韓聰，王娜

（1.常州市婦幼保健院 兒科， 江蘇 常州 213000； 2.常州市第四人民醫(yī)院 兒科，江蘇 常州 213001）

新生兒窒息是嬰兒期最常見的緊急情況之一，其可能導(dǎo)致嚴(yán)重的心肌損傷，對新生兒的健康產(chǎn)生長期的負(fù)面影響[1-2]。臨床評估和監(jiān)測新生兒窒息后心肌損傷的嚴(yán)重程度對于指導(dǎo)治療和預(yù)測預(yù)后至關(guān)重要[3]。然而，目前缺乏簡便且有效的生物標(biāo)志物來評估心肌損傷的嚴(yán)重程度。近年來，神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase, NSE）和乳酸在心臟病理生理學(xué)中的作用受到越來越多的關(guān)注[4]。NSE 作為一種存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中的酶，其在腦損傷和其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的水平變化已被廣泛研究[5]。相比之下，對于NSE 在心肌損傷中的作用及其與乳酸水平關(guān)系的研究較為有限。乳酸作為代謝紊亂的一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)，其在心肌缺氧和損傷中的水平上升可能反映細(xì)胞代謝狀態(tài)和能量平衡的變化[6]。本研究旨在探討NSE 和乳酸水平與新生兒窒息后心肌損傷嚴(yán)重程度的關(guān)系，期望能夠提供更多關(guān)于這些生物標(biāo)志物在新生兒心肌損傷評估中的潛在應(yīng)用，為臨床醫(yī)師提供更為準(zhǔn)確的工具來評估和管理新生兒窒息后的心臟健康狀況。

1 資料與方法

1.1 研究對象

本研究選取2020 年10 月—2023 年10 月常州市婦幼保健院收治的120 例新生兒窒息合并心肌損傷的患兒作為研究對象。根據(jù)心肌損傷標(biāo)志物心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cardiac Troponin Ⅰ, cTnⅠ）的水平，將患兒分為輕度組（79 例）和重度組（41 例）。同時(shí)，選取同期出生的60 例健康新生兒作為對照組。輕度組男性42 例（53.16%），女性37 例（46.84%）；平均出生體重（2.81±0.39）kg；平均出生時(shí)長38 周。重度組男性22 例（53.66%），女性19 例（46.34%）；平均出生體重（2.79±0.41）kg，平均出生時(shí)長37 周。對照組男性31 例（51.67%），女性29 例（48.33%）；平均出生體重（3.03±0.49）kg，平均出生時(shí)長39 周。3 組的性別、年齡及其他一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，明確診斷為新生兒窒息。②通過cTnⅠ等心肌損傷生化標(biāo)志物的升高來確認(rèn)心肌損傷。③家長或法定監(jiān)護(hù)人書面同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有嚴(yán)重先天性心臟病、遺傳性代謝疾病或其他重大系統(tǒng)性疾病的新生兒。②早產(chǎn)兒、極低體重兒或巨大兒。③母親孕期有嚴(yán)重感染、藥物濫用、慢性疾?。ㄈ绺哐獕?、糖尿病）等。④研究前接受過可能影響心肌損傷或神經(jīng)元特異性烯醇化酶和乳酸水平的治療。⑤無法獲得完整的臨床或?qū)嶒?yàn)室數(shù)據(jù)的患兒。

1.3 方法

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）檢測cTnⅠ和NSE 水平診斷新生兒窒息合并心肌損傷后立即采集靜脈血，并將血液樣本置于含有抗凝劑的試管，3 000 r/min離心10 min 取血清。按照ELISA 試劑盒（德國Sigma-Aldrich 公司）的說明書準(zhǔn)備所需試劑和樣本。將血清樣本和對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品依次加入ELISA 板的孔中，加入檢測抗體，與cTnⅠ或NSE 特異性結(jié)合的酶標(biāo)記抗體，孵育1～2 h，使抗體與抗原充分結(jié)合，清洗ELISA 板去除未結(jié)合的物質(zhì)，加入顯色劑，該物質(zhì)與酶標(biāo)記抗體反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化，終止反應(yīng)，并在微孔板閱讀器中讀取吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中的cTnⅠ和NSE 濃度[7]。

1.3.2 酶動(dòng)力學(xué)法檢測乳酸和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）水平 診斷新生兒窒息合并心肌損傷后采集新生兒靜脈血，3 000 r/min 離心10 min取血清。使用自動(dòng)生化分析儀[WD-480，維爾醫(yī)療技術(shù)（云南）有限公司]，準(zhǔn)備反應(yīng)混合物，將血清樣本加入反應(yīng)混合物中，在分析儀器中進(jìn)行溫度控制和時(shí)間監(jiān)控的反應(yīng)，通過測定反應(yīng)混合物的光密度變化來確定乳酸和LDH 濃度[8]。

1.3.3 化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測腦鈉肽（brain natriuretic peptide, BNP） 診斷新生兒窒息合并心肌損傷后采集新生兒靜脈血，3 000 r/min 離心10 min取血清。根據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器（德國西門子公司，IMMULITE 2000 Xpi）的說明書準(zhǔn)備試劑和樣本，將血清樣本加入含有BNP 特異性抗體的反應(yīng)管中，加入帶有化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的二次抗體，孵育，允許抗原-抗體復(fù)合物形成。使用化學(xué)發(fā)光儀器檢測并記錄發(fā)光強(qiáng)度[9]。

1.4 評價(jià)指標(biāo)及作用

①cTnⅠ，作為心肌損傷的主要生化標(biāo)志物，用于區(qū)分心肌損傷的嚴(yán)重程度。②血清NSE，作為神經(jīng)損傷的指標(biāo)，評估其與心肌損傷之間的相關(guān)性。③血清乳酸，反映組織缺氧程度，與新生兒窒息后心肌損傷嚴(yán)重程度有關(guān)。④血清腦鈉肽，作為心臟應(yīng)激和心臟功能不全的生化指標(biāo)，用于評估心肌損傷。⑤血清LDH，作為細(xì)胞損傷的通用指標(biāo)，用于評估心肌細(xì)胞的損傷程度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman 法；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic, ROC）曲線。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組NSE及乳酸水平比較

各組NSE、乳酸水平比較，經(jīng)方差分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。重度組NSE、乳酸水平均高于輕度組和對照組（P<0.05），輕度組NSE、乳酸水平均高于對照組（P<0.05）。見表1。

表1 各組NSE及乳酸水平比較 （±s）

表1 各組NSE及乳酸水平比較 （±s）

注 ： ①與對照組比較，P <0.05；②與輕度組比較，P <0.05。

組別對照組輕度組重度組F 值P 值n 60 79 41 NSE/(μg/L）0.37±0.10 1.39±1.10①4.02±1.73①②137.659 0.000乳酸/（mmol/L）4.71±0.66 6.28±0.81①9.07±1.28①②288.829 0.000

2.2 各組cTnⅠ、腦鈉肽及LDH水平比較

各組cTnⅠ、腦鈉肽、LDH 水平比較，經(jīng)方差分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。重度組的cTnⅠ、腦鈉肽、LDH 水平均高于輕度組和對照組（P<0.05），輕度組的cTnⅠ、腦鈉肽、LDH 水平均高于對照組（P<0.05）。見表2。

表2 各組cTnⅠ、腦鈉肽及LDH水平比較 （±s）

表2 各組cTnⅠ、腦鈉肽及LDH水平比較 （±s）

注 ： ①與對照組比較，P <0.05； ②與輕度組比較，P <0.05。

組別對照組輕度組重度組F 值P 值n 60 79 41 cTnⅠ/（pg/mL）71.57±3.88 104.78±9.48①163.49±12.99①②1 247.900 0.000腦鈉肽/（ng/L）30.45±5.10 51.39±6.04①84.02±9.73①②757.727 0.000 LDH/（ng/L）174.71±19.66 416.28±20.81①549.07±22.28①②4 364.090 0.000

2.3 NSE及乳酸與新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的相關(guān)性

NSE 與cTnⅠ、腦鈉肽及LDH 均呈正相關(guān)（P<0.05），乳酸與cTnⅠ、腦鈉肽及LDH 均呈正相關(guān)（P<0.05）。見表3。

表3 NSE及乳酸與新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的相關(guān)性

2.4 NSE及乳酸診斷新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的價(jià)值

NSE 診斷新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的敏感性為63.4%，特異性為92.4%，曲線下面積為0.821；乳酸診斷新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的敏感性為85.4%，特異性為84.8%，曲線下面積為0.884；兩者聯(lián)合的敏感性為95.1%，特異性為93.7%，曲線下面積為0.977。見表4 和圖1。

圖1 NSE、乳酸及其聯(lián)合診斷新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的ROC曲線

表4 NSE及乳酸診斷新生兒窒息心肌損傷嚴(yán)重程度的效能分析

3 討論

新生兒窒息是指新生兒在出生過程中或出生后立刻出現(xiàn)的嚴(yán)重呼吸障礙，導(dǎo)致血氧飽和度降低和二氧化碳積聚，這種情況可能引起多器官，包括心臟的損傷[10-12]。心肌損傷是窒息的重要臨床后果之一，可能導(dǎo)致短期和長期的心臟問題，甚至在嚴(yán)重情況下導(dǎo)致新生兒死亡[13-14]。NSE 是一種主要在神經(jīng)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的酶，通常用作神經(jīng)系統(tǒng)損傷的生化標(biāo)志物。在新生兒窒息情況下，NSE 水平的升高可能反映由缺氧導(dǎo)致的腦損傷程度，同時(shí)也可能與其他器官（如心臟）的損傷相關(guān)[15-16]。乳酸是細(xì)胞代謝過程中的產(chǎn)物，尤其是在缺氧條件下。在新生兒窒息的情況下，組織缺氧導(dǎo)致乳酸水平升高，其反映了全身的代謝應(yīng)激狀態(tài)[17]。乳酸水平的測定有助于評估新生兒的代謝狀態(tài)和窒息的嚴(yán)重程度。研究NSE 和乳酸水平與新生兒窒息心肌損傷之間的關(guān)系對于理解窒息的生物學(xué)機(jī)制至關(guān)重要。通過監(jiān)測這些生物標(biāo)志物，醫(yī)生可能能夠更準(zhǔn)確地評估窒息的嚴(yán)重程度，預(yù)測心肌損傷的風(fēng)險(xiǎn)，從而提前采取適當(dāng)?shù)闹委煷胧４送?，這些標(biāo)志物也可能幫助在臨床上對窒息新生兒的治療效果進(jìn)行監(jiān)測和評估。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重度組患者cTnⅠ、腦鈉肽、LDH 水平均高于輕度組和對照組；而輕度組患者的上述指標(biāo)也均高于對照組。從而證實(shí)了其作為評估心肌損傷嚴(yán)重程度的生物標(biāo)志物的潛力?？追擦岬萚18]研究發(fā)現(xiàn)，新生兒窒息會(huì)導(dǎo)致心肌損傷標(biāo)志物顯著升高，窒息程度越重，心肌損傷也越嚴(yán)重。早期給予磷酸肌酸鈉干預(yù)治療可以有效降低心肌損傷標(biāo)志物水平，改善心電圖異常，顯示出其對心肌的保護(hù)作用。馮祖章等[19]發(fā)現(xiàn)，新生兒窒息會(huì)導(dǎo)致心肌損傷，且重度窒息造成的心肌損傷更加嚴(yán)重。血乳酸和心肌酶水平的檢測有助于臨床診斷新生兒窒息和判斷其嚴(yán)重程度。NSE 和乳酸水平與cTnⅠ、腦鈉肽及LDH 等心肌損傷標(biāo)志物呈正相關(guān)。這進(jìn)一步支持了NSE 和乳酸在心肌損傷評估中的重要性。在新生兒窒息期間，腦缺氧缺血情況導(dǎo)致腦細(xì)胞，特別是神經(jīng)細(xì)胞的損傷，從而導(dǎo)致NSE 釋放入血液循環(huán)[20-22]。NSE 水平的升高反映了腦細(xì)胞的損傷程度，這與心肌損傷相關(guān)，因?yàn)樾呐K和大腦在氧氣需求方面相似，都對缺氧極為敏感。新生兒窒息導(dǎo)致全身組織和器官，包括心臟和大腦，經(jīng)歷缺氧狀態(tài)，這促進(jìn)了無氧代謝，進(jìn)而導(dǎo)致乳酸水平升高[23]。乳酸水平的升高反映了組織缺氧的嚴(yán)重程度，而心肌作為高度依賴氧氣的組織，對缺氧特別敏感，因此乳酸水平可以間接反映心肌損傷的程度[24]。新生兒窒息導(dǎo)致的腦缺氧也伴隨著全身其他重要器官（如心臟）的缺氧。心肌細(xì)胞在缺氧條件下不能有效進(jìn)行氧氣代謝，從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷或死亡，釋放心肌損傷相關(guān)的酶和蛋白[25]。ROC 曲線分析顯示，NSE和乳酸聯(lián)合使用在診斷新生兒窒息后心肌損傷嚴(yán)重程度時(shí)具有較高的敏感性和特異性，這表明在臨床實(shí)踐中，NSE 和乳酸可以作為有效的標(biāo)志物來輔助診斷和評估窒息新生兒的心肌損傷程度。NSE和乳酸水平的測定對于新生兒窒息后心肌損傷的早期診斷和風(fēng)險(xiǎn)評估具有重要的臨床意義，可能改善患兒預(yù)后。

綜上所述，NSE 和乳酸作為評估新生兒窒息后心肌損傷嚴(yán)重程度的生物標(biāo)志物，具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值。NSE 和乳酸不僅能夠幫助臨床醫(yī)師早期診斷心肌損傷，而且還有助于對病情嚴(yán)重程度的評估，為制訂合適的治療策略提供重要依據(jù)。