李娟，石海平，李維民

（1 遂寧市中心醫(yī)院藥學(xué)部，遂寧 629000；2 遂寧市中心醫(yī)院神經(jīng)中心一病區(qū)，遂寧 629000）

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)惡性腫瘤，是膠質(zhì)瘤中侵襲性最強(qiáng)的類(lèi)型，預(yù)后較差，治療方案較少[1]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）使細(xì)胞獲得高遷移和侵襲能力，是腫瘤惡性進(jìn)展的關(guān)鍵步驟，由此參與GBM 的發(fā)生發(fā)展，還會(huì)導(dǎo)致GBM 耐藥性的產(chǎn)生[2]。目前，GBM 的主要治療方法包括手術(shù)、化療、放療和聯(lián)合治療，然而由于其強(qiáng)侵襲性和耐藥性，相當(dāng)大比例的GBM 腫瘤會(huì)復(fù)發(fā)，總生存率仍然很低。因此，發(fā)現(xiàn)新的治療藥物和探索新的干預(yù)靶點(diǎn)可能對(duì)接受GBM 治療的患者具有重要意義。桃葉珊瑚苷（AU）是一種環(huán)烯醚萜化合物，具有抗氧化、抗衰老、抗炎、抗纖維化、抗癌、神經(jīng)保護(hù)等多種生物活性，其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1[3]。已有研究發(fā)現(xiàn)，AU 發(fā)揮對(duì)乳腺癌[4]、肝細(xì)胞癌[5]等多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用。Ras 同源基因家族成員A（RhoA）是Rho 家族中研究最多的三磷酸鳥(niǎo)苷（GTP）酶成員之一，以激活GTP 的形式激活下游效應(yīng)分子，影響細(xì)胞骨架。Rho相關(guān)卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）是RhoA 活性的主要介導(dǎo)者，ROCK 的激活可通過(guò)調(diào)節(jié)肌球蛋白輕鏈激酶磷酸化，導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白骨架重排并伴隨細(xì)胞遷移，最終導(dǎo)致EMT 的發(fā)生[6]。RhoA/ROCK 信號(hào)通路與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其中抑制GBM 中RhoA/ROCK 信號(hào)傳導(dǎo)可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲以及肌動(dòng)蛋白重排[7]。但AU 對(duì)GBM 細(xì)胞活力和EMT 的影響，以及其對(duì)RhoA/ROCK 信號(hào)通路的調(diào)控作用尚不清楚，本研究對(duì)此進(jìn)行探討。

圖1 AU 結(jié)構(gòu)式Fig.1 AU structural formula

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞、動(dòng)物來(lái)源 人GBM 細(xì)胞系：T98、U251、LN299、U87 購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心細(xì)胞庫(kù)。24 只雌性裸鼠BALB/c 小鼠，4 周齡，體質(zhì)量為15～18 g，購(gòu)自武漢貝賽模式生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2022-0029。

1.1.2 主要試劑與儀器 AU（純度>95%，成都曼思特生物科技有限公司）；Y-27632（美國(guó)MedChemExpress公司）；Dulbecco 改良的Eagle’s 培養(yǎng)基（DEME）高糖培養(yǎng)基（北京伊塔生物科技有限公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)器試劑盒（CCK-8）試劑盒（上海酶研生物科技有限公司）；膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）-異硫氰酸熒光素（FITC）/碘化丙啶（PI）試劑盒、二抗（武漢伊萊瑞特生物科技公司）；Transwell 小室（康寧生命科學(xué)有限公司）；Matrigel 膠（北京索萊寶科技有限公司）；一抗基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）2、MMP9、波形蛋白（Vimentin）、上皮鈣黏蛋白（E-cadherin）、神經(jīng)鈣黏蛋白（N-cadherin）、RhoA、ROCK1、ROCK2 和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（美國(guó)Abcam 公司）。酶標(biāo)儀（瑞士Tecan 公司）；流式細(xì)胞儀（德國(guó)Miltenyi Biotec 公司）；顯微鏡（日本Olympus 公司）；電泳儀（美國(guó)Bio-rad 公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將T98、U251、LN299、U87 細(xì)胞置于含有10%胎牛血清（FBS）和青霉素-鏈霉素的DEME高糖培養(yǎng)基中，在37 ℃和5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，待細(xì)胞融合至70%以上時(shí)，胰蛋白酶消化。

1.2.2 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活力 將T98、U251、LN299、U87 細(xì)胞以4×103個(gè)/孔接種到96 孔板中，培養(yǎng)24 h后用0、2.5、5、10、25、50、100 μmol/L 濃度的AU 處理，每孔加入10 μL CCK-8 溶液37 ℃孵育1 h，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度，計(jì)算細(xì)胞活力。

1.2.3 細(xì)胞分組 將U87 細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、AU低濃度組、AU 中濃度組、AU 高濃度組、Y-27632（ROCK 抑制劑）組、AU 高濃度+Y-27632 組。其中AU低、中、高濃度組參照1.2.2 中的結(jié)果，選用10、25、50 μmol/L 濃度的AU 處理；Y-27632 組用5 mmol/L濃度的Y-27632 處理[8]；AU 高濃度+Y-27632 組用50 μmol/L 濃度的AU 和5 mmol/L 濃度的Y-27632共同處理。

1.2.4 各組細(xì)胞活力測(cè)定 將各組U87 細(xì)胞加入96 孔板中，每孔加入10 μL CCK-8 溶液37 ℃孵育1 h，于450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度，計(jì)算細(xì)胞活力。

1.2.5 各組細(xì)胞凋亡情況 將各組U87 細(xì)胞重懸于100 μL 結(jié)合緩沖液中，按照Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，加入5 μL Annexin VFITC 和5 μL PI，混勻，室溫染色15 min，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1.2.6 各組細(xì)胞遷移和侵襲 將各組U87 細(xì)胞1×105個(gè)/mL（100 μL）用含0.5% FBS 的DMEM 培養(yǎng)基接種于24 孔板中鋪有Matrigel 膠的Transwell 上室，下室加入含10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，用棉簽擦去上室的細(xì)胞。將貼壁細(xì)胞用2%多聚甲醛固定，然后用0.1%結(jié)晶紫溶液染色，遷移實(shí)驗(yàn)與上述步驟相似，Transwell 小室未涂Matrigel 膠。每個(gè)小室隨機(jī)選取5 個(gè)視野，在顯微鏡下計(jì)數(shù)遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)量并拍照。

1.2.7 蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)蛋白表達(dá) 將各組U87 細(xì)胞在RIPA 緩沖液中裂解、離心，定量蛋白濃度，分離并轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上，5%無(wú)脂奶粉封閉，加入一抗MMP2、MMP9、Ncadherin、Vimentin、E-cadherin、RhoA、ROCK1、ROCK2和GAPDH（1∶1 000）進(jìn)行檢測(cè)。用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗檢測(cè)結(jié)合的抗體，并使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑盒進(jìn)行可視化，采用Image J 軟件分析數(shù)據(jù)。

1.2.8 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn) 將BALB/c小鼠于恒溫23℃、濕度60%、12 h 光暗循環(huán)環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，自由進(jìn)食和飲水。將5×106個(gè)U87 細(xì)胞注射于小鼠背部皮下，隨機(jī)分為裸鼠對(duì)照組、AU 組、Y-27632 組、AU+Y-27632 組，每組6 只。注射后第7 天，AU 組小鼠腹腔注射AU 10 mg/kg[5]，Y-27632 組小鼠腹腔注射Y-27632 10 mg/kg[9]，AU+Y-27632 組腹腔注射AU 10 mg/kg 和Y-27632 10 mg/kg，每日1 次，連續(xù)2 周。處死小鼠切除腫瘤組織，測(cè)量腫瘤質(zhì)量與體積，免疫組化法檢測(cè)移植瘤組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)使用GraphPad 8.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AU 對(duì)GBM 細(xì)胞活力的影響 CCK-8 結(jié)果顯示，與0 μmol/L 比較，T98、U251、LN299、U87 細(xì)胞活力隨著AU 濃度的升高而逐漸降低（P<0.05），見(jiàn)表1。半抑制濃度（IC50）分別為76.47、81.37、78.25、70.09 μmol/L。因此，選擇U87 作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，選擇濃度10、25、50 μmol/L 作為AU 后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。見(jiàn)表1。

表1 不同濃度AU 對(duì)GBM 細(xì)胞活力的影響（±s）Tab.1 The effect of different concentrations of AU on the viability of GBM cells（±s） %

表1 不同濃度AU 對(duì)GBM 細(xì)胞活力的影響（±s）Tab.1 The effect of different concentrations of AU on the viability of GBM cells（±s） %

注：與AU 0 μmol/L 比較，*P<0.05。

?AU（μmol/L） n T98 U251 LN299 U87 0.0 6 99.35±0.62 99.08±0.85 99.17±0.77 99.42±0.41 2.5 6 90.24±4.18* 94.21±1.86* 92.05±1.74* 88.15±1.29*5.0 6 86.35±4.27* 89.63±2.25* 86.95±2.56* 80.62±1.84*10.0 6 70.40±4.16* 76.38±1.92* 73.14±2.59* 68.29±2.05*25.0 6 65.84±3.68* 68.47±1.39* 66.84±1.93* 60.17±1.82*50.0 6 54.37±4.75* 57.26±1.58* 55.38±1.57* 51.09±1.73*100.0 6 37.94±3.42* 41.73±1.26* 38.42±1.71* 33.52±1.07*

2.2 AU 對(duì)U87 細(xì)胞活力、凋亡率的影響 與對(duì)照組比較，AU 低、中、高濃度組和Y-27632 組U87 細(xì)胞活力顯著下降，凋亡率顯著升高（P<0.05），其中高濃度AU 和Y-27632 組共同處理的U87 細(xì)胞活力和凋亡率變化更顯著（P<0.05）。見(jiàn)圖2 和表2。

表2 AU 對(duì)U87 細(xì)胞活力和凋亡率的影響（±s）Tab.2 Effect of AU on the viability and apoptosis rate of U87 cel（l±s）

表2 AU 對(duì)U87 細(xì)胞活力和凋亡率的影響（±s）Tab.2 Effect of AU on the viability and apoptosis rate of U87 cel（l±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與AU 高濃度組比較，#P<0.05；與Y-27632 組比較，△P<0.05。

組別 n 細(xì)胞活力（%） 凋亡率（%）對(duì)照組 6 99.25±0.73 5.09±0.76 AU 低濃度組 6 71.26±2.25* 17.36±1.48*AU 中濃度組 6 60.38±1.59* 25.91±2.74*AU 高濃度組 6 51.07±1.64* 38.67±4.13*Y-27632 組 6 50.37±2.93* 39.26±4.21*AU 高濃度+Y-27632 組 6 37.46±3.29*#△ 49.21±5.34*#△

2.3 AU 對(duì)U87 細(xì)胞遷移侵襲的影響 與對(duì)照組比較，AU 低、中、高濃度組和Y-27632 組遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著下降（P<0.05），其中高濃度AU 和Y-27632 組共同處理的細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)下降更顯著（P<0.05）。見(jiàn)圖3 和表3。

表3 AU 對(duì)U87 細(xì)胞遷移、侵襲的影響（±s）Tab.3 Effect of AU on migration and invasion of U87 cel（l±s） 個(gè)

表3 AU 對(duì)U87 細(xì)胞遷移、侵襲的影響（±s）Tab.3 Effect of AU on migration and invasion of U87 cel（l±s） 個(gè)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與AU 高濃度組比較，#P<0.05；與Y-27632 組比較，△P<0.05。

組別 n 遷移細(xì)胞數(shù) 侵襲細(xì)胞數(shù)對(duì)照組 6 218.53±17.51 168.41±15.26 AU 低濃度組 6 175.36±16.29* 125.37±14.86*AU 中濃度組 6 146.68±14.93* 107.47±10.24*AU 高濃度組 6 105.91±10.09* 89.57± 9.06*Y-27632 組 6 103.35±10.27* 90.14± 9.35*AU 高濃度+Y-27632 組 6 81.27± 8.35*#△ 72.86± 7.54*#△

圖3 AU 對(duì)U87 細(xì)胞遷移、侵襲的影響（×200）Fig.3 Effect of AU on migration and invasion of U87 cell (×200)

2.4 AU 對(duì)U87 細(xì)胞遷移侵襲和EMT 相關(guān)蛋白的影響 與對(duì)照組比較，AU 低、中、高濃度組和Y-27632 組MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin 表達(dá)顯著下降，E-cadherin 表達(dá)顯著上升（P<0.05），其中高濃度AU 和Y-27632 組共同處理的U87 細(xì)胞蛋白表達(dá)變化更顯著（P<0.05）。見(jiàn)圖4 和表4。

表4 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中MMP2、MMP9、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.4 Effect of AU on expression of MMP2，MMP9，Vimentin，E-cadherin，N-cadherin in U87 cell（±s）

表4 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中MMP2、MMP9、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.4 Effect of AU on expression of MMP2，MMP9，Vimentin，E-cadherin，N-cadherin in U87 cell（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與AU 高濃度組比較，#P<0.05；與Y-27632 組比較，△P<0.05。

?

圖4 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中MMP2、MMP9、Vimentin、Ecadherin、N-cadherin 蛋白表達(dá)的影響Fig.4 Effect of AU on expression of MMP2，MMP9，Vimentin，E-cadherin，N-cadherin in U87 cell

2.5 AU 對(duì)U87 細(xì)胞RhoA/ROCK 信號(hào)通路的影響 與對(duì)照組比較，AU 低、中、高濃度組和Y-27632組RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.05），其中高濃度AU 和Y-27632 組共同處理的U87 細(xì)胞RhoA/ROCK 信號(hào)通路蛋白下降更顯著（P<0.05）。見(jiàn)圖5 和表5。

表5 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.5 Effect of AU on expression of RhoA，ROCK1，ROCK2 in U87 cell（±s）

表5 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.5 Effect of AU on expression of RhoA，ROCK1，ROCK2 in U87 cell（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與AU 高濃度組比較，#P<0.05；與Y-27632 組比較，△P<0.05。

組別 n RhoA ROCK1 ROCK2對(duì)照組 6 1.13±0.13 1.04±0.11 0.95±0.10 AU 低濃度組 6 0.87±0.09* 0.81±0.09* 0.69±0.07*AU 中濃度組 6 0.64±0.07* 0.68±0.07* 0.55±0.06*AU 高濃度組 6 0.48±0.05* 0.50±0.05* 0.42±0.04*Y-27632 組 6 0.49±0.05* 0.53±0.06* 0.41±0.05*AU 高濃度+Y-27632 組 6 0.36±0.04*#△0.42±0.04*#△0.30±0.03*#△

圖5 AU 對(duì)U87 細(xì)胞中RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)的影響Fig.5 Effect of AU on expression of RhoA，ROCK1，ROCK2 in U87 cell

2.6 AU 對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及RhoA/ROCK 信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響 與裸鼠對(duì)照組比較，AU 組和Y-27632 組移植瘤質(zhì)量、體積和RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05），其中AU+Y-27632 組降低更顯著（P<0.05）。見(jiàn)圖6、圖7 和表6。

表6 AU 對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.6 Effect of AU on the growth of transplanted tumors in nude mice and the expression of RhoA，ROCK1 and ROCK2（±s）

表6 AU 對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)的影響（±s）Tab.6 Effect of AU on the growth of transplanted tumors in nude mice and the expression of RhoA，ROCK1 and ROCK2（±s）

注：與裸鼠對(duì)照組比較，*P<0.05；與AU 組比較，#P<0.05；與Y-27632 組比較，△P<0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 瘤體積（mm3） 移植瘤質(zhì)量（g） RhoA ROCK1 ROCK2裸鼠對(duì)照組 6 2 035±189 2.62±0.32 35.17±4.29 42.75±4.31 30.26±3.18 AU 組 6 1 247±146* 1.58±0.29* 24.08±2.31* 26.06±2.47* 21.28±2.46*Y-27632 組 6 1 136±136* 1.47±0.27* 23.96±2.41* 25.83±2.56* 21.53±2.47*AU+Y-27632 組 6 579± 84*#△ 0.69±0.18*#△ 17.85±1.48*#△ 18.15±2.06*#△ 13.49±1.51*#△

圖6 AU 對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況的影響Fig.6 Effect of AU on the growth of transplanted tumor in nude mice

圖7 AU 對(duì)裸鼠腫瘤組織RhoA、ROCK1、ROCK2 表達(dá)的影響（×200）Fig.7 Effect of AU on RhoA，ROCK1 and ROCK2 expression in tumor tissue of nude mice(×200)

3 討論

GBM 是成人最常見(jiàn)的原發(fā)性腦腫瘤之一，約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤的50%～70%，由治療后易復(fù)發(fā)導(dǎo)致預(yù)后不良[10]。因此，深入了解GBM 的惡性行為及其分子機(jī)制是尋求膠質(zhì)瘤有效治療的關(guān)鍵研究。

AU 作為從杜仲、車(chē)前草、地黃等植物中提取出的化合物，廣泛分布于多個(gè)器官，表現(xiàn)出抗腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和減少化學(xué)毒性的作用[11]。據(jù)報(bào)道，AU能夠抑制肺癌細(xì)胞增殖、侵襲[12]。AU 還能抑制乳腺癌腫瘤生長(zhǎng)，緩解乳腺癌引起的腸道紊亂[4]，并通過(guò)抑制肝細(xì)胞癌中程序性死亡配體1 表達(dá)來(lái)增強(qiáng)順鉑的抗腫瘤活性[5]。因此，猜測(cè)AU 是作為治療GBM的潛在藥物。本研究發(fā)現(xiàn)，AU 處理后GBM 細(xì)胞活力、遷移、侵襲能力顯著下降，凋亡率上升，移植瘤質(zhì)量、體積下降。提示AU 能夠抑制GBM 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，對(duì)GBM 有治療作用。增殖和轉(zhuǎn)移是腫瘤發(fā)展和進(jìn)展的重要因素，EMT 是加速癌癥轉(zhuǎn)移的重要原因[13]。腫瘤細(xì)胞的EMT 樣過(guò)程包括E-cadherin等細(xì)胞黏附蛋白的減少，N-cadherin、Vimentin 等間質(zhì)標(biāo)志物的升高，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附減少和極性喪失，促進(jìn)腫瘤的侵襲和遷移[14-15]。因此，抑制GBM 細(xì)胞的EMT 過(guò)程與靶向膠質(zhì)瘤的治療相結(jié)合可能是其成功治療的關(guān)鍵。

多項(xiàng)研究表明，間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞外基質(zhì)重塑會(huì)促進(jìn)GBM 的侵襲和轉(zhuǎn)移，與GBM 的預(yù)后不良密切相關(guān)[16]。MMPs 能通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，MMPs 對(duì)多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，MMP2、MMP9 已被證明可以促進(jìn)GBM 的增殖和轉(zhuǎn)移[17-18]。因此，為了改善GBM 患者的預(yù)后，有效抑制GBM 的侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn)，AU 能夠抑制MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin 蛋白表達(dá)，促進(jìn)E-cadherin 表達(dá)，提示AU可能通過(guò)抑制GBM 細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT，抑制GBM 進(jìn)展。

細(xì)胞遷移伴隨著微絲細(xì)胞骨架的重塑，Rho GTPase 家族在調(diào)節(jié)與細(xì)胞遷移相關(guān)的細(xì)胞骨架重構(gòu)方面起著至關(guān)重要的作用[19]。RhoA 激活ROCK（包括ROCK1、ROCK2），提高肌球蛋白輕鏈磷酸化，增加肌球蛋白活化，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)作電位聚合和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，參與細(xì)胞骨架蛋白、細(xì)胞形態(tài)、遷移以及細(xì)胞中各種增殖和轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)[20-21]。RhoA/ROCK 信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)癌癥的增殖和遷移，激活RhoA/ROCK1信號(hào)通路，能夠促進(jìn)直腸癌細(xì)胞遷移[22]；激活RhoA/ROCK 途徑，能夠促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的增殖和遷移能力[23]。此外，RhoA/ROCK 信號(hào)通路參與GBM 的發(fā)生發(fā)展，研究表明，GBM 細(xì)胞通過(guò)激活RhoA/ROCK途徑侵入周?chē)M織，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[24]。以上研究表明，RhoA/ROCK 信號(hào)通路的激活可能是腫瘤發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制。因此，抑制GBM 中RhoA/ROCK1 信號(hào)通路的激活可能是治療GBM 的關(guān)鍵機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，Y-27632 組RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)下降，提示RhoA/ROCK 信號(hào)通路參與GBM細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、EMT 及腫瘤生長(zhǎng)。而不同濃度AU 處理后GBM 細(xì)胞及腫瘤組織中RhoA、ROCK1、ROCK2 蛋白表達(dá)下降，猜測(cè)AU 可能通過(guò)抑制RhoA/ROCK 信號(hào)通路，抑制GBM 的發(fā)生發(fā)展。為進(jìn)一步證明此結(jié)論，本研究在A(yíng)U 的基礎(chǔ)上與ROCK 抑制劑Y-27632 聯(lián)合處理GBM 細(xì)胞及裸鼠移植瘤，發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合處理GBM 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲進(jìn)一步下降，凋亡進(jìn)一步升高，對(duì)腫瘤的抑制更顯著。因此，AU 可能通過(guò)抑制RhoA/ROCK 信號(hào)通路抑制GBM 細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、EMT 及移植瘤生長(zhǎng)。

綜上所述，AU 能抑制GBM 細(xì)胞活力、遷移侵襲和EMT，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與抑制RhoA/ROCK 信號(hào)通路有關(guān)。本研究為治療GBM 提供了新的方法和思路，但AU 對(duì)除本研究中的GBM細(xì)胞的影響及藥物與通路之間的具體關(guān)系還需進(jìn)一步研究。