郭志廷，付鵬程，張 康，劉 蓮，張 凱，李建喜

（1.中國農業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 農業(yè)農村部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室 甘肅省中獸藥工程技術研究中心，蘭州 730050；2.定西市安定區(qū)畜牧獸醫(yī)局石泉畜牧獸醫(yī)站，定西 743000）

仔豬黃痢是由致病性大腸桿菌引起的一種以腸炎和敗血癥為主要特征的傳染病，主要侵害1～3日齡仔豬，臨床上主要表現為仔豬排黃色稀糞和迅速發(fā)生死亡[1-3]。仔豬黃痢具有很高的發(fā)病率和死亡率，絕大部分養(yǎng)豬場都 有過發(fā)病，該病全年常發(fā)，幾乎無季節(jié)性特征，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重的經濟損失。由于致病性大腸桿菌血清型眾多，很難針對所有病原生產出有效疫苗用于預防。目前，對于仔豬黃痢的防治主要以抗生素和化學合成抗菌藥為主，但由于長期、不合理使用，不僅產生嚴重的細菌耐藥性和菌群失調問題，且獸藥殘留超標直接危害食品安全和人類健康[4-6]。鑒于此，迫切需要研發(fā)高效、綠色環(huán)保的新獸藥。中藥由于療效好、低毒低殘留和可以提高機體免疫力，近年逐漸成為新藥研發(fā)的熱點之一。本團隊根據仔豬黃痢的發(fā)病特性，經過認真的藥物篩選，以苦參、生姜等中藥進行組方，對臨床自然發(fā)病的仔豬進行試驗，驗證此方劑治療仔豬黃痢的臨床療效，旨在為下一步藥物研發(fā)奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 藥物 參姜止痢合劑，由苦參、生姜等中藥組成，經傳統(tǒng)水煎、濃縮制得，每毫升含生藥1 g。

1.2 試劑與儀器 普通血平板培養(yǎng)基和大腸桿菌顯色培養(yǎng)基均購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。ColonyDoc-It菌落計數儀購自北京賽百奧科技有限公司。

1.3 臨床治療方法

1.3.1 病例來源 2020年10月至2021年4月，從甘肅省白銀市景泰縣、蘭州市永登縣、定西市安定區(qū)分別選擇一個養(yǎng)豬場，搜集自然發(fā)生黃痢的仔豬，經流行病學調查、臨床癥狀觀察進行初步診斷，通過實驗室細菌學檢查進行確診。

1.3.2 藥物治療 每頭病豬每天給藥3～5 mL，每天1次，連用2～3 d。藥物使用前搖勻，候溫灌服。

1.3.3 診斷標準 臨床上1～3日齡排出黃色稀糞，經實驗室細菌學檢查大腸桿菌感染的，確診為仔豬黃痢。

1.3.4 治愈標準 給藥后仔豬腹瀉停止，精神狀態(tài)和飲食恢復正常，實驗室細菌學檢查病豬糞便中大腸桿菌數量明顯減少，即判為治愈。

1.4 大腸桿菌檢查方法

1.4.1 普通血平板培養(yǎng)基 將臨床上采集的糞便樣本稀釋200倍和400倍后，采用涂布的方法直接接種于普通血平板培養(yǎng)基，做好標識，置于35℃～39℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)18～24 h，之后觀察結果。

1.4.2 大 腸桿菌顯色培養(yǎng)基 在普通血平板試驗基礎上，將臨床上采集的糞便樣本稀釋400倍后，采用涂布的方法直接接種于大腸桿菌顯色培養(yǎng)基，做好標識，置于35℃～39℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)18～24 h，之后觀察結果。

2 結果與討論

2.1 仔豬黃痢的病因和防治 中獸醫(yī)認為，仔豬是稚陰稚陽之體，形氣不足，衛(wèi)外不固，加之環(huán)境多雨潮濕，冷熱不和，場圈污穢，仔豬感受疫癘之氣而發(fā)??；治療以清熱解毒，澀腸止瀉為原則[7-8]?，F代醫(yī)學認為，仔豬黃痢發(fā)病原因[9-11]包括：飼養(yǎng)管理不到位，比如未定期清理、消毒圈舍，導致圈舍環(huán)境衛(wèi)生不良，母豬體內可能攜帶致病性大腸桿菌，隨糞便排出時如果未能及時處理，導致仔豬接觸病菌發(fā)生感染；產后母乳不足，仔豬免疫力低下容易感染；仔豬胃腸消化功能不健全，導致胃酸含量分泌不足，不能有效殺滅進入體內的大腸桿菌導致發(fā)??；寒冷、饑餓等應激因素也可誘發(fā)此病等。因此，科學預防對于控制仔豬黃痢非常重要，應加強母豬、仔豬的飼養(yǎng)管理，如懷孕母豬飼喂全價飼料，產后馬上對圈舍、器具進行消毒；仔豬出生后盡快喂食母乳，提高免疫能力；及時補鐵預防生長過慢；飼喂一些仔豬易消化的食物，以及及時接種疫苗等[12-14]。目前，仔豬黃痢的防治主要依靠抗生素，但由于長期、不合理使用導致耐藥菌株產生、畜產品質量下降，嚴重影響食品安全[15]。中藥普遍具有較強的抗菌消炎作用，其主要抗菌活性成分包括黃酮、有機酸、生物堿及多糖類物質等；中藥除了具有來源廣、藥物殘留低等特點，還能通過調節(jié)動物腸道菌群、促進有益菌生長等途徑增強腸道免疫力。

2.2 藥物治療結果

2.2.1 腹瀉情況 參姜止痢合劑方中苦參為君藥，有清熱燥濕，殺蟲，祛風和利尿之功效；生姜為臣藥，有溫中散寒、回陽救逆之功效，兩者合用對于濕熱下痢有明顯的治療效果[16]。結果顯示，健康仔豬肛門周圍清潔（圖1A）；發(fā)生黃痢的仔豬肛門周圍有黃色排泄物（圖1B）；參姜止痢合劑連續(xù)給藥2～3 d后，仔豬停止腹瀉（圖1C）。

圖1 仔豬肛門周圍變化Fig.1 Changes around piglet anus

2.2.2 療效觀察 病例一：2020年10月1日至2021年4月30日，景泰縣王德香養(yǎng)豬場，共計選取發(fā)病仔豬121頭，灌藥2～3 d后病豬腹瀉停止，精神狀態(tài)和飲食恢復正常，后期隨訪無復發(fā)。病例二：2020年10月1日至2021年4月30日，永登縣苗中俊養(yǎng)豬場，共計選取發(fā)病仔豬63頭，給藥2～3 d后病豬腹瀉停止，精神狀態(tài)和飲食恢復正常，后期隨訪無復發(fā)。病例三：2021年3月15日至2021年4月30日，定西市蟾慕養(yǎng)豬場，共計選取發(fā)病仔豬165頭，給藥2～3 d后病豬腹瀉停止，精神狀態(tài)和飲食恢復正常，后期隨訪無復發(fā)。結果統(tǒng)計分析顯示，參姜止痢合劑連續(xù)給藥2～3 d后，3個豬場仔豬黃痢的治愈率分別為87.6%、89.1%和84.1%，平均治愈率為86.9%（表1）。

表1 仔豬黃痢治療效果Table 1 Therapeutic eff ect of piglet yellow dysentery

2.3 細菌檢查結果

2.3.1 普通血平板培養(yǎng)基結果 苦參是臨床上常用的一味中藥，在《素問》《史記》和沈存中的《筆談》等古代醫(yī)學典籍中都有記載?？鄥A和氧化苦參堿是其中主要的有效成分之一，具有良好的抗菌、抗球蟲、抗腫瘤、抗組織纖維化、抗高血糖應激以及神經保護等作用[17-18]。研究發(fā)現，苦參具有廣譜抗菌作用，對金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌等有良好的抑菌活性[19]。本試驗采集給藥前后發(fā)病仔豬的糞便，稀釋200倍和400倍，分別接種于同一個普通血平板（左200倍，右400倍），培養(yǎng)18 h后進行觀察；結果顯示，給藥前（即仔豬發(fā)病過程）的細菌數量很多，參姜止痢合劑用藥后治愈仔豬糞便中細菌數明顯減少（圖2）。

圖2 給藥前后仔豬糞便中細菌數Fig.2 The bacterial amount of piglet feces before and after administration

2.3.2 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基結果 在血平板培養(yǎng)基結果的基礎上，仔豬糞便稀釋400倍，接種于大腸桿菌顯色培養(yǎng)基，培養(yǎng)18 h后進行觀察，大腸桿菌呈藍綠色。結果顯示，黃痢感染仔豬糞便檢出的大腸桿菌數量較多（749個），參姜止痢合劑給藥后治愈小豬糞便檢出的大腸桿菌數顯著減少（10個）（圖3）。

圖3 給藥前后仔豬糞便中大腸桿菌數Fig.3 Escherichia coli amount of piglet feces before and after administration

本試驗結果表明，參姜止痢合劑對于致病性大腸桿菌引起的仔豬黃痢有較好的治療效果，治愈率達到80%以上；實驗室細菌學檢查結果也清楚地提示該方劑對大腸桿菌有較強的殺滅作用；且給藥治愈后仔豬精神狀態(tài)與飲食恢復正常，后續(xù)隨訪無復發(fā)。結果表明，參姜止痢合劑可以有效治療仔豬黃痢，今后有望成為防治黃痢的新藥物。