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日喀則市拉孜縣拉孜鎮(zhèn)農(nóng)牧綜合服務(wù)中心,西藏 拉孜 858100

0 引言

口蹄疫作為一種極具破壞性的動物傳染病,在全球范圍內(nèi)對畜牧業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和健康威脅。這種疾病的突然暴發(fā)常導(dǎo)致牲畜生病甚至死亡,同時使畜牧業(yè)的生產(chǎn)受到極大的威脅。在過去的幾十年里,口蹄疫的防控一直是畜牧業(yè)的一項(xiàng)重要工作,該病毒高度變異且傳播速度快,對不同種類的牲畜都具有感染性。因此,高效、準(zhǔn)確的診斷方法和針對性的預(yù)防措施成為控制該疾病傳播的關(guān)鍵。

1 病原

口蹄疫病毒是小核糖核酸病毒科中口瘡病毒屬的一種,有著較多的血清型和亞型,主要的血清型包括O、A、C、亞洲I、南非Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等,這些血清型之間存在差異,影響著病毒的傳播和感染特性?？谔阋卟《緦Νh(huán)境條件的敏感性較高,尤其是對酸、堿有著十分敏感的反應(yīng),常溫環(huán)境下,酸堿值達(dá)到3時,病毒感染力消失,酸堿值在5.5時,約90%以上的病毒會在60 s內(nèi)被殺死,此外,氫氧化鈉也有滅活病毒的效果。溫度方面,在-70～-50 ℃下,病毒可存活數(shù)年,但在85 ℃下,病毒滅活時間僅需60 s。

2 流行特征

牛口蹄疫在自然環(huán)境中可影響很多偶蹄動物,但主要是黃牛、奶牛、水牛、等?？祁悇游?牛類在自然感染口蹄疫病毒后,能長期攜帶病毒并排泄,病毒主要在病牛的食道、咽部寄居,一般牛攜帶病毒可達(dá)180～270 d,非洲野牛攜帶病毒的時間最長,為5年以上,帶毒的牛在圈養(yǎng)環(huán)境下成為病毒的傳播體。?？谔阋卟《緜鞑シ绞捷^為多樣,如唾液、乳汁、排泄物等,此外,病牛的皮、毛、內(nèi)臟也會散播病毒。傳播途徑主要是直接接觸、飲水傳播,各種受病牛污染的物品,均能成為病毒傳播的媒介。疫源地主要為被病牛污染的圈舍、草地、水源等。病毒通常在冬、春季流行,但隨著畜牧產(chǎn)品流通區(qū)域逐步擴(kuò)大,牛口蹄疫發(fā)病流行逐步擺脫了季節(jié)性規(guī)律。

3 牛口蹄疫的診斷方法

3.1 臨床觀察

口蹄疫的潛伏期在感染后長達(dá)2～3 d,甚至可延伸至7～21 d。在這段時間內(nèi),動物可能并無明顯癥狀。隨著病毒的侵襲,病癥逐漸顯現(xiàn),臨床觀察表明,感染口蹄疫病毒后的患牛會出現(xiàn)體溫升高、流涎增多的明顯特征,病牛的口腔、蹄部會有水泡出現(xiàn),在經(jīng)歷破裂和糜爛后會逐步愈合,并伴有明顯疼痛。最明顯的癥狀是在口腔、鼻部、舌頭、乳房和蹄部出現(xiàn)水泡,這些水泡在12～36 h后會破裂,形成鮮紅色的糜爛面。伴隨著這些癥狀,患病動物會出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振、脈搏和呼吸加速的情況,流涎也常呈現(xiàn)泡沫狀,嚴(yán)重者可能導(dǎo)致蹄殼的脫落。年齡較小的動物,例如犢牛就面臨著心肌炎感染的風(fēng)險(xiǎn),犢牛在剖檢的時候,心肌位置會出現(xiàn)明顯的特征性變化,主要表現(xiàn)為淡黃色帶狀條紋,形似虎皮紋理,這種現(xiàn)象被獸醫(yī)叫做“虎斑心”。此外,個別的患牛會出現(xiàn)乳房炎,孕期牛會出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀,感染此病后,成年牛的死亡率為1%～3%,但幼仔牛由于心肌炎和出血性腸炎等并發(fā)癥問題,死亡率較成年牛更高。

3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

?？谔阋邔?shí)驗(yàn)室診斷時,ELISA是常用的一種方法,通過檢測血清或標(biāo)本中的抗體或病毒抗原來確定感染狀態(tài),ELISA可用于早期診斷和檢測血清中的病毒抗體水平。具體操作時,應(yīng)從牛的舌部、乳房或蹄部水泡皮中采集5～10 g新鮮樣本,并置于滅菌瓶中,加入50%甘油生理鹽水,低溫保存,以備進(jìn)一步鑒定。對于全血樣品,需要盡快離心分離血清,避免溶血。理想的離心條件是在500～4 000 r/min的速度下離心5～10 min。如果沒有離心機(jī),也可以將樣品放置于室溫下(20 ℃)傾斜2～4 h,然后在48 ℃環(huán)境中過夜待其自然凝固,并在后續(xù)操作中轉(zhuǎn)移上清液,血清在0～4 ℃條件下可保存5 d,在-15～-20 ℃冷凍保存時間更長。在實(shí)驗(yàn)室操作過程中,所有試劑盒中的試劑在使用前需要恢復(fù)至室溫,通常提前1～2 h拿出,放置在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)回溫。加樣孵育階段也需要嚴(yán)格控制,反應(yīng)板須在加樣后用封板膜封嚴(yán),以防止水分過多蒸發(fā)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在孵育時,應(yīng)根據(jù)實(shí)際室溫情況適當(dāng)增加ELISA板在溫箱中的孵育時間,以確保反應(yīng)充分,為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,應(yīng)避免混用不同批次的試劑盒。配制試劑前后均需要充分混勻,特別是濃縮的PBST液在低溫條件下可能會產(chǎn)生無機(jī)鹽結(jié)晶,使用前需要先進(jìn)行融化,底物溶液按照操作說明進(jìn)行配制,保證現(xiàn)配現(xiàn)用,血清的稀釋、加樣、轉(zhuǎn)移、洗滌及拍板等步驟也必須嚴(yán)格遵循規(guī)定操作[1]。在進(jìn)行血清稀釋時,應(yīng)先加稀釋液,然后再加入待檢樣品,加樣時需要避免產(chǎn)生氣泡,保持操作的準(zhǔn)確性。洗板是ELISA操作中的關(guān)鍵步驟,每孔加入洗滌液300 μL,洗滌3～5次,每次洗滌的時間約為30 s。洗板時須保證酶標(biāo)板平放,防止液體漏出或溢出。試驗(yàn)的顯色、終止以及讀數(shù)階段也需要嚴(yán)格控制,顯色反應(yīng)的時間應(yīng)根據(jù)底物顯色情況適當(dāng)調(diào)整為10～15 min,然后加入終止液,在讀數(shù)時,應(yīng)確保酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,同時清洗酶標(biāo)儀濾光片,保證讀數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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4.1 疫苗接種

口蹄疫的預(yù)防主要依賴于疫苗接種,常見的疫苗包括牛O型口蹄疫滅活疫苗和?？谔阋逴型病毒樣顆粒疫苗。其中,牛O型口蹄疫滅活疫苗所采用的抗原源自牛體,選用了強(qiáng)毒OA/58的抗原譜,通過BHK-21傳代細(xì)胞系進(jìn)行病毒抗原的培養(yǎng),經(jīng)過二乙烯亞胺(BEI)滅活處理,并添加礦物油佐劑制成乳劑疫苗。這種疫苗性狀為略帶粉紅的粘性液體,適用于黃牛、水牛、奶牛和牦牛等不同種類的牛,可用于預(yù)防和緊急接種,免疫效果可維持6個月,成年牛肌內(nèi)注射3 mL/頭,1歲以下犢牛肌內(nèi)注射2 mL/頭,存儲條件要求在4～8 ℃,并避免凍結(jié),有效期為10個月。?？谔阋逴型病毒樣顆粒疫苗同樣用于預(yù)防牛O型口蹄疫,免疫期為6個月,肌內(nèi)注射2 mL/頭,注射后可能出現(xiàn)注射部位腫脹、一過性體溫反應(yīng),以及減食或停食1～2 d的癥狀。通常在注射疫苗后3～5 d癥狀逐漸減輕,并逐漸恢復(fù)正常。

4.2 科學(xué)飼養(yǎng)管理

在口蹄疫的預(yù)防工作中,牛舍的清潔、通風(fēng)和干燥是預(yù)防疾病傳播的關(guān)鍵,定期對牛舍進(jìn)行清潔,并保持良好的通風(fēng)和干燥環(huán)境,通過科學(xué)的飼養(yǎng)管理,減少牛只的應(yīng)激源,提高其免疫力,從而降低感染口蹄疫的風(fēng)險(xiǎn)。此外,日常消毒工作也不可忽視,對圈舍、場地和用具進(jìn)行定期消毒是防止病毒傳播的重要步驟,采用2%的火堿或10%的石灰乳進(jìn)行消毒,2 d 1次,對糞便進(jìn)行堆積發(fā)酵處理,能有效地減少病毒的存在,從而降低感染風(fēng)險(xiǎn)。在緊急情況下,注射血清抗體天健牛毒清可作為緊急預(yù)防措施,能有效預(yù)防口蹄疫的暴發(fā)。同時,一旦確診有口蹄疫病例,須立即隔離病牛,并及時進(jìn)行治療,以阻斷病毒傳播,根據(jù)相關(guān)條例,若出現(xiàn)口蹄疫疫情,應(yīng)立即向有關(guān)部門報(bào)告,啟動緊急撲滅措施,實(shí)施疫區(qū)封鎖措施,嚴(yán)禁人畜來往,對疫點(diǎn)和疫區(qū)進(jìn)行封鎖,撲殺、銷毀病畜及其同群畜,并進(jìn)行大規(guī)模消毒工作,以消滅疫源。消毒可采用多種藥劑,常見的藥劑有2%氧化鈉和2%福爾馬林,20%～30%熱草木灰水和5%～10%氨水也可作為消毒藥劑進(jìn)行使用。

4.3 治療措施

4.3.1 口腔治療措施

在牛口蹄疫口腔治療中,使用5 mL/頭的0.05%～0.1%高錳酸鉀溶液沖洗患病部位,沖洗應(yīng)確保覆蓋整個患病區(qū)域,除高錳酸鉀溶液外,還可以使用0.2%福爾馬林或者2%～3%明礬溶液,用量與高錳酸鉀溶液相同。清潔口腔后,可在口腔潰爛面上涂抹10%～20%的碘甘油,3～5 mL/次,或1%～3%的硫酸銅,5～10 mL/次,這些藥物能有效治療口腔潰爛部位,有助于減輕病情。

4.3.2 蹄部治療措施

在蹄部的治療中,需要做好蹄部消毒,每頭牛使用1～2 L 3%的來蘇兒、1%福爾馬林或3%～5%的硫酸銅溶液進(jìn)行蹄部浸泡,確?；加胁∽兊奶悴砍浞纸萜渲?1～2次/d,持續(xù)3～5 d[2];另一種常見的傷口處理方式是在用水洗凈患牛的蹄子后,涂抹青霉素軟膏或20%碘甘油。每頭牛涂抹青霉素軟膏5～10 g/次,均勻涂抹在患處,隨后用繃帶進(jìn)行包扎;每頭牛可涂抹20%碘甘油3～10 mL/次,同樣均勻涂抹在傷口上,持續(xù)5～7 d,直到傷口完全愈合。在治療過程中,應(yīng)注意避免過度洗滌蹄子,以免潮濕影響傷口的愈合。除上述藥物外,還可以使用中藥進(jìn)行蹄部治療,中藥治療可選擇以下3種方案,第一種方案是采用生姜、甘草、金銀花的中藥組合,每種草藥各取15 g,煎水后過濾,得到藥液,用棉球蘸取藥液,對患處進(jìn)行擦洗,3次/d,連用3～5 d;第二種方案是采用雄黃、明礬、冰片各30 g,大黃、黃連各60 g,將這些草藥研成細(xì)末,用開水調(diào)成糊狀,將糊狀藥物涂抹在患部,3次/d,連用7 d;第三種方案是使用大蒜100 g、花椒25 g、白礬100 g、白酒150 mL的中藥配方,將大蒜、花椒、白礬浸泡于白酒中,經(jīng)過24 h后過濾,得到藥液,將藥液涂抹在患處,3次/d,連用7 d。

4.3.3 不良反應(yīng)治療措施

口蹄疫疫苗或治療藥物引發(fā)的不良反應(yīng),應(yīng)針對不同的情況采取相應(yīng)的治療措施。對于嚴(yán)重反應(yīng),例如患牛出現(xiàn)明顯呼吸急促、呼吸困難,建議立即皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素,患牛注射5 mg/頭,并在20 min后可酌情重復(fù)注射相同劑量[3],之后,肌內(nèi)注射500 mg/頭非那根(鹽酸異丙嗪),以及30 mg/頭地塞米松磷酸鈉,注意孕牛嚴(yán)禁使用地塞米松。對于已出現(xiàn)休克癥狀的患牛,先針刺耳尖放血,然后,做好靜脈通道的搭建,每頭牛靜滴200 mL 10%葡萄糖和10 mg去甲腎上腺素混合液。在患牛體溫低于36.5 ℃的情況下,還需要加入乙酰輔酶A 1 000 UI、ATP 200 mg、肌苷300 mg和25%葡萄糖2 000 mL進(jìn)行靜滴。當(dāng)患牛蘇醒、脈律恢復(fù)后,撤去上述藥物組合,換成2 000 mL 5%葡萄糖鹽水,加入5 g維生素C、60 g維生素B進(jìn)行靜滴,最后再使用500 mL的5%硫酸氫鈉液進(jìn)行靜滴。對于一般反應(yīng),可每頭牛肌內(nèi)注射500 mg非那根(鹽酸異丙嗪)、30 mg地塞米松磷酸鈉,之后皮下注射5 mg 0.1%鹽酸腎上腺素,病牛會較快恢復(fù)。

5 結(jié)束語

?？谔阋咦鳛橐环N傳染性疾病,對牛的健康和養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大威脅,在防治過程中,疫苗接種是一項(xiàng)關(guān)鍵舉措,能夠有效預(yù)防病情的發(fā)生和傳播,科學(xué)飼養(yǎng)管理、加強(qiáng)日常消毒工作,也是控制口蹄疫流行的重要手段。在治療方面,科學(xué)合理的治療措施能夠有效控制疾病的發(fā)生,對于不良反應(yīng)的處理,需要謹(jǐn)慎和迅速的干預(yù),以確?；寂５纳踩?。在未來,口蹄疫的防治需要全行業(yè)的共同努力,從養(yǎng)殖場到政府機(jī)構(gòu),均是重要一環(huán),持續(xù)的監(jiān)測、預(yù)防以及科學(xué)的治療均為保障牛的健康和養(yǎng)牛業(yè)穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵。