(duì)保護(hù)區(qū)外圍擴(kuò)散梅花鹿種群的保護(hù)管理。

關(guān)鍵詞：梅花鹿；江西桃紅嶺梅花鹿國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)；宏基因組測(cè)序；病原微生物

中圖分類號(hào)：Q933

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 03 - 0504 - 09

DOI：10.12375/ysdwxb.20240306

疫病是影響野生動(dòng)物種群生存與發(fā)展的重要因素。我國野生動(dòng)物疫病種類眾多，包含病毒、細(xì)菌和寄生蟲等諸多類群，對(duì)珍稀瀕危野生動(dòng)物保護(hù)、禽畜養(yǎng)殖及人類健康等均構(gòu)成了重大威脅［1?2］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，野生動(dòng)物疾病多達(dá)幾百種，其中人獸共患病有200余種［3］，約占人類新發(fā)疾病的60. 3%［4］。氣候變化和人類活動(dòng)是導(dǎo)致野生動(dòng)物疫病頻發(fā)的最主要驅(qū)動(dòng)因素，氣候變化改變了病原微生物、野生動(dòng)物的分布區(qū)域和棲息環(huán)境，為野生動(dòng)物疫病暴發(fā)和流行創(chuàng)造了條件，而人類活動(dòng)則加大了疫病暴發(fā)和流行的風(fēng)險(xiǎn)［5?6］。由于珍稀瀕危野生動(dòng)物的棲息地不斷喪失和人類活動(dòng)的不斷加劇，一些疫病在人類、畜禽和野生動(dòng)物間傳播擴(kuò)散，使珍稀瀕危野生動(dòng)物種群的保護(hù)面臨巨大挑戰(zhàn)［7］。因此，對(duì)珍稀瀕危野生動(dòng)物種群的病原攜帶狀況進(jìn)行研究，對(duì)于評(píng)估目標(biāo)種群的健康狀況，以及制定精確的保護(hù)管理對(duì)策十分重要。

梅花鹿（Cervus nippon）隸屬于鯨偶蹄目（Cetartiodactyla）鹿科（Cervidae）鹿屬（Cervus），是東亞季風(fēng)區(qū)特產(chǎn)鹿類，國際瀕危物種，我國一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物［8］。歷史上，梅花鹿曾廣泛分布于亞洲東北部，我國曾分布有6 個(gè)亞種，目前僅存東北亞種（C. n.hortulorum）、四川亞種（C. n. sichuanicus）和華東亞種（C. n. kopschi）3個(gè)亞種的野外種群［8?9］。華東梅花鹿主要分布在江西東北部、浙江西北部和安徽南部，為保護(hù)瀕危的華東梅花鹿種群，江西省和浙江省分別建立了以華東梅花鹿為重點(diǎn)保護(hù)對(duì)象的國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)［10］。近年來，由于江西桃紅嶺梅花鹿國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)實(shí)行嚴(yán)格的封山育林政策，導(dǎo)致保護(hù)區(qū)內(nèi)植被正向演替明顯，梅花鹿棲息空間受到擠壓，大量梅花鹿開始向保護(hù)區(qū)外圍擴(kuò)散，其種群遭受人為干擾強(qiáng)度和疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均顯著增加，而當(dāng)前對(duì)桃紅嶺梅花鹿種群的疫源疫病狀況研究較少。

傳統(tǒng)動(dòng)物病原檢測(cè)方法比較繁瑣，且單次檢測(cè)樣品數(shù)量有限，隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，高通量測(cè)序在環(huán)境微生物檢測(cè)方面的應(yīng)用為動(dòng)物病原檢測(cè)提供了新的方法和手段［11?12］。宏基因組指特定環(huán)境條件下所有生物遺傳物質(zhì)的總和［13］。基于二代測(cè)序技術(shù)的宏基因組測(cè)序可直接提取環(huán)境中微生物的總DNA進(jìn)行測(cè)序分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)特定環(huán)境中所有微生物種類及數(shù)量的精確鑒定［14?15］。本研究采用宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)江西桃紅嶺梅花鹿種群的病原攜帶狀況進(jìn)行檢測(cè)分析，通過分析不同區(qū)域梅花鹿群體的潛在病原攜帶狀況，較系統(tǒng)地評(píng)價(jià)人為活動(dòng)及潛在疫病對(duì)桃紅嶺梅花鹿種群的影響，從而為江西桃紅嶺梅花鹿種群的保護(hù)管理和疫源疫病防控提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1. 1 樣品采集

2022年7月，在江西桃紅嶺梅花鹿國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)（以下簡(jiǎn)稱“桃紅嶺保護(hù)區(qū)”）的核心區(qū)、緩沖區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)分別采集梅花鹿新鮮糞便樣品25份，共計(jì)采集樣品75份。采集過程均佩戴一次性無菌手套，為避免樣品交叉污染，每采集一份樣品更換一次手套。采集的糞便樣品儲(chǔ)存于無菌無核酸酶的50 mL離心管中，然后用手提冰箱低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，于超低溫冰箱中-80 ℃保存。

1. 2 糞便樣品DNA 提取及宏基因組測(cè)序

將糞便樣品用液氮進(jìn)行充分研磨，使用TaKaRaMiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit試劑盒提取糞便樣品總DNA，提取的DNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性和純度，對(duì)不合格的DNA樣品進(jìn)行重新提取檢測(cè)，直至符合要求。將每個(gè)研究區(qū)域的25份樣品按DNA濃度1∶1∶1∶1∶1的比例進(jìn)行5 合1 混樣，即每個(gè)研究區(qū)域最終獲得5 組混合DNA樣品（實(shí)驗(yàn)區(qū)，A1～A5；緩沖區(qū)，B1～B5；核心區(qū)，C1～C5），共15組。最后對(duì)混合DNA樣品進(jìn)行建庫及測(cè)序，每個(gè)樣品測(cè)序數(shù)據(jù)量為6 Gb，宏基因組測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1. 3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

將測(cè)序的原始數(shù)據(jù)通過Fastp進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估和數(shù)據(jù)過濾，使用megahit 和SPAdes 拼接組裝，采用Prodigal對(duì)拼接結(jié)果進(jìn)行ORF預(yù)測(cè)?；诟鳂悠返幕蝾A(yù)測(cè)結(jié)果，采用CD-HIT軟件去冗余，獲得非冗余基因集，然后將基因集與NR、PHI-base等數(shù)據(jù)庫比對(duì)，獲得基因的物種注釋信息，并根據(jù)基因集豐度得到物種豐度。應(yīng)用R軟件進(jìn)行主成分分析（principalcomponents analysis，PCA）和置換多元方差分析（PERMANOVA）。使用SPSS v24. 0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，plt;0. 05為差異顯著。使用OriginPro軟件作圖。

2 結(jié)果

2. 1 宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)

宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)過濾后，15組樣品共得到101 021. 286 3 Mb的有效數(shù)據(jù)，包括6. 57×108個(gè)reads。樣品平均序列長(zhǎng)度為148～150 bp，質(zhì)量在Q20以上的堿基占95. 92%～97. 89%，質(zhì)量在Q30以上的堿基占90. 45%～93. 67%，樣品文庫覆蓋率為93. 00%～99. 00%（表1）。以上數(shù)據(jù)表明，本次宏基因組測(cè)序結(jié)果能夠代表樣品的真實(shí)情況，具有較高的可靠性。

2. 2 桃紅嶺梅花鹿腸道微生物組成

獲得的15組梅花鹿糞便樣品宏基因組數(shù)據(jù)共鑒定出微生物4界53門70綱165目389科1 349屬8 382種。在界水平上，15組樣品中細(xì)菌占比均最高，相對(duì)豐度為95. 04%～99. 80%（圖1A）。在門水平上，桃紅嶺梅花鹿腸道優(yōu)勢(shì)菌門為厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、放線菌門（Actinobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）和廣古菌門（Euryarchaeota）（圖1B）。

2. 3 桃紅嶺梅花鹿?jié)撛诓≡⑸锝M成

通過將宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)與PHI-base 數(shù)據(jù)庫（http：//www. phi-base. org/）比對(duì)得到病原物種信息，在剔除掉植物和昆蟲病原后，共鑒定出桃紅嶺梅花鹿?jié)撛诓≡⑸? 界9 門14 綱23 目27 科34 屬63種。本研究選取屬、種兩個(gè)層級(jí)的數(shù)據(jù)對(duì)不同樣品的病原微生物組成進(jìn)行分析。

在屬、種兩個(gè)水平上，15組樣品間的病原微生物組成均存在較大差異（圖2A、B）。對(duì)不同區(qū)域樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析表明，在屬水平上，實(shí)驗(yàn)區(qū)樣品豐度排名前5的病原分別是志賀氏菌屬（Shigella）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、沙門氏菌屬（Salmonella）、李斯特菌屬（Listeria）和擬梭菌屬（Clostridioides）；緩沖區(qū)樣品豐度排名前5的分別是擬梭菌屬、李斯特菌屬、衣原體（Chlamydia）、弧菌屬（Vibrio）和克雷伯氏菌屬；核心區(qū)樣品豐度排名前5的分別是擬梭菌屬、李斯特菌屬、克雷伯氏菌屬、弧菌屬和志賀氏菌屬（圖2C）。在種水平上，實(shí)驗(yàn)區(qū)樣品豐度排名前5的病原分別是腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）、單核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、艱難擬梭菌（Clostridi?oides difficile）和福氏志賀氏菌（Shigella flexneri）；緩沖區(qū)樣品豐度排名前5的分別是艱難擬梭菌、單核增生李斯特氏菌、沙眼衣原體（Chlamydia trachoma?tis）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）和肺炎克雷伯氏菌；核心區(qū)樣品豐度排名前5的分別是艱難擬梭菌、單核增生李斯特氏菌、肺炎克雷伯氏菌、副溶血弧菌和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（圖2D）。3個(gè)研究區(qū)域在屬水平上共有的病原是克雷伯氏菌屬、李斯特菌屬和擬梭菌屬，在種水平上共有的病原是肺炎克雷伯氏菌、單核增生李斯特氏菌和艱難擬梭菌。將15組樣品進(jìn)行統(tǒng)一分析，結(jié)果表明，桃紅嶺梅花鹿攜帶病原豐度在屬水平上排名前5的分別是擬梭菌屬、李斯特菌屬、克雷伯氏菌屬、志賀氏菌屬和沙門氏菌屬（圖2E），在種水平上排名前5的分別是艱難擬梭菌、單核增生李斯特氏菌、肺炎克雷伯氏菌、腸炎沙門氏菌和福氏志賀氏菌（圖2F）。

2. 4 不同研究區(qū)域病原微生物多樣性

15組樣品共檢測(cè)出病原34屬63種，其中實(shí)驗(yàn)區(qū)29 屬54 種，緩沖區(qū)28 屬55 種，核心區(qū)25 屬40 種。在屬水平上，3個(gè)研究區(qū)域病原數(shù)量沒有顯著差異，在種水平上，核心區(qū)病原數(shù)量顯著低于實(shí)驗(yàn)區(qū)和緩沖區(qū)（圖3A）。此外，在屬水平上，3個(gè)研究區(qū)域共有的病原為21個(gè)，實(shí)驗(yàn)區(qū)、緩沖區(qū)和核心區(qū)獨(dú)有病原分別為2、1、4個(gè)，實(shí)驗(yàn)區(qū)和緩沖區(qū)共有的病原為6個(gè)（圖3B）；在種水平上，3個(gè)研究區(qū)域共有的病原為35個(gè)，實(shí)驗(yàn)區(qū)、緩沖區(qū)和核心區(qū)獨(dú)有病原分別為3、4、5個(gè)，實(shí)驗(yàn)區(qū)和緩沖區(qū)共有的病原為16 個(gè)（圖3C）。對(duì)3個(gè)研究區(qū)域的病原微生物種類進(jìn)行PCA分析，在屬、種兩個(gè)水平上，3個(gè)研究區(qū)域樣品在PCA圖中均大范圍重疊，表明3個(gè)研究區(qū)域的病原微生物多樣性較為相似（圖3D、E）。PERMANOVA分析也表明，在屬和種水平上，3個(gè)研究區(qū)域的病原微生物多樣性均沒有顯著性差異。上述結(jié)論表明，桃紅嶺保護(hù)區(qū)核心區(qū)梅花鹿攜帶病原數(shù)量顯著低于實(shí)驗(yàn)區(qū)和緩沖區(qū)，但不同區(qū)域梅花鹿攜帶病原種類具有較高的相似性。

2. 5 不同研究區(qū)域病原微生物分類

對(duì)15組樣品檢出的病原進(jìn)行分類。桃紅嶺梅花鹿攜帶病原微生物主要可分為細(xì)菌、真菌、放線菌、衣原體、支原體和螺旋體。在屬、種兩個(gè)水平上，3 個(gè)研究區(qū)域中細(xì)菌的占比均最高（78. 85%～85. 48%），支原體的占比均最低（0～2. 73%），表明細(xì)菌是桃紅嶺梅花鹿攜帶的主要病原微生物（圖4A、B）。此外，對(duì)檢出的63種病原進(jìn)行分析表明，63種病原中有27種為人獸共患病病原，占比為42. 86%。

2. 6 不同研究區(qū)域梅花鹿病原的差異

在63種檢出病原中，已報(bào)道可造成鹿科動(dòng)物感染的病原有肺炎克雷伯氏菌、腸炎沙門氏菌、單核增生李斯特氏菌和多殺巴斯德氏菌（Pasteurella multo?cida）。這4種病原在3個(gè)研究區(qū)域中均被檢出，對(duì)比其在不同研究區(qū)域的平均相對(duì)豐度表明，除核心區(qū)腸炎沙門氏菌豐度顯著低于實(shí)驗(yàn)區(qū)外，其余病原豐度均沒有顯著差異（圖5）。

3 討論

本研究從桃紅嶺梅花鹿糞便樣品中共檢測(cè)出潛在病原34屬63種，可分為細(xì)菌、真菌、放線菌、衣原體、支原體和螺旋體，其中，細(xì)菌占比最高。在種水平上，相對(duì)豐度較高的病原主要有艱難擬梭菌、單核增生李斯特氏菌、肺炎克雷伯氏菌、腸炎沙門氏菌和福氏志賀氏菌，這5種病原均為重要的人畜共患病致病菌［16］。肺炎克雷伯氏菌為寄生于腸道或呼吸道的條件致病菌，是引起人與動(dòng)物肺部感染的主要病原之一［17?18］；艱難擬梭菌可在人與多種動(dòng)物體內(nèi)定殖，造成感染性腹瀉［19］；而單核增生李斯特氏菌、腸炎沙門氏菌和福氏志賀氏菌均是重要的食源性致病菌，可引起人、家畜及野生動(dòng)物流產(chǎn)、腦膜炎、腸胃炎、敗血癥和死胎等多種病癥［20?22］。由于歷史遺留問題，桃紅嶺保護(hù)區(qū)外圍實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)分布多個(gè)村莊和大量農(nóng)田，近些年向?qū)嶒?yàn)區(qū)擴(kuò)散的梅花鹿種群經(jīng)常在農(nóng)田采食農(nóng)作物，與人畜接觸較為頻繁，其活動(dòng)區(qū)域與當(dāng)?shù)卮迕穹硼B(yǎng)的家畜活動(dòng)區(qū)域高度重疊［23］。因此，同域放養(yǎng)的家畜可能是梅花鹿攜帶病原的重要來源。此外，人獸共患病病原在桃紅嶺梅花鹿檢出病原中的高占比（42. 86%）也表明，這些病原在梅花鹿、家畜、人中存在較高的傳播擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)。

PCA和PERMANOVA分析表明，桃紅嶺保護(hù)區(qū)不同區(qū)域梅花鹿攜帶病原種類沒有顯著性差異，并且在相對(duì)豐度排名靠前的病原中，不同研究區(qū)域間僅有個(gè)別病原的相對(duì)豐度存在差異。在野生動(dòng)物中，類似的腸道微生物分布特征只在同域個(gè)體中比較常見［24?25］。這說明桃紅嶺保護(hù)區(qū)不同區(qū)域梅花鹿個(gè)體間的交流較為頻繁，所以病原微生物在不同區(qū)域個(gè)體間的分布較為相似。另一方面，桃紅嶺梅花鹿攜帶病原的數(shù)量從實(shí)驗(yàn)區(qū)到核心區(qū)呈現(xiàn)依次遞減的趨勢(shì)，特別是在種水平上，核心區(qū)梅花鹿攜帶病原數(shù)量顯著低于緩沖區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)，即越接近人類活動(dòng)的區(qū)域，梅花鹿攜帶病原數(shù)量越多。該結(jié)果表明人類活動(dòng)可能是影響桃紅嶺梅花鹿病原攜帶水平的重要因素。

經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)本研究檢出的63種病原可直接感染鹿科動(dòng)物的有肺炎克雷伯氏菌、腸炎沙門氏菌、單核增生李斯特氏菌和多殺巴斯德氏菌［17，26?29］，其中，肺炎克雷伯氏菌是造成動(dòng)物園和飼養(yǎng)梅花鹿個(gè)體肺部感染及死亡的主要病原［17?18］；腸炎沙門氏菌主要侵染鹿類腸道，在規(guī)?；拿坊购婉R鹿（Cervus elaphus）養(yǎng)殖場(chǎng)中，腸炎沙門氏菌可與巴氏桿菌（Pasteurella）、魏氏梭菌（Clostridiumwelchii）等病原混合感染導(dǎo)致鹿類死亡［26?27］；單核增生李斯特氏菌主要感染免疫力低下的個(gè)體，造成野生麋鹿（Elaphurus davidianus）及白尾鹿（Odocoileusvirginianus）的幼鹿死亡［28］；多殺巴斯德氏菌則會(huì)引起梅花鹿的腸毒血癥，該病發(fā)病急，病死率高，常給梅花鹿養(yǎng)殖場(chǎng)造成重大經(jīng)濟(jì)損失［29］。上述4種病原在本次研究的不同區(qū)域中均有被檢出，除腸炎沙門氏菌外，其他病原的相對(duì)豐度在不同研究區(qū)域中均沒有顯著差異。因此，在對(duì)桃紅嶺梅花鹿的疫源疫病監(jiān)測(cè)中，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)這幾種病原的單獨(dú)監(jiān)測(cè)及預(yù)警，以防止相關(guān)疫病暴發(fā)導(dǎo)致梅花鹿大量死亡。此外，除上述已知的4種梅花鹿病原外，金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、巴爾通氏體（Bartonella）、彎曲桿菌（Cam?pylobacter）和耶爾森氏菌（Yersinia）等致病菌也是鹿科動(dòng)物普遍攜帶的病原［30?34］。雖然目前沒有研究表明這些病原可直接感染梅花鹿，但依據(jù)其致病特性，依然認(rèn)為它們是影響梅花鹿種群健康的潛在威脅，因此在對(duì)桃紅嶺梅花鹿種群的保護(hù)管理中也應(yīng)引起重視。本研究通過與PHI-base數(shù)據(jù)庫比對(duì)來鑒定桃紅嶺梅花鹿攜帶的潛在病原，雖然PHI-base數(shù)據(jù)庫目前主要收錄能感染動(dòng)物、植物、真菌和昆蟲等宿主的病原體致病基因、毒力基因等信息，且已經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，但在稀有及未知病原的鑒定上還存在欠缺。因此，后續(xù)對(duì)病原數(shù)據(jù)庫的補(bǔ)充完善及對(duì)宏基因組數(shù)據(jù)的深入挖掘，可能會(huì)給桃紅嶺梅花鹿病原調(diào)查的結(jié)論帶來新的見解。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，桃紅嶺梅花鹿攜帶有多種病原，其中大部分為人獸共患病病原，且核心區(qū)梅花鹿攜帶病原顯著低于緩沖區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)。同時(shí)，人類活動(dòng)可能是影響桃紅嶺梅花鹿病原攜帶水平的重要因素。針對(duì)桃紅嶺梅花鹿種群的保護(hù)與管理，筆者建議：首先，在保護(hù)區(qū)核心區(qū)內(nèi)積極推進(jìn)棲息地矮化工作，擴(kuò)大和改善梅花鹿適宜棲息地的面積和質(zhì)量，避免桃紅嶺梅花鹿進(jìn)一步向保護(hù)區(qū)外圍擴(kuò)散；其次，對(duì)桃紅嶺梅花鹿關(guān)鍵高危病原開展持續(xù)性監(jiān)測(cè)，并做好疫病預(yù)警，必要時(shí)采取人工干預(yù)措施防止疫病傳播擴(kuò)散；最后，加強(qiáng)對(duì)保護(hù)區(qū)外圍擴(kuò)散梅花鹿種群的管理，減少梅花鹿與人畜接觸的機(jī)會(huì)，并對(duì)當(dāng)?shù)卮迕襁M(jìn)行保護(hù)宣傳，提高村民的保護(hù)意識(shí)。

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