劉伯承，燕海峰，羅 陽，王 慧，楊 俊，陳一峰，周望平

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長沙 410131）

禽大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌（avian pathogenicEscherichia coli，APEC）引起的雞、火雞等禽類的多系統(tǒng)混合感染性疾病，臨床表現(xiàn)心包炎、肝周炎、氣囊炎、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、腹膜炎等多種病癥，甚至引起敗血癥而急性死亡[1]。該病是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病之一，在國內(nèi)流行率可達(dá)5%～30%，病死率最高可達(dá)90%[2]，可對養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。APEC 血清型眾多，全球公認(rèn)的常見血清型有O1、O2、O78、O35，此外O8、O145、O88、O20、O141 等也常有報(bào)道[3]。在我國已報(bào)道有70 種，主要有O2、O76、O78、O92、O93，其在各地區(qū)分布不盡相同[4]。APEC 致病機(jī)制目前尚不明確，其致病過程與攜帶的毒力因子之間的相互協(xié)調(diào)作用有著密切聯(lián)系[5]。APEC 與新生兒腦膜炎大腸桿菌（neonatal meningitisE. coli，NMEC）和人尿道源致病性大腸桿菌（uropathogenicE. coli，UPEC）關(guān)系密切，是潛在的人獸共患病病原菌，對人類公共健康造成了威脅[6]。

隨著集約化養(yǎng)殖持續(xù)發(fā)展，國內(nèi)各地區(qū)APEC臨床病例報(bào)道也越來越多[7-9]。有研究報(bào)道，山東[10]、重慶[11]、山西[2]、河北[12]等省份的大腸桿菌分離株有一定的致病力，血清型多樣，毒力基因種類多，大部分分離株表現(xiàn)為多重耐藥。因此，基于APEC 流行的復(fù)雜多樣特性及其對家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來的危害，掌握各地區(qū)APEC 分子生物特性，對建立禽大腸桿菌病監(jiān)測體系和精準(zhǔn)防控具有重要意義。近年來有關(guān)湖南省APEC 的研究報(bào)道甚少，為此本研究對湖南省部分規(guī)模肉雞場臨床疑似病例樣品進(jìn)行了大腸桿菌分離鑒定和菌種保存，并分析這些菌株血清型、種群發(fā)育、致病性、毒力基因及MLST 型，以期為本地區(qū)APEC 感染防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

血瓊脂培養(yǎng)基，購自貝瑞特生物科技有限公司；LB 肉湯培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，購自杭州百思生物科技有限公司；MH 瓊脂培養(yǎng)基，購自青島海博生物科技有限公司；大腸桿菌生化鑒定管，購自招遠(yuǎn)拓普生物科技有限公司；細(xì)菌基因組提取試劑盒，購自張家口賽諾生物科技有限公司；PremixTaq?，購自寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司；DL 2 000 DNA Marker，購自湖南擎科生物技術(shù)有限公司；藥敏紙片，購自廣州譽(yù)維生物科技儀器有限公司；50 種大腸桿菌O 抗原單因子定型血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 主要儀器

超凈無菌工作臺（SW-CJ-1FD），購自蘇州凈化設(shè)備有限公司；美國伯樂梯度PCR 儀（T 100），購置北京萊博瑞杰科技有限公司；奧林巴斯生物顯微鏡（CX23），購自南京伊諾達(dá)儀器設(shè)備有限公司；生化培養(yǎng)箱（SPX-50B），購置上海坤天儀器有限責(zé)任公司；高速冷凍離心機(jī)（ST-16R），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；疑膠成像系統(tǒng)（3500R），購自上海天能科技有限公司。其他實(shí)驗(yàn)器材均由湖南省畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)獸藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 樣品采集

2021 年在長沙縣、望城區(qū)、寧鄉(xiāng)市、瀏陽市各選擇1 個規(guī)模肉雞場（共4 個），無菌采集病雞肝臟組織樣品122 份。發(fā)病肉雞為40 日齡左右，用藥前發(fā)病率約為5%，主要表現(xiàn)精神萎靡，頭部眼瞼腫大，采食量下降，羽毛蓬亂，日增重明顯下降，肛門下周圍羽毛有黃綠色稀樣糞便等臨床癥狀。病雞解剖可見：肝臟明顯腫大，心、肝表面著有不同程度的黃色滲出性纖維素性膜，嚴(yán)重的有白色壞死斑；關(guān)節(jié)腫脹，腔內(nèi)有渾濁關(guān)節(jié)液。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌條件下，使用接種環(huán)蘸取組織樣品于血瓊脂培養(yǎng)基上劃線，37 ℃恒溫培養(yǎng)18～20 h；挑取表面濕潤光滑、灰色半透明圓形的疑似大腸桿菌菌落，分別劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18～20 h，觀察菌落生長形態(tài)；取單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察，同時(shí)轉(zhuǎn)接于LB 液體培養(yǎng)基，37 ℃搖床培養(yǎng)30 h 后冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 生化試驗(yàn)

挑取純化培養(yǎng)的菌落接種于大腸桿菌微量生化反應(yīng)管中，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察并記錄結(jié)果，參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》[13]進(jìn)行鑒定。

1.6 細(xì)菌DNA 提取與PCR 擴(kuò)增

按照細(xì)菌基因組提取試劑盒說明書步驟操作，提取后標(biāo)記為模板DNA。針對大腸桿菌持家基因PhoA，登錄GenBank 查找并比對目的基因序列，利用Primer 5 軟件設(shè)計(jì)大腸桿菌特異性引物。參照文獻(xiàn)[14]設(shè)計(jì)系統(tǒng)發(fā)育群TspE4.C2、chuA、yjaA基因引物，參照文獻(xiàn)[15-16]用NCBI 網(wǎng)站中BLAST 軟件比對序列設(shè)計(jì)14 對毒力基因引物。所有引物均由湖南擎科基因生物有限公司合成，引物序列見表1。PCR 反應(yīng)體系、瓊脂糖凝膠電泳檢測步驟參考文獻(xiàn)[17]。產(chǎn)物回收后送湖南擎科基因生物有限公司測序，在NCBI 上進(jìn)行序列比對與分析。

表1 PCR 擴(kuò)增引物信息

1.7 種系發(fā)育群檢測、血清型鑒定、多位點(diǎn)序列分型（MLST）鑒定

1.7.1 種系發(fā)育群檢測 對種系分群PCR 擴(kuò)增結(jié)果，依照Clermont 等[18]提出的二分樹方法判定：yjaA基因陽性或yjaA、TspE4.C2、chuA基因陰性為A 群，僅TspE4.C2基因陽性為B1 群，chuA和yjaA基因陽性或3 種基因均陽性認(rèn)定為B2 群，chuA基因陽性或chuA、TspE4.C2基因均陽性為D 群。

1.7.2 血清型鑒定 將受試菌在麥康凱瓊脂平板上劃線，37 ℃培養(yǎng)24 h；挑選光滑圓整菌落接種于TSA 瓊脂斜面，37 ℃培養(yǎng)24 h；用1.5～2.0 mL石炭酸生理鹽水將菌落全部洗下，收集于試管中，于121 ℃高壓2 h，破壞其K 抗原；各取50 μL 制備好的抗原和血清于潔凈載玻片上混勻，涂成直徑約2 cm 的圓膜，1 min 內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集顆粒判定為陽性。同時(shí)以抗原與0.5%石炭酸生理鹽水混合物作對照。

1.7.3 MLST 鑒定 根據(jù)https://bigsdb.pasteur.fr/E coli/primers-used網(wǎng)站提供的大腸桿菌分型方案，合成8 對大腸桿菌持家基因引物并進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，引物序列及退火溫度見表2。合成產(chǎn)物送湖南擎科基因公司進(jìn)行正反向測序。用DNAstar 中的SeqMan 軟件將正反向序列進(jìn)行拼接校正，上傳至Pasteur 數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行大腸桿菌等位基因序列比對分析，得到一個精準(zhǔn)等位基因號，8 個持家基因的等位基因序號組成該菌株的等位基因譜；將等位基因譜提交至Pasteur 數(shù)據(jù)庫（https://bigsdb.pasteur.fr/Escherichia coli Pasteur MLST）進(jìn)行分析，得到該菌株的ST（sequence type）型。

表2 8 個持家基因PCR 引物

1.8 動物致病性試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[19]將受試株菌液調(diào)整至108CFU/mL，按0.1 mL/只腹部皮下接種2 日齡健康雛雞6 只，并設(shè)磷酸鹽緩沖液（PBS）為陰性對照，每4 h 觀察1 次，記錄各組死亡數(shù)。解剖觀察死亡雞的內(nèi)臟形態(tài)，同時(shí)無菌取心臟、氣囊及肝臟組織進(jìn)行細(xì)菌回收鑒定。1 周后撲殺所有試驗(yàn)存活雞，解剖觀察病變，并做細(xì)菌回收鑒定。根據(jù)病變程度和死亡數(shù)量確定病原菌的致病性，參考文獻(xiàn)[16]判斷其致病力。

1.9 藥物敏感性試驗(yàn)

將菌液濃度調(diào)整至108CFU/mL，采用紙片擴(kuò)散法（K-B），取100 μL 菌液置厚度4 mm 的MH瓊脂培養(yǎng)培養(yǎng)基上，用玻棒涂布均勻。選擇常用的10 種抗生素（頭孢西丁、諾氟沙星、四環(huán)素、慶大霉素、氨芐西林、氟苯尼考、丁胺卡那、新生霉素、克林霉素及復(fù)方新諾明）藥敏紙片貼于平板上，每個平板4 張紙片，間距5 cm，37 ℃培養(yǎng)16 h，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（Clinical and Laboratory Standard Institute，CLSI）標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果[20]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

122 份樣品中所分離的大腸桿菌在血瓊脂培養(yǎng)基上生長成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明灰色菌落，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長成圓形粉紅色的中等大小菌落，在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長成圓形金屬光澤菌落；革蘭氏染色鏡檢可見兩端鈍圓、較小的粉紅色桿菌。

2.2 生化鑒定

分離菌在甘露糖、山梨醇、麥芽糖、木膠糖、鳥氨酸及賴氨酸脫氫酶試劑管中呈陽性，在尿素、側(cè)盞金花醇、葡萄糖酸鹽、枸櫞酸鹽、苯丙氨酸、硫化氫試劑管中呈陰性，根據(jù)大腸桿菌生化反應(yīng)試劑管結(jié)果，共有83 株初步確定分離菌為大腸桿菌。

2.3 phoA 基因擴(kuò)增

83 株分離菌經(jīng)PCR 擴(kuò)增，凝膠電泳檢測可見大小約900 bp 條帶，與目的基因片段一致（圖1），經(jīng)核苷酸序列比對，與GenBank 中大腸桿菌參考株ATCC 25922（登錄號CP037449.1）同源率為99.8%～100%，確定分離菌為大腸桿菌。

M. DL 2 000 DNA Marker；1～8.分離菌株；9. 陽性對照。圖1 部分菌株phoA 基因PCR 擴(kuò)增結(jié)果

2.4 動物致病性試驗(yàn)

將分離菌接種至2 日齡雛雞，發(fā)現(xiàn)4 h 后雛雞出現(xiàn)不同程度的病癥，表現(xiàn)羽毛蓬亂、精神萎靡、縮頸垂翅膀等癥狀，解剖死亡雞可見心包積液、肝臟腫大、氣囊渾濁等病變。由表3 可知：1 周內(nèi)死亡率在50%以上的有46 株，占55.42%（46/83），判定為高致病性；死亡率在20%～50%的有31 株，占37.35%（31/83），判定為中等致病性；死亡率在20%以下的有6 株，占7.23%（6/83），判定為低致病性。從未死亡雛雞的心、肝、脾、肺等腸外器官均分離到大腸桿菌，其生長特性及革蘭氏染色結(jié)果與原受試菌株一致；對照組未出現(xiàn)臨床癥狀，解剖后取肝組織劃線分離培養(yǎng)，也未發(fā)現(xiàn)菌落生長。

表3 動物致病性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 APEC 生物特性

2.5.1 血清型 由表4 可知：83 株分離菌經(jīng)玻片凝集試驗(yàn)共鑒定出15 種血清型，另有14 株未定型。分析顯示，優(yōu)勢血清表型為O2、O1、O78 和O14，分別占分離菌的19.28%、14.46%、12.05%和9.64%，其余11 種血清型菌株占比為27.70%。

表4 APEC 血清型鑒定結(jié)果

2.5.2 毒力基因 如圖2 和3 所示，經(jīng)PCR 擴(kuò)增大腸桿菌相關(guān)毒力基因，檢測出irp2、afa、fyuA、iutA、hlyF、iss、papC、fimC共8 種毒力基因，其中irp2、fyuA、iutA、fimC檢出率均為100%，afa、hlyF、iss、papC檢出率分別為71.08%（59/83）、74.69%（62/83）、87.95%（73/83）、75.9%（63/83），未檢出escV、Ler、Tsh、yijP、ibeA、hlyF等6 種毒力基因。由表5 可知：被檢毒力基因經(jīng)分析形成8 種不同的基因組合圖譜，其中同時(shí)攜帶8 種毒力基因的致病菌株占38.55%（32/83）。

M. DL 2 000 DNA Marker；1～8. 依次為irp2、Afa、fyuA、iutA、hlyF、iss、papC、fimC；9. 陰性對照。圖2 部分菌株毒力基因PCR 擴(kuò)增結(jié)果

圖3 8 種毒力基因在83 株APEC 中的分布

表5 APEC 毒力基因組合分布

2.5.3 種系發(fā)育群 利用種系分群基因chuA、yjaA、TspE4.C2進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物條帶與目的基因大小一致（圖4）。由6 表可知：83株分離菌株經(jīng)二分樹判定得到B2、B1、A 和D 共4 個種群，占比分別為42.17%（35/83）、38.55%（32/83）、10.85%（9/83）和8.43%（7/83），大部分高致病菌株來自B2（31 株）、B1（10 株）種群。

M. DL 2 000 DNA Marker；1. TspE4.C2；2. chuA；3. yjaA；4. 陰性對照。圖4 部分大腸桿菌分離菌株P(guān)CR 擴(kuò)增結(jié)果

表6 種系發(fā)育群分析結(jié)果

2.5.4 MLST 分型 PCR 擴(kuò)增結(jié)果（圖5）顯示，8 個大腸桿菌持家基因產(chǎn)物條帶與目的基因大小一致。由表7 可知：83 株APEC 共獲得12 種ST 型。其中：ST95、ST481、ST350 為本次分離菌株的主要ST 型，占比分別為19.28%（16/83）、14.46%（12/83）、15.66%（13/83）；其次為ST396（10 株）、ST954（5 株）、ST336（4 株）和ST317（4 株）；另有5 個新ST 型（19 株）被檢出。結(jié)果表明，本次分離菌株的遺傳發(fā)育整體呈多態(tài)性。

M. DL 2 000 DNA Marker；1～8. IcdA，pabB，trpA，trpB，dinB，polB，putP，uidA。圖5 8 個持家基因PCR 擴(kuò)增結(jié)果

表7 APEC 的MLST 分型結(jié)果

2.5.5 致病性與血清型、毒力基因、種系發(fā)育群、MLST 之間相關(guān)性 由表8 可知：中、高致病菌株主要來自B2、B1 種群，高致病性菌株中主要血清型分布由高到底依次為O2、O1、O78，ST 型主要分布在ST95、ST481、ST350，毒力基因組合主要為I、II、III、IV、V；而低致病菌株主要來自A 群，對應(yīng)的血清型及ST 型較少。綜合分析，本次分離菌株致病性和優(yōu)勢血清型、優(yōu)勢ST 型、種群發(fā)育及毒力基因攜帶種類呈一定相關(guān)性，但整體分布無規(guī)則，非絕對性相關(guān)。

表8 APEC 種系發(fā)育群、血清型、MLST、毒力基因相關(guān)性

2.5.6 藥物敏感試驗(yàn) 由表9 可知：83 株APEC對所選10 種受試抗生素呈不同程度耐藥，其中對四環(huán)素和新生霉素耐藥程度最強(qiáng)，耐藥率分別為96.38%和92.77%；其次是氨芐西林、復(fù)方新諾明、克林霉素、氟苯尼考及慶大霉素，耐藥率為79.52%～59.04%。大部分菌株對頭孢西丁和丁胺卡那敏感，敏感率分別為81.93%和79.52%，對喹諾酮類（諾氟沙星）表現(xiàn)為中介和敏感的約各占40%。

表9 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果 單位：%

3 討論

3.1 APEC 血清型

APEC 傳播途徑廣泛，除通過加強(qiáng)衛(wèi)生管理外，生產(chǎn)上主要依靠接種疫苗和藥物來預(yù)防[21]。大腸桿菌血清型復(fù)雜，各地區(qū)流行血清型差異較大，同時(shí)各型間的交叉保護(hù)力不強(qiáng)，因此血清分型是評估APEC致病潛力最受認(rèn)可的方法。戴建華等[22]報(bào)道，2018—2020 年江蘇省部分地區(qū)鴨源APEC 主要血清型為O78（19.0%）、O65（14.3%）、O24（14.3%）和O1（11.9%）。張立偉等[12]報(bào)道，河北省雞源大腸桿菌主要流行血清型為O78（26.79%）、O2（23.21%）、O157（17.86%）和O1（14.29%）。劉香敏[1]報(bào)道，山東等省部分地區(qū)雞場優(yōu)勢血清型為O14、O35、O1、O2、O78、O88。而最近有研究[23]報(bào)道，O145 可能正在成為我國APEC 的主要血清型。本研究從湖南省部分地區(qū)規(guī)模雞場的83 株APEC 中鑒定出15 種血清型，其中O2、O1、O78、O14 為主要流行血清型，在定型株中占比分別為19.28%、14.46%、12.05%、9.46%，優(yōu)勢血清型與大部分報(bào)道一致，另外還鑒定出O135、O141 等11 種血清型，提示湖南省APEC 血清型呈多樣性分布。

3.2 APEC 毒力基因

基于APEC 對家禽業(yè)的重要影響，目前國內(nèi)外對其檢測方法以及致病機(jī)制的研究越來越多。大腸桿菌主要致病因子如F1 菌毛、P 菌毛、耶爾森菌強(qiáng)毒力島（HPI）、攝鐵系統(tǒng)、腸細(xì)胞脫落位點(diǎn)（LEE）毒力島、Ⅲ型分泌系統(tǒng)2（ETT2 毒力島）、溶血素（hlyF）、溫度敏感性血凝素（Tsh）、侵襲素和空泡毒素成為近年來致病機(jī)制的研究熱點(diǎn)[24-25]。劉華[26]利用毒力基因papC、iucD、tsh、irp2、iss建立一種同時(shí)檢測APEC 5 種毒力基因的多重PCR 方法；吳劍梅等[27]對大腸桿菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)2（ETT2）轉(zhuǎn)錄因子EivF 的功能研究發(fā)現(xiàn)，EivF 參與調(diào)控APEC 運(yùn)動能力和在不良環(huán)境中的存活能力；Tu 等[28]發(fā)現(xiàn)irp2-fyuA基因簇是參與高致病性毒力島（HPI）合成的主要基因；Asai等[29]研究表明，iutA、hlyF、iss、iroN和ompT這5 種基因與APEC 中高致病力密切相關(guān)；程雪梅等[30]研究發(fā)現(xiàn)，新疆和田地區(qū)鵝場禽致病性桿菌irp2基因檢出率達(dá)98%；張躍東等[31]研究發(fā)現(xiàn)，鴿源APEC O55 型毒力基因fyuA、iss的檢出率分別為66.7%、50.0%，基因irp-2、fimC、tsh檢出率均為33.3%；徐亞亞等[32]研究發(fā)現(xiàn)，江蘇省部分地區(qū)雞源APEC 毒力基因iutA、iss檢出率分別為90.0%、78.3%，且高致病株iutA、tsh、iroN、irp-2、iss和cvaC基因檢出率顯著高于低致病株（P＜0.05）。本研究發(fā)現(xiàn)，83 株致病菌中irp-2、fyuA、iutA、fimC攜帶率均為100%，hlyF、iss攜帶率分別為74.69%、87.95%， 表明irp2、fyuA、iutA、fimC、hlyF、iss在各地區(qū)APEC 中攜帶率較高，與菌株高致病性有著重要的關(guān)系，但其相互作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

3.3 致病性與種群、血清型、MLST 相關(guān)性

Clermont 等[18]利用PCR 技術(shù)建立了大腸桿菌種系發(fā)育快速分型方法，可將大腸桿菌分為B1、B2、A 和D 型4 個種群。A 型常為環(huán)境共生菌，B1 型一般為環(huán)境共生菌和腸道內(nèi)致病菌，B2 型主要為腸道外致病菌，D 型為腸道內(nèi)致病菌[14]。王穎[33]報(bào)道，安徽省92 株APEC 屬于A 群的有19株（20.65%），屬于B1 群的有35 株（38.04%），屬于B2 群的有20 株（21.74%），屬于D 群的有18 株（19.57%），與本研究中83 株致病株中的高、中致病株主要屬于B1、B2 群相一致。最近研究[34]表明，APEC（特別是屬于序列類型ST95 和ST131，或O1、O2 和O18 血清型的分離株）是潛在的食源性人獸共患病病原體，也是人類腸外感染的病原菌，與人類尿路致病性大腸桿菌具有遺傳相似性。本研究中，分離菌株血清型集中在O1、O2，ST 型集中在ST95，提示這些地區(qū)需加強(qiáng)對畜禽場禽群及飼養(yǎng)管理人員的大腸桿菌感染監(jiān)測，做好衛(wèi)生消毒，防止病原傳播。

3.4 APEC 耐藥性分析

大腸桿菌可通過染色體的改變，或質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子介導(dǎo)轉(zhuǎn)移獲得多種耐藥機(jī)制，在遺傳物質(zhì)上穩(wěn)定下來，并在水平和垂直方向上迅速轉(zhuǎn)移和傳播[35]，給消除和控制細(xì)菌耐藥性增加了難度。胡紫萌等[36]研究發(fā)現(xiàn)，廣西地區(qū)69 株APEC 對氨芐西林（91.3%）、四環(huán)素（98.6%）高度耐藥；李蘊(yùn)玉等[37]研究發(fā)現(xiàn)，秦皇島市APEC 對磺胺二甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、阿莫西林、林可霉素4 種藥物的耐藥率均為100%。本研究發(fā)現(xiàn)，湖南省部分地區(qū)規(guī)模肉雞場APEC 對四環(huán)素、新生霉素、氨芐西林、復(fù)方新諾明、克林霉素、氟苯尼考等6種抗生素耐藥率達(dá)60%以上，其中對四環(huán)素、氨芐西林的耐藥率較高，與上述報(bào)道較相近，這可能與實(shí)際生產(chǎn)中普遍使用這幾類抗生素有關(guān)，也可能與耐藥基因水平傳播有關(guān)。

4 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)：湖南省肉雞場流行的APEC 具有一定致病力，攜帶的毒力基因種類廣、組合類型復(fù)雜，血清型和ST型多樣，已對多種抗生素產(chǎn)生耐藥。提示湖南省應(yīng)加強(qiáng)對畜禽場禽群及飼養(yǎng)管理人員的大腸桿菌感染監(jiān)測及耐藥性監(jiān)測，做好衛(wèi)生消毒，建立科學(xué)的抗生素使用方案，防止病原及耐藥性傳播。