袁崗 巨虎 肖宗宇 李文輝 曹立新 惠超杰 （青海大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，西寧 810001）

腦膠質(zhì)瘤是最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤之一，平均每10萬人中有10～20人患病，其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的1%～3%，晚期患者的五年生存率不足5%［1］。目前臨床上主要通過手術(shù)切除并輔以放化療等手段對該病進(jìn)行治療，但這些傳統(tǒng)治療方法均在不同程度上存在治愈率低、復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差等問題［2］。因此尋找其他輔助治療方案以延長患者生存期，改善預(yù)后是目前亟待解決的難題。自然殺傷細(xì)胞激活受體（NK cell activated receptor，NKG2D）是一種主要表達(dá)于NK細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞以及γδ T細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞表面的活化性受體［3］。NKG2D受體可識別一系列親和力不同、結(jié)構(gòu)多樣的配體，包括主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ鏈相關(guān)基因A/B（major histocompatibility complex classⅠchain-related gene A/B，MICA/B）以及6種UL16結(jié)合蛋白（UL16 binding protein 1～6，ULBP1～6）。NKG2D通過與位于靶細(xì)胞表面的配體結(jié)合活化NK細(xì)胞使其分泌細(xì)胞因子并發(fā)揮殺傷作用。當(dāng)機(jī)體細(xì)胞發(fā)生惡性病變時會反應(yīng)性增加其表面MICA等配體的表達(dá)，從而誘發(fā)NK等免疫效應(yīng)細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的攻擊［4］。微小核糖核酸-10b（micro ribonucleic acid 10b，miR-10b）是位于2號染色體短臂3區(qū)的miR-10家族的主要成員，被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤組織中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移［5］。有報道指出，miR-10b在人正常腦組織中表達(dá)水平較低，而在膠質(zhì)瘤組織中呈高表達(dá)水平，其表達(dá)水平與腫瘤的病理分級呈正相關(guān)，且miR-10b高表達(dá)患者的預(yù)后差、生存時間短，但miR-10b在腦膠質(zhì)瘤的細(xì)胞免疫效應(yīng)和作用機(jī)制尚不清楚［6］。本研究利用體外實(shí)驗(yàn)探究miR-10b介導(dǎo)NKG2D對腦膠質(zhì)瘤的細(xì)胞免疫效應(yīng)和作用機(jī)制，為深入研究miR-10b對腦膠質(zhì)瘤的細(xì)胞免疫效應(yīng)和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251（北京協(xié)和細(xì)胞資源中心，批號：191226）；外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）由健康志愿者提供，經(jīng)青海大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審批通過，倫理審批號：院倫審2021第15號。

1.1.2 藥物與試劑 RPMI164完全培養(yǎng)基（北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司，批號：C11875500BT）；TRIzol試劑（上海聯(lián)邁生物工程有限公司，批號：LM-81027）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（上?？道噬锟萍加邢薰?，批號：KL-TERT-Ra）；免疫磁珠分選（magneticactivated cell sorting，MACS）試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司，批號：CZ020）；四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）溶液（上海創(chuàng)賽科技有限公司，批號：PM10053）；NC inhibitor、miR-10b mimics、miR-10b inhibitor均由美國Cellecta公司設(shè)計合成；異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）/藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）（德國Miltenyi Biotec公司，批號：130-096-158）；鼠抗人NKG2D、MICA、ULBP2和ULBP3，免疫球蛋白G1（immunoglobulin G1，IgG1）抗體（美國Invitrogen公司，批號：191002、191224、200415、200323、191117）；陰性對照（NC inhibitor）、miR-10b模擬物（miR-10b mimics）、miR-10b抑制劑（miR-10b inhibitor）均由美國Cellecta公司設(shè)計合成；實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（RTqPCR）引物均由（克拉瑪爾）上海譜振生物科技有限公司設(shè)計合成。

1.1.3 儀器 Galaxy 48 R型CO2培養(yǎng)箱（德國Eppendorf公司）；Axioscope 5型普通光學(xué)顯微鏡（德國Zeiss公司）；LumascopeTM620型綠色熒光顯微鏡（美國Etaluma公司）；S1000TMDual 48 Well型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀（美國Bio-Rad公司）；NovoCyte型流式細(xì)胞儀（美國Agilent Technologies公司）；SuPerMax 3100型多功能酶標(biāo)儀（上海閃譜生物科技有限公司）；HSC-2015L型高速冷凍離心機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的培養(yǎng)、傳代和分組 將人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251培養(yǎng)于含10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、100 μg/ml鏈霉素和100 U/ml青霉素RPMI1640完全培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)。每2～3 d傳代1次，獲得處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照1.0×105個/ml制備細(xì)胞懸液，并設(shè)置對照組、過表達(dá)組、低表達(dá)組、空白組，每組6個復(fù)孔。對照組、過表達(dá)組、低表達(dá)組分別采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染陰性對照（NC inhibitor）、miR-10b模擬物（miR-10b mimics）、miR-10b抑制劑（miR-10b inhibitor），NC inhibitor正向5'-TCGATCGTAAGCACGC-3'，反向5'-CATGTCAGTACGTACG-3'；miR-10b mimics正向5'-GTCGTACGTACGAATGCA-3'，反向5'-CCTAGACGTAAGTCAGAC-3'；miR-10b inhibitor正向5'-CGTACGTACGATCAGTA-3'，反向5'-TACGTACGATAACGTAG-3'?？瞻捉M予以等量無菌生理鹽水。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后換培養(yǎng)液，分別在普通光學(xué)顯微鏡和綠色熒光顯微鏡下拍照計數(shù)，計算各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染效率（%）=綠色熒光鏡下發(fā)光細(xì)胞數(shù)/普通光鏡下細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.2 RT-qPCR檢測miR-10b表達(dá) 采用TRIzol試劑分別抽提各組細(xì)胞總RNA，利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA），以cDNA為模板進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增。miR-10b正向引物5'-TTAGCGTCAGTACCCGTA-3'，負(fù)向引物5'-CGTACGTACGTACGTACG-3'，產(chǎn)物長度260 bp；β-actin正向引物5'-GGCGTACGAATAGATA-3'，反向引物5'-ATTCGATGCATGATCC-3'，產(chǎn)物長度298 bp。PCR循環(huán)參數(shù)：95 ℃ 15 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，重復(fù)40個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算miR-10b相對表達(dá)量，ΔΔCt=實(shí)驗(yàn)組（Ct樣本-Ct內(nèi)參）-對照組（Ct樣本-Ct內(nèi)參）。

1.2.3 健康志愿者外周血NK細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定 采用密度梯度區(qū)帶離心法分離1例健康志愿者的PBMC，通過MACS法分選NK細(xì)胞，將得到的NK細(xì)胞培養(yǎng)于含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基（含IL-2 1 000 U/ml，青霉素和鏈霉素各100 U/ml）中，按照2×105個/cm2細(xì)胞密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后即為效應(yīng)細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測NK細(xì)胞表面標(biāo)志物CD56。

1.2.4 MTT法檢測不同效靶比時NK細(xì)胞殺傷活性 將效靶比分別為10∶1、20∶1、50∶1和100∶1的NK細(xì)胞和人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251加入96孔板，以10%TritonX-100破壞靶細(xì)胞為最大釋放，以RPMI-1640維持液代替效應(yīng)（或靶）細(xì)胞為自然釋放，同時設(shè)置效應(yīng)細(xì)胞（NK細(xì)胞）孔和靶細(xì)胞（人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251）孔作為對照孔，于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h后每孔加入10 μl 5 mg/ml MTT溶液繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去上清液，每孔加50 μl二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶解，10 min內(nèi)上多功能酶標(biāo)儀（492 nm）檢測各孔吸光度（optical density，OD）值。NK細(xì)胞殺傷活性（%）=（實(shí)驗(yàn)組OD值-靶細(xì)胞自然釋放組OD值-效應(yīng)細(xì)胞自然釋放組OD值）/（靶細(xì)胞最大釋放組OD值-靶細(xì)胞自然釋放組OD值）×100%。

1.2.5 檢測各組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá) 取NK細(xì)胞殺傷活性最高時的效靶比的NK細(xì)胞和人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251混合液，以3 000 r/min（離心半徑6 cm）轉(zhuǎn)速離心10 min，用PBS沖洗3次，按每1×106個NK細(xì)胞1 μg抗體量加入鼠抗人NKG2D抗體，對照管加入鼠抗人抗體IgG1。4 ℃下標(biāo)記30 min，流式細(xì)胞儀檢測NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)情況。

1.2.6 檢測組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá) 取處于對數(shù)生長期的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251，3 000 r/min（離心半徑6 cm）離心10 min，PBS沖洗3次，按每1×106個人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251分別加入1 μg鼠抗人MICA、ULBP2和ULBP3抗體，對照管加入鼠抗人抗體IgG1。4 ℃條件下標(biāo)記30 min，流式細(xì)胞儀檢測各組NK細(xì)胞表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，以單因素方差分析多樣本計量資料±s，每兩樣本差異采用SNK-q檢驗(yàn)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均在85%以上，其中對照組、過表達(dá)組、低表達(dá)組轉(zhuǎn)染效率分別為（93.55±2.05）%、（95.67±3.14）%、（94.18±3.26）%。見圖1。

圖1 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率圖（×100）Fig.1 Transfection efficiency diagram of each group （×100）

2.2 RT-qPCR檢測miR-10b表達(dá) 與對照組和空白組相比，過表達(dá)組miR-10b表達(dá)升高，低表達(dá)組miR-10b表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且對照組與空白組相比miR-10b表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，見表1）。

表1 各組細(xì)胞miR-10b表達(dá)分析（±s，n=6）Tab.1 Analysis of miR-10b expression in each group （±s，n=6）

表1 各組細(xì)胞miR-10b表達(dá)分析（±s，n=6）Tab.1 Analysis of miR-10b expression in each group （±s，n=6）

Note：1）P＜0.05 vs control group；2）P＜0.05 vs blank group；3）P＜0.05 vs over-expressed group.

Groups Control Blank Over-expressed Low-expressed miR-10b 1.05±0.17 1.10±0.15 1.67±0.281）2）0.52±0.091）2）3）38.457＜0.001 F P

2.3 NK細(xì)胞鑒定結(jié)果 NK細(xì)胞的表型檢測顯示，CD56陽性和CD56dim陽性T細(xì)胞各占98.68%和94.74%。見圖2。

圖2 NK細(xì)胞的表型檢測Fig.2 Phenotype detection of NK cells

2.4 NK細(xì)胞殺傷活性結(jié)果 與對照組、空白組相比，過表達(dá)組不同效靶比NK細(xì)胞殺傷活性均降低，低表達(dá)組不同效靶比NK細(xì)胞殺傷活性均增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），各組NK細(xì)胞殺傷活性均隨效靶比升高而升高，組內(nèi)比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且對照組與空白組相同效靶比的NK細(xì)胞殺傷活性比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 NK細(xì)胞殺傷活性比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of NK cells killing activity （±s，n=6）

表2 NK細(xì)胞殺傷活性比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of NK cells killing activity （±s，n=6）

Note：1）P＜0.05 vs control group；2）P＜0.05 vs blank group；3）P＜0.05 vs over-expressed group；4）P＜0.05 vs target ratio 10∶1；5）P＜0.05 vs target ratio 20∶1；6）P＜0.05 vs target ratio 50∶1.

Groups Control Blank Over-expressed Low-expressed Killing activity/%Target ratio 10∶1 Target ratio 20∶1 Target ratio 50∶1 Target ratio 100∶1 51.87±8.644）5）6）51.08±8.554）5）6）33.48±5.051）2）4）5）6）73.35±10.141）2）3）4）5）6）23.150＜0.001 F P 15.56±2.28 14.75±2.30 10.08±1.761）2）22.97±3.931）2）3）23.501＜0.001 24.35±4.044）22.17±3.894）15.05±2.261）2）4）36.16±5.771）2）3）4）26.420＜0.001 35.26±5.414）5）34.05±5.624）5）22.36±3.931）2）4）5）52.26±8.081）2）3）4）5）25.697＜0.001

2.5 各組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá) 與對照組和空白組相比，過表達(dá)組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)降低，低表達(dá)組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且對照組與空白組比較NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖3、表3。

表3 各組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)（±s，n=6，%）Tab.3 Expression of NKG2D on surface of NK cells in each group （±s，n=6，%）

表3 各組NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)（±s，n=6，%）Tab.3 Expression of NKG2D on surface of NK cells in each group （±s，n=6，%）

Note：1）P＜0.05 vs control group；2）P＜0.05 vs blank group；3）P＜0.05 vs over-expressed group.

Groups Control Blank Over-expressed Low-expressed NKG2D 67.62±10.64 65.85±10.93 44.26±7.741）2）98.85±15.421）2）3）22.850＜0.001 F P

2.6 各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá) 與對照組和空白組相比，過表達(dá)組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)均降低，低表達(dá)組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)均增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且對照組與空白組比較人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖4、表4。

表4 各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)（±s， n=6，%）Tab.4 Expressions of MICA， ULBP2 and ULBP3 on surface of human glioma cells U251 in each group（±s，n=6，%）

表4 各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)（±s， n=6，%）Tab.4 Expressions of MICA， ULBP2 and ULBP3 on surface of human glioma cells U251 in each group（±s，n=6，%）

Note：1）P＜0.05 vs control group；2）P＜0.05 vs blank group；3）P＜0.05 vs over-expressed group.

Groups Control Blank Overexpressed Lowexpressed MICA 55.62±9.14 53.67±8.84 34.13±5.221）2）ULBP2 57.06±9.35 55.16±8.92 37.43±5.311）2）UMBP3 51.18±8.34 54.40±8.72 34.53±5.151）2）75.87±11.541）2）3）22.680＜0.001 F P 79.45±10.871）2）3）26.922＜0.001 82.87±12.151）2）3）24.516＜0.001

圖4 各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)Fig.4 Expressions of MICA， ULBP2 and ULBP3 on surface of human glioma cells U251 in each group

3 討論

腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展是一個原癌基因和抑癌基因共同參與的多因素協(xié)同作用的過程，其具體發(fā)病機(jī)制尚不十分清晰。由于腦膠質(zhì)瘤與腦組織無明顯界限，傳統(tǒng)的手術(shù)治療難以完全切除，且血腦屏障對化療藥物滲透的限制作用使腦膠質(zhì)瘤對化療敏感性僅為中度，使得手術(shù)結(jié)合化療治療的模式具有復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差等問題［7］，因此尋求更加有效的治療方法已成為腦膠質(zhì)瘤治療迫切需要解決的問題。

本研究中，各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均在85%以上，說明成功轉(zhuǎn)染人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251。與對照組和空白組相比，過表達(dá)組miR-10b表達(dá)升高、NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)和NK細(xì)胞殺傷活性降低，低表達(dá)組miR-10b表達(dá)降低、NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)和NK細(xì)胞殺傷活性升高，且各組NK細(xì)胞殺傷活性均隨效靶比升高而升高，推測miR-10b過表達(dá)是通過抑制NKG2D的表達(dá)降低NK細(xì)胞殺傷活性，而miR-10b低表達(dá)則是通過促進(jìn)NKG2D的表達(dá)提高NK細(xì)胞殺傷活性。有報道指出，miR-10b在90%以上的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，且miR-10b高表達(dá)患者存在生存期短、預(yù)后差的問題，本研究結(jié)果與上述研究相一致［6］。NK細(xì)胞是機(jī)體重要的天然免疫細(xì)胞，在機(jī)體抗病毒感染及抗腫瘤過程中發(fā)揮免疫監(jiān)視作用，被醫(yī)學(xué)界認(rèn)為是人體免疫的第一道防線。NK細(xì)胞不依賴于抗原的激活即具備對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，其不僅能有效監(jiān)視并控制腫瘤的發(fā)生，而且對抑制腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用［8］。NK細(xì)胞的殺傷活性與其表面的殺傷受體的表達(dá)密切相關(guān)，殺傷受體又分為殺傷活化受體和殺傷抑制受體［9］。NKG2D是NK細(xì)胞表面的主要?dú)罨荏w，NKG2D的高表達(dá)能夠誘導(dǎo)增加NK細(xì)胞的殺傷活性［10］。有研究顯示，在垂體瘤患者中，由于NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)受到抑制，導(dǎo)致NK細(xì)胞的殺傷活性明顯降低［11］。

本研究中，與對照組、空白組相比，過表達(dá)組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)均降低，低表達(dá)組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表達(dá)均升高，說明miR-10b過表達(dá)能明顯降低人腦膠質(zhì)瘤U251表面MICA、ULBP2和ULBP3的表達(dá)，miR-10b低表達(dá)會提高人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3的表達(dá)。人NKG2D配體主要分為MIC和ULBP家族2大類，MIC包括MICA和MICB，ULBP家族包括ULBP1-6共6個成員［12］。MIC多表達(dá)于上皮性腫瘤細(xì)胞表面，在正常組織細(xì)胞中幾乎不表達(dá)，其表達(dá)水平的高低直接關(guān)系到NK細(xì)胞的抗腫瘤活性［13］。MICA是NKG2D受體的一種殺傷活化性配體，MICA的高表達(dá)同時能夠上調(diào)NK細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)［14］。有報道指出NKG2D/MICA介導(dǎo)的免疫監(jiān)視功能可激活NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)［15］。ULBP表達(dá)較廣泛，在多種細(xì)胞、組織和腫瘤均有表達(dá)［16］。病毒尤其是巨細(xì)胞病毒能夠下調(diào)腫瘤特異主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ（major histocompatibility complex classⅠ，MHC-Ⅰ）的表達(dá)，誘導(dǎo)NK細(xì)胞表面的NKG2D受體與病毒感染細(xì)胞表面的ULBP結(jié)合，使NK細(xì)胞表面的活化分子表達(dá)顯著上調(diào)，并刺激NK細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1β（macrophage inflammatory protein-1β，MIP-1β）等細(xì)胞因子，提高NK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷活性［17］。有研究發(fā)現(xiàn)，在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面MICA、ULBP2和ULBP3存在高表達(dá)，且NKG2D通過與人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面的MICA、ULBP2和ULBP3結(jié)合激活NK細(xì)胞的殺傷活化效應(yīng)［18］，本研究結(jié)果與上述報道相一致，但本研究在上述研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了miR-10b對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫效應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。

綜上所述，抑制miR-10b能明顯增加人腦膠質(zhì)瘤U251表面MICA、ULBP2和ULBP3的表達(dá)和NK細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)從而提高NK的細(xì)胞殺傷活性，增強(qiáng)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的免疫效應(yīng)。本研究進(jìn)一步闡釋了miR-10b對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫效應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制，為臨床治療人腦膠質(zhì)瘤藥物的研發(fā)提供了理論依據(jù)。