彭慧斌朱衛(wèi)偉 侯永杰

（河南省安陽市腫瘤醫(yī)院檢驗科，河南 安陽 455000）

肝臟屬于人體重要代謝器官之一，于物質(zhì)合成、轉(zhuǎn)化、儲存、分泌以代謝調(diào)節(jié)等方面起到重要作用[1]。肝纖維化是肝臟內(nèi)彌散細胞外基質(zhì)的過度沉積，屬于慢性肝損傷的一種修復(fù)反應(yīng)[2]。肝纖維化為病毒性肝炎、酒精性肝炎等慢性肝病進展的一種病理基礎(chǔ)，屬于肝硬化早期階段以及必經(jīng)階段，與肝癌的發(fā)生具有關(guān)聯(lián)性[3]。肝纖維化為多個慢性肝病進展過程中持續(xù)修復(fù)損傷引起肝細胞外基質(zhì)彌漫性沉積與異常分布的一種病理狀況，進一步可損害肝小葉結(jié)構(gòu)，形成假小葉，最終進展成肝硬化，但臨床癥狀為肝功能減弱、形成門靜脈高壓時，一般不可逆轉(zhuǎn)[4-5]。因此早期診斷與評估肝纖維化的病情程度，并針對性予以有效的防治措施，可減緩肝纖維化的進展，降低病情發(fā)展發(fā)生風險，甚至能逆轉(zhuǎn)纖維化。調(diào)查報道指出，肝纖維化未進入肝硬化前存在可逆性，故早期診斷與辨別肝纖維化對于疾病轉(zhuǎn)歸具有積極意義[6]。

肝臟為血清25-羥維生素D（25-hydroxyvitamin D，25-（OH）D）產(chǎn)生場所，且肝內(nèi)多個非實質(zhì)性細胞為維生素D 的活性形式作用的靶細胞，故維生素D與肝功能存在緊密的關(guān)聯(lián)性[7]。肝纖維化者由于病理性原因可引起腸道內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)以及代謝狀況發(fā)生改變[8]?；诖耍P者分析腸道菌群參數(shù)、25-（OH）D3在肝纖維化診斷病情評估中價值，以期為臨床早期診療提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支持，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2020 年1 月~2022 年12 月期間收治的肝炎患者98 例作為研究對象。

納入條件：（1）經(jīng)過肝穿刺病理檢查、血清學(xué)檢查、肝功能檢查等診斷為肝炎者；（2）知情本研究，并簽署同意議書；（3）經(jīng)過醫(yī)學(xué)倫理委員會審核同意（4）臨床資料不完整。排除條件：（1）1 個月應(yīng)用維生素協(xié)D 制劑與免疫調(diào)節(jié)劑；（2）中途自愿退出；（3）無法耐受活檢穿刺；（4）凝血功能障礙；（5）合并認知障礙或者精神疾病，而無法配合；（6）無法準確描述主訴；（7）伴心臟、腎臟等其他重要臟器功能障礙；（8）伴有惡性腫瘤。其中男/女比例為50/48，平均年齡48.12±5.53 歲，Child-Pugh 分級為18 例A級、63 例B 級、17 例C 級，平均體質(zhì)量指數(shù)20.85±1.19 kg·m-2，配偶狀況為75 例無配偶、23 例有配偶，民族為漢族69 例、少數(shù)民族30 例，學(xué)歷水平為22 例高中及以下、76 例高中以上，居住地為46 例農(nóng)村、52 例城鎮(zhèn)，不良生活習(xí)慣為70 例飲酒史、62 例吸煙史，平均收縮壓136.25±17.92 mmHg，平均舒張壓78.01±10.34 mmHg，平均心率72.25±5.67 次·min-1。

1.2 方法

1.2.1 腸道菌群檢測

收集0.5 g 的新鮮糞便添加至45 μl 的無菌生理鹽水中，依據(jù)10 倍稀釋法持續(xù)稀釋到10-9；分別取10-1、10-3、10-5、10-7以及10-9稀釋液50 mL，依次接種至選擇性培養(yǎng)基；選2 種需氧菌（例如腸桿菌和腸球菌）、1 種厭氧菌（雙歧桿菌），其中需氧菌放到35℃孵育箱中進行培養(yǎng)，持續(xù)培養(yǎng)24 h，而厭氧菌持續(xù)培養(yǎng)48 h，利用抽氣換氣法進行細菌培養(yǎng)；利用VITEKAMS 型號全自動微生物鑒定系統(tǒng)（法國生物梅里埃公司）實施細菌鑒定；用菌落數(shù)對數(shù)值表示結(jié)果，測定值用log·g-1表示。

1.2.2 血清25-（OH）D3水平檢測

取晨起空腹外周肘靜脈血3 mL，離心（轉(zhuǎn)速3500 r·min-1，時長10 min，半徑8 cm）取上清液，于-20℃下保存待檢，以免多次凍融；通過電化學(xué)發(fā)光全自動免疫分析儀（型號為羅氏Cobas E601）測量血清25-（OH）D3水平。

1.2.3 肝纖維化分期[7]

S0 期：無纖維化；S1 期：匯管區(qū)出現(xiàn)擴大，同時合并纖維增生；S2 期：匯管區(qū)鄰近出現(xiàn)纖維化，但保存小葉結(jié)構(gòu)；S3 期：纖維間隔伴小葉結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂，尚未進展至肝硬化；S4 期：重度肝纖維化或者確認為肝硬化。其中S0 期19 例、S1 期22 例、S2 期25 例、S3 期18 例、S4 期14 例。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料用(±SD)表示，多組間相比通過單因素方差予以分析，兩兩組間對比通過LSD-t 進行檢驗，兩組間相對比通過獨立樣本t進行檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗；采用受試者工作特征（Receiver operating characteristic curve，ROC）曲線，獲取曲線下面積（Area under curve，AUC）、置信區(qū)間、敏感度、特異度及cut-off 值；相關(guān)性通過Spearman 進行分析；雙側(cè)檢驗，檢驗標準為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 纖維化與無纖維化患者腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平

纖維化患者雙歧桿菌、血清25-（OH）D3水平低于無纖維化患者，腸桿菌、腸球菌高于無纖維化患者（P＜0.05），見表1。

表1 纖維化與無纖維化患者腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平對比(±SD)

表1 纖維化與無纖維化患者腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平對比(±SD)

注：與纖維化相比，aP＜0.05。

?

2.2 腸道菌群參數(shù)聯(lián)合血清25-（OH）D3水平對肝纖維化的診斷價值

以無纖維化者作為陰性標本，以纖維化者作為陽性標本，繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、25-（OH）D3聯(lián)合應(yīng)用診斷肝纖維化的 AUC 為 0.820，最佳敏感度與特異度分別為88.61%、82.35%（P＜0.05），見表2。

表2 腸道菌群參數(shù)聯(lián)合血清25-（OH）D3水平對肝纖維化的診斷價值

2.3 不同腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平發(fā)生肝纖維化的危險度

以腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、25-（OH）D3的cut-off 值作為分界值，將肝炎患者分為高水平與低水平，結(jié)果顯示，高水平雙歧桿菌、腸桿菌、腸球菌以及血清25-（OH）D3水平肝炎患者發(fā)生肝纖維化的危險度為低水平者的0.426 倍、1.974 倍、2.123 倍、0.375倍（P＜0.05）。見表3。

表3 不同腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平發(fā)生肝纖維化的危險度

2.4 不同肝纖維化程度的腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平

不同肝纖維化程度雙歧桿菌、血清25-（OH）D3水平對比：S0 期＞S1 期＞S2 期＞S3 期＞S4 期，不同肝纖維化程度的腸桿菌、腸球菌對比，S0 期＜S1期＜S2 期＜S3 期＜S4 期（P＜0.05），具體見表4。

表4 不同肝纖維化程度的腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平對比(±SD)

表4 不同肝纖維化程度的腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平對比(±SD)

注：與S0 期對比，aP＜0.05；與S1 期對比，bP＜0.05；與S2 期對比，cP＜0.05；與S3 期對比，dP＜0.05。

?

2.5 腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平與肝纖維化程度相關(guān)性

經(jīng)Spearman 分析顯示，雙歧桿菌、25-（OH）D3與肝纖維化分期成反比，腸桿菌、腸球菌與肝纖維化分期成正比（P＜0.05）。見表5、圖1。

圖1 雙歧桿菌、腸桿菌、腸球菌、25-（DH）-D3 與肝纖維化程度相關(guān)性

表5 腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平與肝纖維化程度相關(guān)性

3 討論

維生素D 為脂溶性維生素之一，為類固醇化合物，屬于一種激素前提，對于保持骨鈣平衡起到重要作用[10]。內(nèi)源性和外源性維生素D 經(jīng)過血液流至肝臟之后，于肝臟分泌細胞色素P450 的參與下，實現(xiàn)25 號位羥化，產(chǎn)生其活性形式25-（OH）D[11]。報道指出，25-（OH）D 對于免疫系統(tǒng)具有重要調(diào)節(jié)作用，具有抗纖維化與抗炎的功能，和多個肝臟病變的病情進展、治療均具有緊密關(guān)聯(lián)性[12]。本研究結(jié)果指出，肝纖維化患者血清25-（OH）D3水平比無肝纖維化患者低，且血清25-（OH）D3水平低的肝炎患者發(fā)生肝纖維化風險高，經(jīng)相關(guān)性分析顯示，血清25-（OH）D3水平與肝纖維化程度成反比，表明血清25-（OH）D3水平可作為反映肝纖維化病情的指標之一，其原因為，維生素D 能通過阻滯成纖維細胞轉(zhuǎn)化生長因子-1 分泌來減緩成纖維細胞與血管平滑肌細胞增殖，同時還能通過釋放與分泌基質(zhì)金屬蛋白酶以分解細胞外基質(zhì)，以免細胞外基質(zhì)與膠原沉積于肝臟內(nèi)，引發(fā)肝纖維化[13]。

肝臟和腸道生理上呈雙向溝通，即肝臟通過膽管進行膽汁排泄與其他生物活性介質(zhì)和腸道溝通，加上代謝營養(yǎng)物需要通過門靜脈運輸?shù)礁闻K內(nèi)，與此同時腸道細菌與其產(chǎn)物、內(nèi)毒素以及炎性介質(zhì)也能夠通過門靜脈予以轉(zhuǎn)運，導(dǎo)致肝臟極易受到腸道微環(huán)境的影響而產(chǎn)生病理性變化[14-15]。本研究指出，纖維化患者雙歧桿菌低于無纖維化者，腸桿菌、腸球菌高于無纖維化患者，并與肝纖維化的病情程度具有緊密的關(guān)聯(lián)性，由此可知，動態(tài)監(jiān)測腸道菌群變化，可有助于評估臨床病情。

此外，筆者通過ROC 曲線分析腸道菌群參數(shù)、血清25-（OH）D3水平聯(lián)合診斷肝纖維化的價值，結(jié)果表明，聯(lián)合應(yīng)用時AUC 為0.820，提示腸道菌群參數(shù)聯(lián)合血清25-（OH）D3水平對肝纖維化診斷效能高，可為臨床早期防治肝纖維化提供依據(jù)。

綜上，肝纖維化發(fā)生、進展與腸道菌群參數(shù)與維生素D 有關(guān)，動態(tài)監(jiān)測腸道菌群參數(shù)與維生素D 水平變化，有助于肝纖維化病情變化、診斷肝纖維化提供依據(jù)。