摘要： 【目的】提高松茸粗多糖提取率，探究松茸多糖純化組分及抗氧化作用。【方法】采用超聲波輔助水提醇沉法提取松茸粗多糖，優(yōu)化提取工藝，使用DEAE-Sepharose Fast Flow 離子柱分離純化粗多糖，采用離子色譜法分析單糖成分，并測定體外抗氧化活性。【結(jié)果】最優(yōu)提取工藝參數(shù)為：浸提時間2.25 h，料液比1∶31（g∶mL），浸提溫度83.50 ℃，該條件下多糖提取率為8.67%。松茸粗多糖經(jīng)分離純化后收集到3 種多糖組分（TMP-1、TMP-2、TMP-3），主要由巖藻糖、鹽酸氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，其中TMP-1 存在鼠李糖，TMP-2 和TMP-3 存在葡萄糖醛酸。松茸粗多糖和3 種純化多糖組分均具有一定的抗氧化活性且存在量效關(guān)系，抗氧化能力強弱為：松茸粗多糖gt;TMP-2gt;TMP-3gt;TMP-1?！窘Y(jié)論】松茸多糖有一定的抗氧化活性，且松茸粗多糖效果最好，分離純化后的多糖組分抗氧化活性有所降低。本研究為松茸多糖的開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)，對其功能食品研發(fā)具有重要意義。

關(guān)鍵詞： 松茸多糖；提取工藝；分離純化；單糖組成；抗氧化活性

中圖分類號： S646.150.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號： 1004–390X （2024） 02?0108?11

松茸[Tricholoma matsutake （S.Ito et lmai） Sing]又稱松口蘑、松簟等，屬擔(dān)子菌門（Basidiomycete）傘菌目（Agaricales） 口蘑科（Tricholomataceae）口蘑屬（Tricholoma） 大型真菌[1]，在中國主要分布于吉林、四川、云南、西藏等地。松茸是世界上最珍貴的大型真菌之一，具有獨特的風(fēng)味和藥理學(xué)特性[2]。其含有多種營養(yǎng)物質(zhì)，如多糖、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素、低脂肪等，具有抗氧化、治療糖尿病、抗癌等功效[3]。多糖是松茸的主要活性成分，也是目前研究最多的組分。臨床研究證明：松茸提取物（多糖） 具有美白、抗腫瘤、提高免疫力、抗病毒活性、抗炎、降血糖等作用[4]，在保健食品和醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)前景。目前，有關(guān)松茸多糖的研究多集中于松茸粗多糖或提取分離的部分多糖，如：YIN 等[5]比較了熱水提取法、酶輔助提取法、超聲波清洗器提取法、靜態(tài)探針超聲波提取法和連續(xù)相微萃取法提取松茸多糖的差異；陳煉紅等[6]采用復(fù)合酶法從松茸中提取了多糖；吳楊洋等[7]對比了熱水浸提、超聲提取、酶提取和微波提取法的松茸多糖提取率。但是，對于松茸多糖分離純化后各組分單糖組成及結(jié)構(gòu)、生物活性及其結(jié)構(gòu)作用機制之間的關(guān)系尚不清楚。不同來源的松茸多糖結(jié)構(gòu)可能存在差異，阻礙了松茸多糖的充分利用[8]?；诖耍狙芯坎捎贸暡ㄝo助水提醇沉法提取松茸多糖，利用響應(yīng)曲面試驗優(yōu)化其提取工藝；對多糖進行分離純化，對純化后的組分進行單糖組成研究；測定松茸多糖對DPPH 自由基和ABTS 自由基的清除率、金屬螯合離子能力以及還原能力，以評價其抗氧化活性。研究結(jié)果將為松茸多糖的進一步開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

松茸購自易門縣山里香食品有限公司（產(chǎn)自云南省玉溪市易門縣）；2，2′-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸） 二銨鹽（ABTS）、1-1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH） 購自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；抗壞血酸（Vc）、乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA-2Na） 購自上海源葉生物科技有限公司；16 種單糖標(biāo)準(zhǔn)品（巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、鹽酸氨基葡萄糖、N-乙酰-D 氨基葡萄糖、古羅糖醛酸、甘露糖醛酸） 購自上海博睿糖生物技術(shù)有限公司。以上試劑均為分析純。

1.2 主要儀器與設(shè)備

A360 紫外分光光度計（上海美普達(dá)儀器有限公司）；LGJ-10N 真空冷凍干燥機（北京亞星儀科發(fā)展有限公司）；H2-16RK 臺式高速離心機（湖南可成儀器設(shè)備有限公司）；SCQ-9201B 超聲波清洗器（上海聲彥超聲儀器有限公司）；ICS5000 離子色譜儀（美國ThermoFisher 公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 松茸粗多糖提取

準(zhǔn)確稱取松茸粉末5 g （精確至0.001） 于燒杯中，以超純水為提取溶劑，溶解后放入超聲波提取儀（功率600 W，頻率40 kHz） 超聲20 min，之后按照一定浸提時間、料液比和浸提溫度進行提?。灰? 500 r/min 離心20 min，收集上清液，濾渣復(fù)提2 次，合并上清液；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1/4 體積，加入上清液體積3 倍的無水乙醇，醇沉（4 ℃，24 h）；靜置24 h 后，以4 000 r/min 離心15 min，沉淀物加入超純水復(fù)溶，以6 500 r/min 離心20 min；冷凍干燥后置于?80 ℃ 保存，得到松茸粗多糖。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)，采用苯酚—硫酸法測定松茸粗多糖的含量，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算松茸粗多糖提取率。松茸粗多糖提取率=松茸粗多糖質(zhì)量/松茸預(yù)處理干粉質(zhì)量×100%。