顏紅嬌，楊定法，趙聲蘭

云南中醫(yī)藥大學，藥食資源開發(fā)實驗室（昆明 650500）

核桃仁，為胡桃科植物胡桃Juglans regiaL.的干燥成熟種子[1]，是一種藥食同源植物[2]，具有豐富的營養(yǎng)價值和藥理作用[3]。通過抗氧化[4]、調(diào)節(jié)海馬體中的NMDAR[5]、降低海馬體中AchE水平[6]等改善記憶。另外，核桃仁還具有降糖[7]、降脂[8]、護肝[9]、預(yù)防心腦血管疾病[10]等作用。在中醫(yī)上，核桃也被認為具有溫補腎陽、潤肺肝、補益氣血、益智開發(fā)腦力等功效，常與其他藥物配伍以改善人體由于氣血兩虛導致的各類疾病，如國家衛(wèi)生健康委藥品標準中藥成方制劑收錄的理氣舒心片[11]、二仙口服液、參茸延齡片等，以及中國藥典收錄的培坤丸、復方皂礬丸[12]等。試驗將自制核桃醬用于氣血兩虛小鼠，通過臟器指數(shù)、血常規(guī)檢測等初步探討其補氣血作用。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

SPF級昆明種雄性小鼠60只，6～8周齡，體重20±2 g，云南洛宇生物科技有限公司，許可證編號SYXK（滇）K2017-0005。

1.2 藥物

核桃醬配方中的所有原料脫皮核桃仁（云南其眾食品有限公司）；龍眼肉、人參、當歸、蘆根（廣東逢春制藥有限公司）；菊粉、低聚果糖（江門市德昂生物科技有限公司）；蜂蜜（北京百花蜂產(chǎn)業(yè)科技發(fā)展公司）。上述材料由線上購得，經(jīng)核實均屬于道地藥材。環(huán)磷酰胺（四川綠葉制藥股份有限公司，安道生）；乙酰苯肼（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。

1.3 試驗儀器與設(shè)備

獸用全自動血液細胞分析儀（BC-2800Vet，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；動物實驗跑臺（MH19-DSPT-202，上海富康達有限公司）。

1.4 試驗方法

1.4.1 氣血兩虛小鼠模型的建立及給藥

模型的建立：小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，將隨機分為5組，每組12只，分別名為空白組、模型組、補氣血核桃醬低劑量組、補氣血核桃醬中劑量組、補氣血核桃醬高劑量組。除空白組外，所有小鼠在1～7 d均在實驗跑臺上進行跑步疲勞試驗，電流刺激強度4.5 mA，并采用人為驅(qū)趕方式確保每只小鼠在跑道上跑步，直至小鼠最后寧愿待在電流刺激區(qū)受電擊也不愿或不能上跑道跑步為止。在第2和第4天給4個小組小鼠分別皮下注射的乙酰苯肼劑量為20和40 mg/kg。在第4天開始到第7天的4 d中，每天腹腔注射環(huán)磷酰胺劑量為50 mg/kg。

給藥：從造模第1天開始給藥，至第13天結(jié)束?？瞻讓φ战M和模型組給與等體積的生理鹽水。

1.4.2 指標檢測

1.4.2.1 小鼠跑步力竭試驗

小鼠在處死的前1 d，通過動物實驗跑臺，考察小鼠的耐疲勞能力。具體方法：讓小鼠在動物實驗跑臺上跑步，直至小鼠最后寧愿待在電流刺激區(qū)受電擊也不愿或不能上跑道跑步為止，記錄小鼠的跑步路程。

1.4.2.2 小鼠外周血象檢測

在最后一次注射完環(huán)磷酰胺的第6天，摘眼球取血，小鼠血液放置在紫色EDTA-2抗凝管中并輕搖10～20次，防止溶血或凝血，用獸用血液分析儀檢測紅細胞數(shù)目、血紅蛋白濃度。

1.4.2.3 其他指標

1.4.2.3.1 臟器指數(shù)

小鼠脫頸處死，取小鼠胸腺和胰腺并稱重，于液氮中速凍5 min以上再轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存。

1.4.2.3.2 體重

分別記錄小鼠造模前、造模后、處死前的體重。

1.4.2.3.3 肛溫

在處死前1 d，按照體溫計說明書測量小鼠肛溫并做記錄。

1.4.2.3.4 攝食量、飲水量

以小鼠處死前1 d的食量和水量減去處死時剩余的食量和水量為小鼠24 h的攝食量和飲水量。

2 結(jié)果與分析

2.1 體重增長量

如圖1所示，與正常組相比，模型組小鼠體重顯著負增長。與模型組相比，給藥組只有中劑量組能維持正增長，但與正常組相比仍有顯著差距。說明產(chǎn)品尚不能完全遏制乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺導致的體重減輕。

圖1 補氣血核桃醬對小鼠體重增長量的影響

2.2 力竭跑步路程、攝食量、飲水量

如表1和圖2所示，與正常組相比，模型組的跑步路程、攝食量、飲水量顯著降低。與模型組相比，除補氣血核桃醬低劑量組的攝食量有顯著差異外，其余給藥的3個劑量組在跑步路程、攝食量、飲水量數(shù)據(jù)上差異不顯著。

表1 補氣血核桃醬對小鼠力竭跑步路程、攝食量、飲水量的影響

圖2 補氣血核桃醬對小鼠力竭跑步路程、攝食量、飲水量的影響

2.3 肛溫

如圖3所示，正常組小鼠的平均肛溫為36.96 ℃，模型組只有35.05 ℃，說明該模型能顯著降低小鼠的肛溫，而在給藥后，給藥組均能不同程度提高小鼠的肛溫，具有顯著意義。

圖3 補氣血核桃醬對小鼠肛溫的影響

2.4 臟器指數(shù)

如圖4所示，與正常組相比，模型組小鼠胸腺指數(shù)顯著降低，核桃醬中劑量組能顯著抑制小鼠的胸腺萎縮。

圖4 補氣血核桃醬對小鼠胸腺指數(shù)的影響

2.5 外周血象

如圖5所示，與正常組相比，模型組小鼠紅細胞數(shù)目和血紅蛋白濃度顯著負增長。與模型組相比，3個給藥組均能顯著升高由造模藥引起的紅細胞數(shù)目和血紅蛋白濃度的降低。

圖5 補氣血核桃醬對小鼠外周血象的影響

3 討論與結(jié)論

試驗采用乙酰苯肼+環(huán)磷酰胺+跑步力竭以建立小鼠的氣虛雙虛模型，通過體重增長量、肛溫、跑步力竭路程、攝食量、飲水量來考察補氣血核桃醬對小鼠氣虛的改善作用，通過對外周血象的檢測和胸腺脾臟指數(shù)來評判補氣血核桃醬對小鼠血虛的改善作用。

該模型能顯著降低小鼠的體重增長量、攝食量、飲水量、胸腺指數(shù)、紅細胞數(shù)目、血紅蛋白濃度、肛溫、力竭跑步距離。然而，該產(chǎn)品并不能顯著改善小鼠的攝食量、飲水量、力竭跑步距離這些氣虛指標，僅有中劑量組能夠抑制造模藥帶來的體重下降。然而，雖然氣虛指標效果不顯著，但是通過對小鼠的肛溫檢測，該產(chǎn)品能顯著升高由造模藥引起的肛溫下降情況。