歐 濤, 胡志琴, 高 原, 伍華燕, 陳凱茵, 徐金東, 方咸宏, 單志新,*

(1)華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 廣州 510006;2)廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院藥學(xué)部, 廣州 510799;3)南方醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)醫(yī)學(xué)研究部, 廣州 510080;4)南方醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)麻醉科, 廣州 510080;5)南方醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)心內(nèi)科, 廣州 510080)

心臟在病理?xiàng)l件(如心肌梗死)下會(huì)發(fā)生代償性的心肌重構(gòu)過(guò)程,其主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞體積增大,毛細(xì)血管密度降低,心肌供血不足,并可能促進(jìn)心力衰竭的發(fā)生[1]。研究顯示,毛細(xì)血管密度的降低一定程度上是由于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂引起,血管內(nèi)皮功能損傷將導(dǎo)致血管新生不足、心肌缺氧、心肌收縮功能降低等一系列病理變化[2,3]。因此,研究心肌重構(gòu)中血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)機(jī)制,對(duì)心肌重構(gòu)的干預(yù)和治療研究具有重要意義。

mRNA的3′UTR(3′ untranslated region)不但參與翻譯蛋白質(zhì)的過(guò)程,同時(shí)參與發(fā)揮多種生物學(xué)功能[4]。研究發(fā)現(xiàn),3′UTR有一部分序列存在高度的序列保守性,含有富AU元件的3′UTR可能導(dǎo)致mRNA的不穩(wěn)定性,促使mRNA更易降解[5]。果蠅的胚胎發(fā)育早期需要3′UTR對(duì)bicoid mRNA進(jìn)行定位發(fā)揮作用,以此來(lái)產(chǎn)生胚胎中的蛋白質(zhì)梯度[6]。在果蠅軟母細(xì)胞中,Oskar mRNA其3′UTR部位能夠與抑制因子相結(jié)合,抑制Oskar過(guò)早翻譯,使之到達(dá)軟母細(xì)胞的后極才被翻譯[7]。近期研究證實(shí),在心血管領(lǐng)域的研究發(fā)現(xiàn),酪蛋白激酶2相互作用蛋白質(zhì)-1(casein kinase-2 interacting protein-1, CKIP-1)3′UTR獨(dú)立于CKIP-1蛋白發(fā)揮抑制心肌肥大作用[8]。

近年來(lái)的研究證實(shí),狹縫引導(dǎo)配體(slit guidance ligand,SLIT)基因在調(diào)控血管生成中扮演著重要的角色。例如Slit 3可作為一種新型、有效的血管生成因子刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖,可加速內(nèi)皮細(xì)胞血管網(wǎng)絡(luò)的形成,刺激體外新生血管發(fā)芽和體內(nèi)新生血管生長(zhǎng)[9]。Slit2的15外顯子剪接體的編碼蛋白質(zhì)參與調(diào)節(jié)腫瘤周圍血管正常化[10]。我們的前期工作發(fā)現(xiàn),人心肌組織中SLIT1 3′UTR水平顯著高于SLIT1 編碼區(qū)(coding sequences, CDS),但相比于健康器官捐獻(xiàn)者,肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者心肌中SLIT1 3′UTR水平下降,本研究旨在探究SLIT1 3′UTR對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞表型的影響及可能機(jī)制,為心肌重構(gòu)的干預(yù)和治療研究提供科學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 心肌組織標(biāo)本

利用HCM患者和健康器官捐獻(xiàn)者的心肌組織進(jìn)行SLIT1基因轉(zhuǎn)錄本水平的RT-qPCR檢測(cè)。本文所涉及臨床樣本的實(shí)驗(yàn)均經(jīng)廣東省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[批準(zhǔn)號(hào)No.GDREC2019238 H(R1)],所有患者均簽署知情同意書(shū),相關(guān)心肌組織標(biāo)本均由廣東省心血管病研究所進(jìn)行提供。

1.2 材料

主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(human aortic endothelial cells,HAECs)購(gòu)自ATCC細(xì)胞庫(kù);胰蛋白酶(0.25% trypsin-EDTA)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)及DMEM/F12 培養(yǎng)液(Gibco);細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000 及Oligo 和TRIzol(Invitrogen,美國(guó));2×pro Taq HS PCR預(yù)混液,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和2× SYBR Green Pro Taq HS Premix(湖南艾科瑞,中國(guó));4×SDS 上樣緩沖液(loading buffer)(TaKaRa,日本);miR-34a-5p mimic、mimic NC、si-SIRT1(廣州銳博公司,中國(guó));鼠抗GAPDH抗體、鼠抗SIRT1抗體(Proteintech,中國(guó));兔抗eNOS抗體、p-eNOS抗體、VEGFA抗體(Abcam,英國(guó));BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒、蛋白質(zhì)Marker (賽默飛世爾公司,美國(guó));PVDF膜(Whatman,英國(guó))。ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒(millipore,美國(guó))。RIP試劑盒(廣州伯信生物公司,中國(guó))。其他涉及的生化試劑均為進(jìn)口分裝或國(guó)產(chǎn)分析純。PCR引物由廣州睿博公司合成(Table1)。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞用含10%胎牛血清和100 μg/mL青霉素/鏈霉素的ECM培養(yǎng)基,在37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行恒溫培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)更換新鮮培養(yǎng)基,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到90%時(shí)進(jìn)行傳代,取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞腺病毒感染,mimic轉(zhuǎn)染和功能檢測(cè)。

1.4 重組腺病毒的制備

SLIT1 3′UTR的序列來(lái)自其mRNA的3′端非翻譯區(qū)。在pAd-Track-cmv載體中的多克隆位點(diǎn)中定向插入SLIT1 3′UTR的模板DNA,在BJ5183大腸桿菌中與腺病毒骨架質(zhì)粒pAd-Easy-I進(jìn)行重組。重組成功后SLIT1 3′UTR腺病毒質(zhì)粒被PacⅠ內(nèi)切酶線性化,并在HEK293細(xì)胞中包裝、擴(kuò)增腺病毒。實(shí)驗(yàn)時(shí)以rAd-GFP作為對(duì)照組腺病毒(SLIT1 3′UTR和rAd-GFP的MOI均是5)。

1.5 SLIT1 3′UTR腺病毒感染與分組

0.25% EDTA胰酶消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)的細(xì)胞,以1～3×104/mL密度接種于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)密度至60% ～ 70%時(shí)進(jìn)行病毒感染,分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別感染SLIT1 3′UTR腺病毒和GFP空載體腺病毒,4 h時(shí)補(bǔ)加含10%胎牛血清的F12培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),24 h后檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.6 劃痕法檢測(cè)細(xì)胞增殖與遷移能力

選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)的細(xì)胞,用0.25% EDTA胰酶消化細(xì)胞,以6～9×104/mL/孔的細(xì)胞接種于6孔板中,待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)密度至80% ～ 90%時(shí)進(jìn)行劃痕處理,倒置顯微鏡下觀察并拍照,置于37 ℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng),24 h后倒置顯微鏡觀察相同位置并拍照。

1.7 細(xì)胞成管腔能力測(cè)定

取250 μL Matrigel膠與DMEM培養(yǎng)基1∶1比例混合后鋪于12孔板中,置于37 ℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育4 h使膠凝固,每孔加入1 mL細(xì)胞數(shù)為5×106的細(xì)胞懸液,6 h后倒置顯微鏡下觀察并拍照,對(duì)管腔結(jié)構(gòu)進(jìn)行量化分析。

1.8 RT-qPCR檢測(cè)

利用Trizol法提取人心肌組織或者HAECs總RNA,使用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度和純度。取2 μg總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后得到cDNA,通過(guò)qPCR檢測(cè)SLIT1轉(zhuǎn)錄本、eNOS和VEGFAmRNA表達(dá)水平。另外取1 μg總RNA,加入0.2 μL 特異miRNA RT引物、5 μL 5× Prime Script RT 緩沖液、1.25 μL RT Enzyme Mix進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,得到成熟體cDNA,以其為模板進(jìn)行qPCR反應(yīng),以U6作為檢測(cè)內(nèi)參照檢測(cè)miR-27b-3p、130a-3p、34a-5p、128-3p、-7-5p表達(dá)水平。在vii A7 Quantitative PCR System(Applied Biosystems,Carlsbad,CA)進(jìn)行 PCR 反應(yīng)和結(jié)果分析。利用2-ΔCt或2-ΔΔCt法計(jì)算上述mRNA轉(zhuǎn)錄本和miRNAs的相對(duì)表達(dá)水平。本文所用PCR引物序列見(jiàn)Table1。

Table 1 The PCR primers sequences

1.9 Western 印跡分析

用PBS清洗細(xì)胞,棄去PBS后取適量體積的RIPA裂解液裂解細(xì)胞(加入蛋白酶抑制劑),冰上裂解細(xì)胞30 min,將裂解液轉(zhuǎn)移至EP管中,于13 000×g轉(zhuǎn)速下4 ℃離心10 min,收集上清液BCA法測(cè)量樣品蛋白質(zhì)濃度。取20 μg蛋白質(zhì),加入4×SDS上樣緩沖液混勻,99 ℃變性10 min,再進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,將凝膠中的蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)至PVDF膜,5%脫脂牛奶封閉1 h,分別用相應(yīng)的Ⅰ抗p-eNOS(1∶1 000)、eNOS(1∶1 000)、VEGFA(1∶1 000)、GAPDH(1∶5 000)和SIRT1(1∶1 000)4 ℃孵育過(guò)夜。TBST漂洗10 min×3次,用相應(yīng)的Ⅱ抗(1∶5 000)室溫孵育1 h。二抗孵育完成,TBST漂洗10 min×3次,超靈敏化學(xué)發(fā)光成像儀ECL顯影,使用Image J軟件進(jìn)行圖像灰度分析,采用目的蛋白質(zhì)/內(nèi)參的灰度值比值比較蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,細(xì)胞內(nèi)參照為GAPDH。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差( mean ±SD) 表示,采用GraphPad Prism 9. 0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩兩比較采用LSDt檢驗(yàn)多組間均數(shù)比較先進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn),方差齊性檢驗(yàn)后采用單因素方差分析,并用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLIT1 3′UTR在肥厚型心肌病人心肌中的表達(dá)

RT-qPCR檢測(cè)HCM病人心肌組織SLIT1 5′UTR、SLIT1 CDS和SLIT1 3′UTR的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與健康器官捐獻(xiàn)者相比,HCM病人心肌中SLIT1 5′UTR水平無(wú)顯著變化(Fig.1A),SLIT1 CDS水平顯著升高(P<0.01, Fig.1B),而SLIT1 3′UTR水平顯著降低(P<0.05, Fig.1C)。而在相對(duì)表達(dá)水平上,SLIT1 3′UTR比SLIT1 5′UTR和SLIT1 CDS水平高出1個(gè)數(shù)量級(jí)。RT-qPCR結(jié)果顯示,在3種人源性的細(xì)胞中,包括人心房來(lái)源的成纖維細(xì)胞(human atrial fibroblasts, HAFs)、人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAECs)和人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞來(lái)源心肌細(xì)胞(induced pluripotent stem cell derived cardiomyocytes, ips-MC),SLIT1 3′UTR表達(dá)水平顯著高于SLIT1 CDS(Fig.1D)。利用糖氧剝奪實(shí)驗(yàn)(oxygen and glucose deprivation, OGD)處理HAECs,發(fā)現(xiàn)12 h和24 h的OGD處理均能有效增加HAECs中SLIT1 3′UTR水平(Fig.1E)。

Fig.1 The level of SLIT1 3′UTR was decreased in the myocardium of HCM patients

2.2 過(guò)表達(dá)狹縫引導(dǎo)配體1 3′UTR促進(jìn)eNOS和VEGFA表達(dá),增加內(nèi)皮細(xì)胞遷移和成管腔能力

利用SLIT1 3′UTR重組腺病毒感染HAECs,觀察到HAECs有充分的綠色熒光蛋白(GFP)共表達(dá),提示SLIT1 3′UTR在HAECs中充分表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果證實(shí),SLIT1 3′UTR表達(dá)水平在HAECs中顯著升高(Fig.2A)。過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs中與血管生成相關(guān)的eNOS和VEGFAmRNA表達(dá)顯著升高(P<0.01, Fig.2B),進(jìn)一步的蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs中p-eNOS、eNOS和VEGFA蛋白質(zhì)水平也一致的顯著升高(P<0.01,P<0.001, Fig.2C)。

Fig.2 Overexpression of SLIT1 3′UTR promoted the migration and tube formation activities of endothelial cells

細(xì)胞劃痕結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs遷移能力顯著增加(P<0.01, Fig.2D)。將腺病毒介導(dǎo)過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs鋪于Matrigel基質(zhì)膠上進(jìn)行成管腔實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs體外成管腔能力顯著提高(P<0.01,P<0.001,Fig.2E)。

2.3 狹縫引導(dǎo)配體1 3′UTR可特異結(jié)合miR-34a-5p

序列分析(http//starbase.sysu.edu.cn/starbase2/index.php)結(jié)果顯示,SLIT1 3′UTR序列上有多個(gè)潛在miRNA結(jié)合位點(diǎn)(Fig.3A)。利用腺病毒介導(dǎo)在HAECs中過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR,RT-qPCR結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HAECs中,miR-128-3p,-34a-5p,-27b-3p水平顯著降低(P<0.05,P<0.01, Fig3B)。

Fig.3 SLIT1 3′UTR served as a molecular sponge for miR-34a-5p

Fig.4 SLIT1 3′UTR promoted the migration and tube formation activities of endothelial cells by targeting miR-34a-5p/SIRT1 axis

先行在HAECs中過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR,利用靶向SLIT1 3′UTR特異的生物素標(biāo)記寡核苷酸探針富集HAECs中SLIT1 3′UTR,提取RNA并檢測(cè)SLIT1 3′UTR結(jié)合的相關(guān)miRNA水平。RAP的結(jié)果顯示,SLIT1 3′UTR可有效地結(jié)合miR-128-3p和miR-34a-5p (P<0.05P<0.01, Fig3C)。

為了進(jìn)一步證實(shí)SLIT1 3′UTR與miR-34a-5p的結(jié)合作用,利用Ago2抗體進(jìn)行RIP檢測(cè),結(jié)果顯示,Ago2能夠同時(shí)下拉到miR-34a-5p和SLIT1 3′UTR (P<0.01,P<0.001, Fig3D),進(jìn)而明確了SLIT1 3′UTR和miR-34a-5p間的結(jié)合作用。RT-qPCR結(jié)果顯示,在HAECs中轉(zhuǎn)染miR-34a-5p能分別有效降低SLIT1 CDS和SLIT1 3′UTR水平(P<0.05,P<0.01, Fig3E,3F)。

2.4 狹縫引導(dǎo)配體1 3′UTR通過(guò)結(jié)合miR-34a-5p上調(diào)SIRT1調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞表型

既往研究中,我們已經(jīng)證實(shí)SIRT1是miR-34a-5p的下游靶基因[11],Western 印跡結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-34a-5p 的HAECs中SIRT1表達(dá)顯著降低(P<0.001, Fig 4A),并能有效抑制過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR引起的HAECs中SIRT1升高(P<0.05, Fig 4A)。

為了進(jìn)一步明確下游靶基因SIRT1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)作用,本文利用siRNA技術(shù)敲減HAECs中SIRT1表達(dá),在HUVECS中過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR,再分別轉(zhuǎn)染miR-34a-5p和靶向SIRT1的siRNA,檢測(cè)miR-34a-5p和SIRT1 siRNA(si-SIRT1)對(duì)過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR的HUVECS表型的影響。Western 印跡結(jié)果顯示,miR-34a-5p和si-SIRT1均一致性的抑制過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR誘導(dǎo)的HAECs中p-eNOS、eNOS、VEGFA和SIRT1的水平升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001 Fig. 4B)。劃痕和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管腔結(jié)果顯示,miR-34a-5p和si-SIRT1均可有效抑制SLIT1 3′UTR促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移(P<0.01, Fig. 4C)和血管內(nèi)皮細(xì)胞成管腔作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001, Fig. 4D)。

3 討論

3′UTR是mRNA的非編碼區(qū)[12],與酵母細(xì)胞相比,人類3′UTR的長(zhǎng)度比酵母細(xì)胞高出10倍,而編碼區(qū)的長(zhǎng)度在兩者之間卻是相似的,這提示3′UTR在高等生物中發(fā)揮關(guān)鍵作用[13]。越來(lái)越多的研究表明,3′UTR介導(dǎo)了多種疾病發(fā)生過(guò)程,包括新冠肺炎,強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良和癌癥等[14-16]。本文發(fā)現(xiàn),人心肌中SLIT1 3′UTR水平顯著高于SLIT1 5′UTR和SLIT1 CDS,該結(jié)果與以往發(fā)現(xiàn)心衰病人心肌中Ckip-1 3′UTR高于Ckip-1 CDS水平的報(bào)道[8]相似,但具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。

在生理性心肌肥厚中,微血管新生速度和心肌肥厚的程度相適應(yīng),在病理性心肌重構(gòu)中雖然伴有微血管的新生,但是血管新生速度遠(yuǎn)低于心肌細(xì)胞對(duì)血供需求增加的速度[17,18]。血管生成在缺氧損傷后迅速發(fā)生,而內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié)對(duì)于維持新生血管穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要[19]。本文證實(shí),HCM病人心肌中SLIT1 3′UTR表達(dá)降低,在功能上,SLIT1 3′UTR具有促進(jìn)血管生成相關(guān)基因eNOS和VEGFA的表達(dá),以及促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和成管腔能力,提示SLIT1 3′UTR具有促進(jìn)血管再生的作用,通過(guò)提高SLIT1 3′UTR水平可能有利于改善血運(yùn)重建,減輕心肌肥厚。

本文通過(guò)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)到了5個(gè)可能與SLIT1 3′UTR有結(jié)合作用的miRNA,通過(guò)RAP和RIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)了SLIT1 3′UTR與miR-34a-5p和miR-218-3p間特異性的結(jié)合作用。定量檢測(cè)結(jié)果顯示,HAECs中miR-34a-5p表達(dá)水平和SLIT1 3′UTR結(jié)合miR-34a-5p的能力均一致高過(guò)miR-218-3p,因此,本文重點(diǎn)關(guān)注SLIT1 3′UTR是否通過(guò)結(jié)合miR-34a-5p發(fā)揮對(duì)HAECs的表型調(diào)節(jié)作用。既往研究證實(shí),抑制miR-34a-5p可上調(diào)ZEB1(Zinc finger E-box binding homeobox 1)表達(dá),逆轉(zhuǎn)缺氧誘導(dǎo)的JAK/STAT和PI3K/AKT通路中磷酸化激酶的減少,從而保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷[20]。本文報(bào)道了SIRT1是miR-34a-5p的下游靶基因[11],本文結(jié)果證實(shí),SLIT1 3′UTR可以作為分子海綿吸附miR-34a-5p,并特異上調(diào)SIRT1表達(dá)。

內(nèi)皮SIRT1缺失或SIRT1失活經(jīng)常伴隨著許多心血管疾病[21]。Das等人發(fā)現(xiàn),煙酰胺單核苷酸(NMN)可以增強(qiáng)SIRT1的活性,上調(diào)SIRT1的表達(dá),促進(jìn)血管生成并提高毛細(xì)血管的密度來(lái)改善老年小鼠的血流量,同時(shí)提高耐力[22]。eNOS主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),是細(xì)胞功能的中樞調(diào)節(jié)因子,參與維持內(nèi)皮穩(wěn)態(tài),保持血管擴(kuò)張,控制血壓,并具有許多其他血管保護(hù)作用[23,24]。有研究證實(shí),SIRT1可與eNOS直接相互作用,并激活eNOS[25,26],與之相符,本文發(fā)現(xiàn),miR-34a-5p和SIRT1 siRNA可降低HAECs中eNOS和p-eNOS水平,而過(guò)表達(dá)SLIT1 3′UTR能顯著升高eNOS和p-eNOS水平。因此,本文證實(shí)miR-34a-5p/SIRT1軸介導(dǎo)了SLIT1 3′UTR發(fā)揮促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和管腔生成的作用。

綜上所述,本文證實(shí)SLIT1 3′UTR可以特異性吸附miR-34a-5p,通過(guò)miR-34a-5p/SIRT1軸促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移與血管新生。在后續(xù)研究中,我們將進(jìn)一步在整體動(dòng)物水平研究SLIT1 3′UTR促進(jìn)血管新生的作用機(jī)制,為進(jìn)行基于3′UTR為干預(yù)靶點(diǎn)的心肌肥厚的治療研究提供科學(xué)資料。