【摘要】結(jié)合實(shí)驗(yàn)室評(píng)審準(zhǔn)則和相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以及農(nóng)業(yè)農(nóng)村部對畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測實(shí)驗(yàn)室的具體要求，制定遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)《畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測色譜分析方法驗(yàn)證規(guī)范》。該標(biāo)準(zhǔn)解決了畜產(chǎn)品藥物殘留檢測新標(biāo)準(zhǔn)、新方法在實(shí)驗(yàn)室方法認(rèn)證和擴(kuò)參數(shù)中的實(shí)際問題，方便了新標(biāo)準(zhǔn)、新方法在檢測實(shí)驗(yàn)室的落地實(shí)施，填補(bǔ)了國內(nèi)畜產(chǎn)品檢測領(lǐng)域缺少相關(guān)驗(yàn)證指南的空白。

【關(guān)鍵詞】畜產(chǎn)品質(zhì)量安全；獸藥殘留；檢測；色譜分析；地方標(biāo)準(zhǔn)

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.02.009

Exploration of Verification specification for method of chromatographic analysis for quality and safety detection of livestock products

GUO Guoxian

（Liaoning Inspection， Examination & Certification Centre〔Liaoning Inspection forAgro- product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Shenyang 110036， China）

Abstract： Based on the laboratory evaluation criteria， relevant national， industry standards， and the specific requirements of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs for the quality and safety testing of animal products， the Liaoning local standard Verification specification for method of chromatographic analysis for quality andsafety detection of livestock products is formulated. This standard addresses the practical issues of laboratory method verification and parameter expansion for new standards and methods in the detection of veterinary drug residues in animal products， greatly facilitating the implementation of new standards and methods in testing laboratories and filling the gap in the lack of relevant validation guidelines in the field of animal product testing in China.

Keywords： quality and safety of livestock products； veterinary drug residues； detection； chromatographic analysis； local standards

畜產(chǎn)品質(zhì)量安全問題一直是社會(huì)關(guān)注的重點(diǎn)。2022年9月2日經(jīng)第十三屆全國人民代表大會(huì)常務(wù)委員會(huì)第三十六次會(huì)議表決通過的修訂版《中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》，將畜產(chǎn)品質(zhì)量安全以及畜產(chǎn)品生產(chǎn)安全問題提升到一個(gè)新的高度。為保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全及生產(chǎn)安全，提供全面、及時(shí)、客觀有效、合法合規(guī)的檢測數(shù)據(jù)成為相關(guān)檢測服務(wù)機(jī)構(gòu)面臨的挑戰(zhàn)。在此背景下，遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)DB21/T 3851—2023《畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測色譜分析方法驗(yàn)證規(guī)范》于2023年10月30日發(fā)布，在2023年11月30日實(shí)施。

1標(biāo)準(zhǔn)制定的背景

近年來，我國畜牧養(yǎng)殖等相關(guān)配套產(chǎn)業(yè)朝著規(guī)模化、集約化方向快速發(fā)展，同時(shí)這也引發(fā)了藥物濫用、不按休藥期規(guī)定停藥、人用藥給獸用等一系列問題。畜禽產(chǎn)品中藥物殘留超標(biāo)的問題已成為影響畜產(chǎn)品行業(yè)發(fā)展和畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要問題[1]。畜禽產(chǎn)品中出現(xiàn)的藥物殘留，一方面嚴(yán)重影響當(dāng)前畜禽行業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展，間接提高了整個(gè)畜禽養(yǎng)殖行業(yè)的飼喂成本以及治療成本；另一方面，畜產(chǎn)品中的藥物殘留問題會(huì)影響相關(guān)食品的質(zhì)量安全，危害人民群眾的身體健康，進(jìn)而危害畜禽養(yǎng)殖行業(yè)的健康發(fā)展[2]。另外，未經(jīng)無害化處理的過量藥物還可能通過畜禽廢棄物、排泄物對養(yǎng)殖環(huán)境造成污染[3]。

2標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性

為進(jìn)一步維護(hù)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全工作，適應(yīng)畜產(chǎn)品行業(yè)發(fā)展，畜產(chǎn)品藥物殘留檢測領(lǐng)域的相關(guān)配套檢測標(biāo)準(zhǔn)正在迅速發(fā)展，越來越多的獸藥甚至人用藥物的殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施。食典通網(wǎng)站統(tǒng)計(jì)顯示，2019年至2021年新增畜產(chǎn)品色譜分析相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)超過2000項(xiàng)。這些檢測標(biāo)準(zhǔn)所使用的方法主要由酶聯(lián)免疫吸附法、液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法這五種分析方法組成，其中酶聯(lián)免疫吸附法多作為輔助的篩選方法，而液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法以及氣質(zhì)聯(lián)用法一般作為畜禽產(chǎn)品藥物殘留檢測的確證方法，被廣泛應(yīng)用于畜產(chǎn)品質(zhì)量安全領(lǐng)域。

面對獸藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)的不斷更新，實(shí)驗(yàn)室必須采用一套系統(tǒng)性的方法來確保及時(shí)更新檢測流程。CNAS-CL01：2018《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》規(guī)定：“實(shí)驗(yàn)室在引入方法前，應(yīng)驗(yàn)證能夠正確地運(yùn)用該方法，以確保實(shí)現(xiàn)所需的方法性能?！倍鳵B/T 214—2017《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià)檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)通用要求》規(guī)定：“為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)條件對標(biāo)準(zhǔn)方法的適用性，實(shí)驗(yàn)室在使用標(biāo)準(zhǔn)方法前，應(yīng)對其進(jìn)行驗(yàn)證?！蹦壳霸谑称窓z測領(lǐng)域，方法認(rèn)證指南類的標(biāo)準(zhǔn)共計(jì)83個(gè)，但尚無畜產(chǎn)品獸藥殘留檢測領(lǐng)域的方法驗(yàn)證指南。因此，出臺(tái)實(shí)驗(yàn)室方法驗(yàn)證規(guī)范可以進(jìn)一步規(guī)范畜產(chǎn)品質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，使新標(biāo)準(zhǔn)、新方法能夠更好地應(yīng)用于檢驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)室。這不僅是實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)實(shí)需要，也是檢驗(yàn)檢測行業(yè)認(rèn)證體系的必然要求。

3標(biāo)準(zhǔn)制定內(nèi)容解析

3.1標(biāo)準(zhǔn)建立的依據(jù)

本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)GB/T 1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》、GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中的有關(guān)規(guī)定，為畜產(chǎn)品檢測實(shí)驗(yàn)室方法驗(yàn)證提供技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試驗(yàn)方法、檢測規(guī)則等指導(dǎo)要求。

3.2標(biāo)準(zhǔn)中技術(shù)指標(biāo)的確立

目前，我國尚未有關(guān)于畜產(chǎn)品檢測實(shí)驗(yàn)室新方法驗(yàn)證確認(rèn)試驗(yàn)的相關(guān)指導(dǎo)準(zhǔn)則。我們依據(jù)RB/T 063—2021《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)管理和技術(shù)能力評(píng)價(jià)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)要求》[4]以及GB/T 32467—2015《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制術(shù)語及定義》[5]，結(jié)合畜產(chǎn)品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作內(nèi)容及特點(diǎn)確立方法驗(yàn)證所含的技術(shù)指標(biāo)，即方法驗(yàn)證所需的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其相關(guān)工作范圍、方法正確度、方法精密度、方法的檢出限和定量限的參數(shù)要求及具體計(jì)算方法。

主要內(nèi)容的制定依據(jù)如下：1）依據(jù)RB/T 063—2021《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)管理和技術(shù)能力評(píng)價(jià)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)要求》的3.3條款中方法驗(yàn)證的定義、3.4條款中方法確認(rèn)的定義、5.3條款中標(biāo)準(zhǔn)方法驗(yàn)證的實(shí)施、6.3條款中非標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)的實(shí)施，確認(rèn)本標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容應(yīng)包括但不限于人員及其職責(zé)、設(shè)備設(shè)施、環(huán)境條件、代表性基質(zhì)樣品等；2）結(jié)合分析化學(xué)教材《現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用》[6]的“1.3色譜法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)”，以及多個(gè)畜產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室新方法驗(yàn)證報(bào)告內(nèi)容，確定具體技術(shù)指標(biāo)應(yīng)涵蓋標(biāo)準(zhǔn)曲線及工作范圍、正確度、精密度、檢出限和定量限等內(nèi)容；3）依據(jù)GB/T 32467—2015《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制術(shù)語及定義》中“2檢測過程術(shù)語及定義”“3方法驗(yàn)證能力術(shù)語及定義”“4回收率術(shù)語及定義”“5線性和校準(zhǔn)術(shù)語及定義”的相關(guān)要求，給出新方法驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其相關(guān)工作范圍、方法正確度、方法精密度、方法的檢出限和定量限的具體定義。

3.3標(biāo)準(zhǔn)中參數(shù)及性能要求的確立

依據(jù)所確定的技術(shù)指標(biāo)，即標(biāo)準(zhǔn)曲線及其相關(guān)工作范圍、方法正確度、方法精密度、方法的檢出限和定量限，結(jié)合NY/T 1896—2010《獸藥殘留實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范》[7]中的校正曲線，確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)曲線及工作范圍的性能要求為：校準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)盡可能覆蓋一個(gè)數(shù)量級(jí)，應(yīng)涵蓋包括空白點(diǎn)在內(nèi)的至少6個(gè)濃度點(diǎn)，其中濃度點(diǎn)應(yīng)至少包含方法的檢測限或者定量限，抑或測定低限的濃度、日常檢測所涉及的平均濃度、在工作范圍內(nèi)所涉及的最高點(diǎn)濃度。每個(gè)濃度點(diǎn)應(yīng)至少要重復(fù)測定2次，并計(jì)算其平均值。作為獸藥殘留疑似物的篩選方法，其對應(yīng)曲線的線性回歸方程相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98，對于獸藥殘留疑似物的確證方法，相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。曲線的線性范圍必須包含被測組分濃度等相關(guān)性能要求。

依據(jù)GB/T 6379.1—2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）第1部分：總則與定義》[8]，GB/T 6379.6—2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）第6部分：準(zhǔn)確度值的實(shí)際應(yīng)用》[9]，NY/T 1896—2010《獸藥殘留實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范》中E.2.5和E.2.6對準(zhǔn)確度、精密度的具體表述，以及結(jié)合分析化學(xué)教材《現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用》的“1.3色譜法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)”確定標(biāo)準(zhǔn)中方法正確度、方法精密度的相關(guān)性能要求，對不同濃度范圍內(nèi)正確度及精密度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)內(nèi)容確定了詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，即所驗(yàn)證的方法中涉及的每種基質(zhì)和每種目標(biāo)化合物均應(yīng)做回收率試驗(yàn)，相同基質(zhì)、相同目標(biāo)化合物的樣品均應(yīng)進(jìn)行每種組分的3個(gè)水平標(biāo)準(zhǔn)添加實(shí)驗(yàn)。具體如下：對于禁用物質(zhì)，回收率試驗(yàn)應(yīng)該在方法定量限（如無定量限，則用檢出限或者測定低限）、2倍定量限（如無定量限，則用檢出限或者測定低限）和10倍定量限（如無定量限，則用檢出限或者測定低限）這3個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行陽性添加的水平試驗(yàn)；對于已制定最大殘留限量的目標(biāo)組分，回收率試驗(yàn)應(yīng)該在方法定量限（如無定量限，則用檢出限或者測定低限）、最大殘留限量點(diǎn)、大于最大殘留限量的合適濃度點(diǎn)這3個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行陽性添加水平試驗(yàn)；未制定最大殘留限量的目標(biāo)組分，回收率試驗(yàn)應(yīng)該在方法定量限（如無定量限，則用檢出限或者測定低限）、常見的類似種類獸藥的限量指標(biāo)、大于限量指標(biāo)的合適濃度點(diǎn)進(jìn)行3個(gè)濃度陽性添加水平試驗(yàn)。以上水平實(shí)驗(yàn)應(yīng)每個(gè)水平至少進(jìn)行3批次實(shí)驗(yàn)，每批次至少包含6個(gè)樣品同時(shí)測定，依據(jù)所得結(jié)果的回收率來驗(yàn)證方法的正確度，并通過回收率數(shù)值計(jì)算得出每批次的回收率平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，從而驗(yàn)證方法的精密度。

依據(jù)NY/T 1896—2010《獸藥殘留實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范》中“D.1.1限用藥物的靈敏度”和“D.1.2禁用藥物的靈敏度”，分析化學(xué)教材《現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用》中“1.3.2.3靈敏度檢測限和定量限的相關(guān)要求”，給出檢出限和定量限的相關(guān)要求及檢出限及定量限的限定范圍，即應(yīng)結(jié)合驗(yàn)證方法的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備水平制定檢出限和定量限。如使用空白標(biāo)準(zhǔn)偏差倍數(shù)法進(jìn)行檢出限和定量限的驗(yàn)證，該方法在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測限應(yīng)滿足信噪比大于3∶1，方法定量限應(yīng)滿足信噪比大于10∶1的要求。

4標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施的意義

依據(jù)各項(xiàng)準(zhǔn)則以及國家標(biāo)準(zhǔn)要求，結(jié)合畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測的實(shí)際需求建立本地方標(biāo)準(zhǔn)，有利于畜產(chǎn)品質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化建設(shè)，為新方法、新標(biāo)準(zhǔn)在畜產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)室的落地使用提供了具體實(shí)施細(xì)則及細(xì)化考量指標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)通過規(guī)范各項(xiàng)驗(yàn)證指標(biāo)，進(jìn)一步明確了方法驗(yàn)證的流程以及驗(yàn)證內(nèi)容，保障了驗(yàn)證工作順利實(shí)施，有效規(guī)避因方法驗(yàn)證不符合國家規(guī)定而帶來的檢測風(fēng)險(xiǎn)，為實(shí)驗(yàn)室節(jié)省了大量的人力成本及時(shí)間成本，有利于在獸藥殘留標(biāo)準(zhǔn)日新月異的今天，畜產(chǎn)品質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)室更好地適應(yīng)現(xiàn)階段檢測要求，更好地完成檢驗(yàn)檢測任務(wù)，做好畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的“守門員”。本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施，有利于進(jìn)一步提高廣大畜產(chǎn)品檢測實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力建設(shè)以及管理體系建設(shè)，為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測行業(yè)的發(fā)展提供更有力的保障。

5結(jié)束語

遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)《畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測色譜分析方法驗(yàn)證規(guī)范》的制定，明確了主要驗(yàn)證指標(biāo)由標(biāo)準(zhǔn)曲線及工作范圍、方法正確度、方法精密度、方法的檢出限和定量限四部分組成，通過查閱相關(guān)準(zhǔn)則、教材、標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)，確立了各項(xiàng)指標(biāo)的具體內(nèi)容以及計(jì)算方法，從而形成一套完整的方法驗(yàn)證體系性指南。遼寧省農(nóng)產(chǎn)品及獸藥飼料產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測院以此體系為基礎(chǔ)順利通過了8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)共計(jì)41個(gè)參數(shù)的實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)項(xiàng)認(rèn)證工作，并順利通過了國家的CMA及CNAS和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的CATL認(rèn)證，這充分證明了該標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范性和可行性。

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【作者簡介】

郭國賢，男，1985年出生，高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，研究方向?yàn)楂F藥殘留檢測。

（編輯：侯睿琪）