王宇琦，達(dá)哇卓瑪，樊海寧，2，劉川川，2

1 青海大學(xué)附屬醫(yī)院肝膽胰外科，西寧 810001；2 青海省包蟲病重點實驗室；3 青海大學(xué)高原醫(yī)學(xué)研究中心

棘球蚴病俗稱包蟲病，是由棘球絳蟲的幼蟲寄生于人體或家畜等動物體內(nèi)引起的人獸共患寄生蟲病，可分為囊型包蟲?。–E）和泡型包蟲?。ˋE）［1］。包蟲病的早期階段無明顯癥狀，直到病灶生長并擴散到全身各個器官才會表現(xiàn)出相應(yīng)并發(fā)癥［2］。人體的免疫細(xì)胞根據(jù)功能可分為固有免疫細(xì)胞和特異性免疫細(xì)胞，固有免疫細(xì)胞包括中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等，特異性免疫細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。先天免疫可通過模式識別受體（PRRs）識別病原體相關(guān)模式分子（PAMPs），并通過宿主防御機制來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，當(dāng)包蟲病處于感染階段時，寄生蟲能夠刺激宿主Th2型保護(hù)性免疫反應(yīng)［3-4］。微小核糖核酸（miRNAs）是一類小型非編碼RNA分子，可在轉(zhuǎn)錄后以序列特異性方式，通過抑制或促進(jìn)mRNA降解參與調(diào)節(jié)基因表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)過程［5］。宿主感染棘球蚴絳蟲后，棘球絳蟲自身蛋白和miRNAs能轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中，引起多種miRNAs表達(dá)改變并參與宿主的免疫調(diào)節(jié)過程［6］。因此，miRNAs或許是棘球絳蟲與宿主相互作用的關(guān)鍵調(diào)控環(huán)節(jié)［7］。本研究對宿主感染棘球絳蟲過程中影響單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞的相關(guān)miRNAs進(jìn)行總結(jié)，為探討miRNAs對包蟲病患者免疫功能的影響提供依據(jù)。

1 miRNAs對包蟲病患者單核巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控作用

1.1 miR-71 miR-71能夠在感染線蟲或血吸蟲宿主的血清、血漿及淋巴液中被檢測到，且線蟲外泌體中的miR-71能夠被宿主細(xì)胞內(nèi)化并釋放到宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用［8］。miR-71也作用于多房棘絳蟲原頭節(jié)，Nemo樣激酶基因（Nlk）是miR-71的靶點，與miR-71結(jié)合可導(dǎo)致其表達(dá)被抑制，表明miR-71可能影響了包蟲病的發(fā)展過程［9］。此外，AE來源的miR-71參與調(diào)節(jié)小鼠單核巨噬細(xì)胞的免疫過程［8］。一氧化氮（NO）參與調(diào)節(jié)棘球絳蟲感染后免疫抑制，同時可以抑制寄生蟲的感染，這使得NO能夠在包蟲病發(fā)病早期發(fā)揮重要作用［6］。研究顯示，與轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒的小鼠單核巨噬細(xì)胞（RAW264.7）相比，miR-71模擬物轉(zhuǎn)染后的RAW264.7細(xì)胞IL-10表達(dá)沒有明顯變化，但其在12 h后NO表達(dá)受到抑制［9］。此外，一些寄生蟲提取物能夠抑制單核巨噬細(xì)胞釋放NO［10］。張永娥等［11］研究顯示，在多房棘球蚴感染小鼠的過程中，miR-71是由外泌體攜帶并釋放到宿主體內(nèi)，進(jìn)而被單核巨噬細(xì)胞內(nèi)化；miR-71過表達(dá)能下調(diào)白細(xì)胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-4、IL-6等細(xì)胞因子表達(dá)，并調(diào)節(jié)LPS/TLR4信號通路，從而影響單核巨噬細(xì)胞的免疫功能。

1.2 miR-4989-3p miR-4989屬于miR-277家族。通過高通量測序可以確認(rèn)多房棘球絳蟲中有18種特異性miRNAs差異表達(dá)，而miR-let-7-5p、miR-10-5p、miR-71-5p和miR-4989-3p在細(xì)胞外囊泡中含量豐富［8］。DING等［8］研究顯示，在多房棘球絳蟲細(xì)胞外囊泡中miR-4989、miR-4989-3p表達(dá)高于miR-4989-5p［12］。NO是影響棘球蚴感染的關(guān)鍵因素，多房棘球絳蟲細(xì)胞外囊泡能夠抑制NO分泌［13］。在活化的單核巨噬細(xì)胞中，miR-4989-3p能夠抑制NO分泌，并且存在于多房棘球絳蟲的細(xì)胞外囊泡中。研究顯示，RAW264.7單核巨噬細(xì)胞中的miR-4989-3p能夠調(diào)節(jié)NO表達(dá)及LPS/TLR4信號通路，這提示miR-4989-3p在多房棘球絳蟲的發(fā)病中占據(jù)主要作用［14］。此外，miR-4989-3p過表達(dá)能夠升高促炎因子腫瘤壞死因子α（TNF-α）表達(dá)，表明miR-4989-3p有激活炎癥的作用。

1.3 miR-222-3p 多房棘球絳蟲能夠影響宿主小鼠肝臟和血清中的miRNAs表達(dá)，其中血清、單核巨噬細(xì)胞及脾臟中的miR-222-3p均表達(dá)下調(diào)［14-15］。單核巨噬細(xì)胞與多房棘球絳蟲原頭節(jié)體外共同培養(yǎng)時，miR-222-3p能夠持續(xù)在單核巨噬細(xì)胞中表達(dá)［16］。在轉(zhuǎn)染miR-222-3p抑制劑的單核巨噬細(xì)胞中，miR-222-3p表達(dá)降低，導(dǎo)致NO分泌減少，但一氧化氮合酶（iNOS）表達(dá)升高［17］。轉(zhuǎn)染miR-222-3p抑制劑后，單核巨噬細(xì)胞LPS/TLR4信號通路中有4個關(guān)鍵基因表達(dá)降低，而CD14、Toll樣受體家族4（TLRs4）和TICAM2表達(dá)均上調(diào)［18］。因此，下調(diào)miR-222-3p能夠通過調(diào)節(jié)NO分泌及LPS/TLR4信號通路來影響單核巨噬細(xì)胞的免疫功能，從而影響包蟲病的進(jìn)展。

1.4 miR-155-5p miR-155-5p和miR-146a-5p是免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)的共同調(diào)節(jié)因子，而miR-155-5p優(yōu)先在免疫細(xì)胞中表達(dá)［19］。GUO等［20］將miR-155-5p模擬物轉(zhuǎn)染到感染多房棘球絳蟲小鼠的腹腔單核巨噬細(xì)胞中，結(jié)果顯示會引起單核巨噬細(xì)胞miR-155-5p、iNOS mRNA及NO表達(dá)升高，提示miR-155-5p對單核巨噬細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)作用。NF-κB轉(zhuǎn)錄因子是細(xì)胞因子和趨化因子基因轉(zhuǎn)錄的主要調(diào)控因子，而轉(zhuǎn)染miR-155-5p后的單核巨噬細(xì)胞NF-κB表達(dá)升高、CD14表達(dá)降低，這表明miR-155-5p能夠通過NF-κB來調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)［20-21］。因此，miR-155-5p能夠參與單核巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，在調(diào)節(jié)宿主對多房棘球絳蟲感染的免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。

1.5 miR-146a-5p 在感染多房棘球絳蟲后，小鼠外周血清miR-146a-5p表達(dá)升高［22］。楊靜等［23］研究顯示，轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物的小鼠單核巨噬細(xì)胞系RAW264.7中TLR4、CD14表達(dá)均升高，但是促炎因子IL-1α、IL-1β、IL-12β表達(dá)均降低，轉(zhuǎn)染后第24、36 h的NO表達(dá)升高，而轉(zhuǎn)染miR-146a-5p抑制劑的RAW264.7則出現(xiàn)相反的表現(xiàn)。因此，miR-146a-5p對小鼠單核巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子具有免疫調(diào)節(jié)作用，可能是其影響包蟲病進(jìn)展的原因之一。

2 miRNAs對包蟲病患者樹突狀細(xì)胞功能的調(diào)控作用

CE是由細(xì)粒棘球絳蟲幼蟲引起的一種嚴(yán)重寄生蟲病，細(xì)粒棘球絳蟲能夠通過免疫調(diào)節(jié)因子來逃避宿主的免疫反應(yīng)，最新研究顯示免疫調(diào)節(jié)機制可能與樹突狀細(xì)胞有關(guān)［24］。細(xì)粒棘球絳蟲能夠調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞成熟，并通過改變單核細(xì)胞分化，逃避宿主的免疫監(jiān)控，從而促進(jìn)感染［25］。樹突狀細(xì)胞能夠激活T淋巴細(xì)胞，而線蟲、多房棘球絳蟲在感染的過程中能夠誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的產(chǎn)生，從而抑制T淋巴細(xì)胞增殖和分化［15］。在宿主感染細(xì)粒棘球絳蟲的早期，宿主可通過促進(jìn)樹突狀細(xì)胞的產(chǎn)生幫助殺死寄生蟲。細(xì)粒棘球絳蟲的分泌產(chǎn)物能夠誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受，從而損害宿主的免疫反應(yīng)。研究顯示，在小鼠感染細(xì)粒棘球絳蟲6、9、12個月后，其肝臟組織中的樹突狀細(xì)胞比例均升高［26］。

小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞（BMDCs）能夠內(nèi)化細(xì)粒棘球絳蟲原頭節(jié)來源的細(xì)胞外囊泡（PSCELVs），并將miRNAs轉(zhuǎn)運到BMDCs內(nèi)，而PSCELVs能夠促進(jìn)BMDCs的分化和成熟從而誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)［24］。miR-277a-3p被證實是PSC-ELVs中含量最豐富的miRNAs之一［16］。PSC-ELVs的miR-277a-3p能夠促進(jìn)BMDCs釋放炎癥因子，如IL-6、IL-12、TNF-α等，同時miR-277a-3p能夠直接結(jié)合核因子κB1（NF-κB1）的3′非翻譯區(qū)（UTR），從而抑制BMDCs中NF-κB1 mRNA和蛋白表達(dá)［24］。此外，miR-277a-3p模擬物能夠上調(diào)BMDCs中的IL-6、IL-12和TNF-α mRNA表達(dá)量，降低IL-10表達(dá)，具有明顯的促炎特性［24］。因此，miR-277a-3p能夠誘導(dǎo)BMDCs表達(dá)炎癥因子，并影響B(tài)MDCs的分化和成熟，從而發(fā)揮治療包蟲病的作用。

3 miRNAs對包蟲病患者T淋巴細(xì)胞功能的調(diào)控作用

3.1 miR-374b-5p 細(xì)粒棘球絳蟲會引發(fā)機體發(fā)生免疫反應(yīng)，主要是由于輔助性T淋巴細(xì)胞（Th細(xì)胞，主要包括Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞）比例失調(diào)所導(dǎo)致的［1］。目前研究表明，以Th1細(xì)胞為主的免疫反應(yīng)大多跟棘球絳蟲有關(guān)，而占據(jù)主導(dǎo)地位的Th2細(xì)胞則大多與AE相關(guān)［27］。LI等［28］研究發(fā)現(xiàn)，miR-374b-5p過表達(dá)可導(dǎo)致干擾素γ（IFN-γ）、IL-2和IL-17表達(dá)升高，從而促進(jìn)Th1、Th17分化。IL-10是miR-374b-5p的潛在靶基因，并與包蟲病感染相關(guān)［29］。多房棘球絳蟲通過上調(diào)免疫抑制因子（主要是IL-10和TGF-β）來調(diào)控宿主免疫反應(yīng)，而低水平的IL-10會影響多房棘球絳蟲的生長［30］。此外，Th1和Th17細(xì)胞免疫應(yīng)答增強與IL-10 mRNA表達(dá)降低和miR-374b-5p表達(dá)升高均有關(guān)［28］。因此，miR-374b-5p可能通過負(fù)調(diào)控IL-10表達(dá)而影響T淋巴細(xì)胞功能，從而影響包蟲病的進(jìn)展。

3.2 miR-126a-5p 重組Eg.P29（rEg.P29）具有免疫保護(hù)作用，能夠誘導(dǎo)Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答。研究顯示，在rEg.P29免疫保護(hù)包蟲病小鼠1周后，脾CD4＋T淋巴細(xì)胞miR-126a-5p表達(dá)升高、DLK1表達(dá)降低，而Notch1信號通路活性及Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答增強，提示miR-126a-5p可能在rEg.P29免疫保護(hù)下參與了CD4＋T淋巴細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化過程［31］。因此，miR-126a-5p可能通過下調(diào)DLK1對Notch1介導(dǎo)的CD4＋T淋巴細(xì)胞向Th1的分化起到正向調(diào)節(jié)作用，或許是診斷CE的潛在血清生物標(biāo)志物之一。

4 miRNAs對包蟲病患者自然殺傷細(xì)胞功能的調(diào)控作用

自然殺傷細(xì)胞在宿主抵抗病原體、介導(dǎo)抗腫瘤方面發(fā)揮重要作用。成熟的自然殺傷細(xì)胞能夠在不同情況下被激活，自然殺傷細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞有著復(fù)雜的相互作用。LEONG等［32］研究發(fā)現(xiàn)，在自然殺傷細(xì)胞中IFN-γ的發(fā)育受到多種miRNAs調(diào)節(jié)，包括miR-181a-5p、miR-155、miR-150、miR-181和miR-29等，其中miR-181a-5p能夠抑制自然殺傷細(xì)胞在體內(nèi)的發(fā)育和成熟，并且影響小鼠和人自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ［33］。仲順虎等［34］研究發(fā)現(xiàn)，在感染多房棘球小鼠的脾淋巴細(xì)胞中，miR-181a-5p表達(dá)下調(diào)，這或許能夠通過幫助自然殺傷細(xì)胞發(fā)育，來提高宿主的自身抵抗力，從而對抗包蟲病的感染。

綜上所述，在包蟲病患者的感染過程中，miR-71、miR-4989-3p、miR-222-3p、miR-155-5p、miR-146a-5p可影響單核巨噬細(xì)胞功能，miR-277a-3p能夠影響樹突狀細(xì)胞功能，miR-374b-5p、miR-126a-5p可影響T淋巴細(xì)胞功能，miR-181a-5p能夠影響自然殺傷細(xì)胞功能，上述miRNAs通過影響患者的免疫細(xì)胞及其功能而參與免疫調(diào)節(jié)。但目前還有很多miRNAs的功能和機制尚未得到證實，需要我們使用更先進(jìn)的方法來確定有效的miRNAs及其功能，以便為包蟲病的早期診斷和治療提供新靶點及理論依據(jù)。