徐美余， 羅成瑩， 辛維崗， 張關(guān)令， 王 春， 李亞萍， 林連兵*

（1. 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 云南 昆明 650500；2. 云南省高校飼用抗生素替代技術(shù)工程研究中心，云南 昆明 650500；3. 昆明三正生物科技(集團(tuán))有限公司，云南 昆明 650500）

白羽肉雞具備繁殖成本低、易成活、生長速度快、屠宰率高、肉質(zhì)好、飼糧比高等特點(diǎn)，在保障中國肉類供應(yīng)方面發(fā)揮了重要作用[1-3]。 同時(shí)，白羽肉雞是目前我國畜禽養(yǎng)殖類中養(yǎng)殖規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化程度高度集群的禽類，是我國動(dòng)物蛋白來源的重要組成部分，是中國唯一能通過大量出口創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)效益的肉類食品[4]。 值得注意的是，目前食品安全問題受到了高度重視，在全面禁止抗生素飼用的大背景下，畜禽的生長性能下降，發(fā)病率上升，養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益大幅縮減等問題逐步加劇。 而白羽肉雞作為高度集約化養(yǎng)殖的家禽更易感染致病菌，因此，找到有效的抗生素替代品并進(jìn)行多方面的評(píng)價(jià)對(duì)于保障白羽肉雞等肉類制品的供應(yīng)意義重大。

產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens），也叫魏氏梭菌（Clostridium welchii），是厭氧型革蘭氏陽性病原菌，嚴(yán)重威脅著畜禽養(yǎng)殖和人類食品安全[5-6]。產(chǎn)氣莢膜梭菌G 型菌株可分泌α 毒素和NetB 毒素兩種主要的毒力因子，感染雛雞后可引發(fā)壞死性腸炎，從而導(dǎo)致小腸黏膜壞死[7-8]。 同時(shí)，雛雞壞死性腸炎在家禽養(yǎng)殖中廣泛存在， 是一種產(chǎn)氣莢膜梭菌G型菌株感染引起的腸毒型疾病，對(duì)肉雞養(yǎng)殖造成了嚴(yán)重威脅，如改變腸道形態(tài)從而降低白羽肉雞對(duì)飼糧的吸收能力，嚴(yán)重者甚至引起肉雞大量死亡[9]。 目前主要通過在飲水或飼糧中添加抗生素來治療肉雞的壞死性腸炎，極易導(dǎo)致耐藥性和藥物殘留等問題[10-11]。 因此，隨著我國畜牧業(yè)逐步進(jìn)入無抗養(yǎng)殖時(shí)代，如何有效防治產(chǎn)氣莢膜梭菌感染引起的家禽壞死性腸炎等疾病再次成為畜牧工作者面臨的難題[12]。

益生菌制劑飼喂畜禽可以促進(jìn)畜禽吸收營養(yǎng)物質(zhì)和分泌腸道消化酶，提高飼料轉(zhuǎn)化率和畜禽免疫力，改善其生長性能和腸上皮屏障，在腸道健康調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[13-14]。 例如，益生性枯草芽孢桿菌能分泌胞外酶降解飼料，增強(qiáng)畜禽對(duì)飼料的利用，從而對(duì)宿主的生產(chǎn)性能產(chǎn)生影響；益生性地衣芽孢桿菌能代謝產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)從而促進(jìn)腸道菌群平衡。 以往研究表明，多菌制劑比單菌制劑在畜禽的腸道形態(tài)、抗病性方面表現(xiàn)出更好的益生性，如謝文惠等研究表明飼喂復(fù)合益生菌可改善雛雞的血清生化指標(biāo)、腸道黏膜形態(tài)和養(yǎng)分表觀利用率[15]，劉淑嬌等的研究也表明飼喂復(fù)合益生菌能顯著提高雛雞的日增重、降低料肉質(zhì)量比，促進(jìn)生長，提高肉雞免疫力[16]。此外，盡管諸多研究證實(shí)了復(fù)合益生菌可以治療細(xì)菌性感染疾病和提高肉雞生長性能，但人們對(duì)復(fù)合益生菌治療細(xì)菌性感染疾病后的影響知之甚少。 因此，作者在構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒感染模型的基礎(chǔ)上，通過在基礎(chǔ)日糧中添加由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌制成的復(fù)合益生菌制劑，探究其在不同添加質(zhì)量濃度下對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒感染后的白羽肉雞生長性能、腸道形態(tài)以及腸道菌群結(jié)構(gòu)變化，為復(fù)合益生菌改善白羽肉雞生產(chǎn)中壞死性腸炎的防治和益生菌制劑的科學(xué)應(yīng)用提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

無添加肉雞基礎(chǔ)日糧完全參照作者所在課題組先前研究[17]進(jìn)行配制；3 日齡白羽肉雞500 羽、復(fù)合益生菌（枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌，總菌數(shù)1×1010CFU/g）、金霉素制劑、雞源A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌：昆明三正生物科技（集團(tuán)）有限公司；總DNA 抽提試劑盒（TIANamp Stool DNA Kit）：天根生物技術(shù)公司；QIAquick Gel Extraction Kit 試劑盒：德國Qiagen公司；SMRT Bell Template Prep Kit 試劑盒： 美國Pacific Biosciences 公司；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀： 常州市中威電子儀器有限公司；Qubit 3.0 熒光計(jì)：美國英濰捷基公司；Agilent 2100：美國安捷倫公司；數(shù)碼三目攝像顯微鏡（BA400Digital）：麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司； 圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0：美國Media Cybernetics 公司。

1.2 構(gòu)建白羽肉雞壞死性腸炎模型

試驗(yàn)采用A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌毒株攻毒感染構(gòu)建白羽肉雞壞死性腸炎模型。 產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)使用厭氧肉肝湯培養(yǎng)基。 試驗(yàn)3 日齡白羽肉雞每天每羽灌服雞源A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌混懸液1 mL 進(jìn)行感染，白羽肉雞表現(xiàn)腹瀉，則模型構(gòu)建成功。

1.3 試驗(yàn)分組與飼喂管理

所有試驗(yàn)按照組方的不同分為5 組：基礎(chǔ)日糧組（CHE）；基礎(chǔ)日糧中添加50 μg/g 金霉素制劑，使用濃度參考以往研究設(shè)置（CKB）[17]，基礎(chǔ)日糧中添加50 mg/kg 復(fù)合益生菌（CJK1）， 基礎(chǔ)日糧中添加200 mg/kg 復(fù)合益生菌（CJK2），基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg 復(fù)合益生菌（CJK3）。 以上5 組飼糧配好于陰涼干燥處存放。 試驗(yàn)中隨機(jī)將500 羽產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒感染后的白羽肉雞分配至5 個(gè)組，每組5 個(gè)重復(fù)， 每個(gè)重復(fù)20 羽。 試驗(yàn)周期為21 d， 以GB/T 19664—2005 為飼養(yǎng)規(guī)范，每個(gè)重復(fù)分開飼養(yǎng)，避免接觸感染。

1.4 生長性能測(cè)定

試驗(yàn)期間每天記錄白羽肉雞的采食量，分別于實(shí)驗(yàn)開始后第1、13、21 天早晨記錄白羽肉雞空腹質(zhì)量。 平均日采食量見式（1）：

式中：F 為平均日采食量，g/d；mT為總耗料量，g；t 為試驗(yàn)天數(shù)，d。 平均日增重見式（2）：

式中：G 為平均日增重，g/d；ma為總增重，g；t 為試驗(yàn)天數(shù)，d。 平均料肉比見式（3）：

式中：r 為平均料肉比；F 為平均日采食量，g/d；G 為平均日增重，g/d。 每個(gè)分組選取5 羽健康白羽肉雞進(jìn)行稱量，每羽獨(dú)立重復(fù)3 次。

1.5 腸道形態(tài)的測(cè)定

在試驗(yàn)第21 天時(shí)，每個(gè)組抽取5 羽白羽肉雞，截取腸道卵黃蒂前端5 cm 腸段， 固定采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的中性福爾馬林溶液。 固定后的組織用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇梯度脫水，再用二甲苯透明處理樣本，用石蠟包埋樣品。 包埋后將組織蠟塊用切片機(jī)切片，經(jīng)烤片、烘片處理后，用蘇木精-伊紅染液染色，然后用中性樹脂封片，做成永久切片。 采集切片圖像并測(cè)量絨毛高度（villus height，VH）、隱窩深度（crypt depth，CD），每組數(shù)據(jù)相對(duì)應(yīng)計(jì)算絨隱比。

1.6 腸道微生物的測(cè)定

1.6.1 DNA 提取和PCR 擴(kuò)增 在試驗(yàn)第21 天時(shí)，每組隨機(jī)放血處死并剖檢5 羽白羽肉雞。 無菌結(jié)扎盲腸后截取腸段樣本，凍存?zhèn)溆糜谀c道菌群測(cè)定分析。將雞盲腸腸段取出清洗表面微生物并置于2 mL離心管中， 按照試劑盒說明書提取總DNA 并用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。 以稀釋至1 mg/L 的基因組DNA 為模板，選擇帶Barcode 的特異引物和高保真酶混合體系進(jìn)行16S 全長的PCR 擴(kuò)增。 用2 g/dL的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。根據(jù)PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物濃度進(jìn)行混合， 使用QIAquick Gel Extraction Kit試劑盒對(duì)目的條帶進(jìn)行膠回收。

1.6.2 文庫構(gòu)建和上機(jī)測(cè)序用SMRT Bell Template Prep Kit 試劑盒構(gòu)建16S 基因文庫， 在擴(kuò)增后的DNA 片段兩端用DNA 聚合酶將測(cè)序接頭連接上， 用AMpure PB 磁珠純化DNA 片段， 構(gòu)建SMRT Bell 文庫。 用緩沖液回溶純化后的DNA 片段，用BluePipin 片段篩選特定片段并用AMpure PB磁珠純化篩選片段。用Qubit 3.0 熒光計(jì)進(jìn)行文庫的濃度定量， 用Agilent 2100 進(jìn)行插入片段長度的確定，在百邁客生物科技有限公司二代測(cè)序平臺(tái)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)序和分析。

1.6.3 數(shù)據(jù)處理 PacBio 下機(jī)數(shù)據(jù)導(dǎo)出為bam 文件。 使用Lima 軟件根據(jù)barcode 序列區(qū)分各樣本的數(shù)據(jù)并以bam 格式保存。 校正序列使用CCS（SMRT Link v5.0） ，矯正參數(shù)CCS=3，最小準(zhǔn)確率0.9，選取長度范圍1340～1640 bp 的序列，以fastq和fasta 保存； 隨后進(jìn)行SSR 過濾含有8 個(gè)以上連續(xù)相同堿基數(shù)的序列并使用cutadapt 去除引物。 可讀序列通過（UCHIME Algorithm，http：//www.drive5.com/usearch/manual/uchime_algo.html）與全長注釋數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)[18]，檢測(cè)嵌合體序列，并最終去除其中的嵌合體序列（http：//www.drive5.com/usearch/manual/chimera_formation.html）[19]，得到高質(zhì)量數(shù)據(jù)。后續(xù)數(shù)據(jù)分析參考進(jìn)行alpha 多樣性分析、Beta 多樣性分析以及在門、屬水平統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。

1.7 數(shù)據(jù)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均包含至少3 次生物學(xué)重復(fù)，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的方式呈現(xiàn)。 應(yīng)用IBM SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析和LSD 多重比較，顯著差異性水平定為P＜0.05，圖片繪制采用Origin 2019 進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌對(duì)感染產(chǎn)氣莢膜梭菌后的白羽肉雞生長性能的影響

將5 個(gè)組白羽肉雞分別飼喂被產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞，在21 d 記錄并計(jì)算出每組的平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG），以料肉比（F/G）評(píng)估每組白羽肉雞的生長狀況并與傳統(tǒng)抗生素金霉素制劑進(jìn)行比較，見圖1。 結(jié)果顯示，在產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的情況下，日糧中添加金霉素制劑和復(fù)合益生菌均可降低白羽肉雞的料肉比。 CKB 組、CJK2 組、CJK3 組的料肉比相比于CHE 組顯著降低（P＜0.05）， 且隨著日糧中復(fù)合益生菌添加水平的上升白羽肉雞料肉比呈下降趨勢(shì)，CJK3 組料肉比達(dá)到最低。

圖1 不同組白羽肉雞生長性能的比較Fig. 1 Comparison of growth performance of different groups of white feather broilers

2.2 復(fù)合益生菌對(duì)感染產(chǎn)氣莢膜梭菌后的白羽肉雞腸道形態(tài)的影響

本研究結(jié)果中每組隨機(jī)剖檢白羽肉雞5 羽，每羽選取10 根走向平直且形態(tài)完整的絨毛計(jì)算絨隱比。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加金霉素制劑和復(fù)合益生菌后，相比于對(duì)照組，腸絨毛發(fā)育良好，斷裂和腸絨毛損傷減少， 見圖2。 在有產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒感染的情況下，CKB 組、CJK1 組、CJK2 組、CJK3 組與CHE 組相比均能提高絨毛高度，降低隱窩深度，從而提升絨隱比，改善腸道健康度。 CKB 組、CJK2 組、CJK3 組與CHE 組相比絨隱比提升效果顯著 （P＜0.05），CJK3 組提升絨隱比的效果最佳，且和金霉素制劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50 μg/g 時(shí)的效果沒有顯著差異，見圖3。

圖2 不同組白羽肉雞腸道組織形態(tài)Fig. 2 Intestinal morphology of white-feathered broilers in different groups

圖3 不同組白羽肉雞腸道組織絨毛高度與隱窩深度比值Fig. 3 Ratio of villus height to crypt depth in intestinal tissue of whitefeather broilers in different groups

2.3 益生菌對(duì)感染產(chǎn)氣莢膜梭菌后的白羽肉雞腸道菌群的影響

2.3.1 α 多樣性分析 分析表1 可知， 各分組樣本的有效序列數(shù)在72046～81880 間， 有效序列數(shù)目較高，樣品的覆蓋度（coverage）達(dá)到0.999，則測(cè)序結(jié)果對(duì)測(cè)序樣品的覆蓋度較好，各組間OUT 數(shù)目沒有顯著差異（P>0.05）。 分析各試驗(yàn)組與對(duì)照組之間的豐富度和多樣性指數(shù)， 發(fā)現(xiàn)CJK3 組、CKB 組的Chao1、Ace 指數(shù)均低于CHE 組，CKB、CJK1、CJK2、CJK3 組的Shannon 指數(shù)均高于CHE 組，CJK1、CJK2、CJK3 組的Simpson 指數(shù)均高于CHE 組 （P＜0.05），CJK1、CJK2、CJK3 組的Simpson 指數(shù)均高于CKB 組（P＜0.05）。 表明產(chǎn)氣莢膜梭菌感染白羽肉雞后，在基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合益生菌可提高腸道菌群多樣性，降低腸道菌群的豐富度。

表1 α 多樣性指數(shù)Table 1 α-diversity index

2.3.2 β 多樣性分析 β 多樣性用于分析組間與組內(nèi)各樣本間微生物群落組成的差異性與相似性，本試驗(yàn)由NMDS（Stress=0.122）（圖4（a））和PCoA 法分析（見圖4（b））發(fā)現(xiàn)，組間樣本明顯分開，且各組內(nèi)樣本緊密靠近。 各試驗(yàn)組與空白組之間距離相差較大，表明試驗(yàn)分組合理，金霉素制劑和復(fù)合益生菌都會(huì)對(duì)白羽肉雞腸道菌群造成一定影響。

圖4 NMDS 分析圖（a）、PCOA 分析圖（b）Fig. 4 NMDS（a） and PCoA（b） analysis

2.4 腸道菌群組成及優(yōu)勢(shì)菌群相對(duì)豐度分析

對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒感染后白羽肉雞腸道菌群進(jìn)行分析后，發(fā)現(xiàn)在門水平分類單元中，相對(duì)豐度前7 位的為厚壁菌門 （Firmicutes）、 擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）、軟壁菌門（Tenericutes）、放線菌門（Actinobacteria）、梭桿菌門（Fusobacteria）、藍(lán)藻菌門（Cyanobacteria），見圖5。為探究不同添加劑量的復(fù)合益生菌與金霉素制劑對(duì)白羽肉雞腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，分析了不同劑量的復(fù)合益生菌和金霉素制劑組與空白組的相對(duì)豐度差異以及不同劑量的復(fù)合益生菌與金霉素制劑組的相對(duì)豐度差異，見表2。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與CHE 組相比，CJK2 組變形菌門相對(duì)豐度顯著升高，CJK1、CJK2、CJK3 組軟壁菌門相對(duì)豐度顯著下降（P＜0.05）；CKB組厚壁菌門相對(duì)豐度顯著升高，軟壁菌門相對(duì)豐度顯著下降（P＜0.05）。 與CKB 組相比，CJK1 組擬桿菌門相對(duì)豐度顯著升高， 厚壁菌門相對(duì)豐度顯著下降，CJK2 組變形菌門相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.05）。

表2 門分類單元下相對(duì)豐度前7 位細(xì)菌的變化Table 2 Changes in relative abundance of top 7 bacteria phylum taxa

圖5 門水平腸道菌群組成Fig. 5 Composition of gut flora at Phyla level in treatment and control groups

在屬水平分類單元中， 糞桿菌屬（Faecalibacterium）、另枝菌屬（Alistipes）、變形桿菌屬（Proteus）、Fournierella、腸球菌屬（Enterococcus）等的相對(duì)豐度最高，見圖6。定義屬水平上相對(duì)豐度前10 位的菌群為優(yōu)勢(shì)菌群， 分析比較不同劑量的復(fù)合益生菌和金霉素制劑組與空白組的相對(duì)豐度差異及不同劑量的復(fù)合益生菌與金霉素制劑組的相對(duì)豐度差異，見表3。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與CHE 組相比CJK2 組變形桿菌屬、Clostridiales相對(duì)豐度顯著升高，CJK3 組腸球菌屬相對(duì)豐度顯著升高，CJK1、CJK2、CJK3 組Fournierella、罕見小球菌屬相對(duì)豐度均顯著升高、Lachnospiraceae 相對(duì)豐度顯著下降（P＜0.05）；CKB 組Fournierella、腸球菌屬、布勞特氏菌屬、Ruminococcaceae 相對(duì)豐度顯著升高、Lachnospiraceae相對(duì)豐度顯著下降 （P＜0.05）。 與CKB 組相比，CJK1 組另枝菌屬相對(duì)豐度顯著升高，CJK2 組變形桿菌屬、Clostridiales相對(duì)豐度顯著升高、Ruminococcaceae 屬相對(duì)豐度顯著下降，CJK1、CJK2 組腸球菌屬、 布勞特氏菌屬相對(duì)豐度顯著下降，CJK1、CJK2、CJK3 組Fournierella 屬相對(duì)豐度顯著下降、罕見小球菌屬相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.05）。

表3 屬分類單元下相對(duì)豐度前10 位細(xì)菌的變化Table 3 Changes in relative abundance of the top10 in genera taxa

圖6 屬水平腸道菌群組成Fig. 6 Composition of gut flora at Genera level in treatment and control groups

3 討論

復(fù)合益生菌作為一種綠色健康環(huán)保的飼料添加劑，在提升白羽肉雞生長性能、減緩由于抗生素的添加導(dǎo)致的菌群失調(diào)等方面發(fā)揮著重要作用。 產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)白羽肉雞的健康構(gòu)成重大威脅[4]，特別是白羽肉雞感染產(chǎn)氣莢膜梭菌后會(huì)引起以腸道黏膜出血性壞死為主要特征的消化道傳染病，具有較高的發(fā)病率和死亡率，對(duì)禽類養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失[20]。因此，作者通過在白羽肉雞基礎(chǔ)日糧上添加不同劑量的復(fù)合益生菌，研究其對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞生長性能、腸道形態(tài)及腸道菌群的影響，并與傳統(tǒng)抗生素金霉素制劑進(jìn)行比較。 研究結(jié)果顯示，飼喂復(fù)合益生菌組相比于對(duì)照組料肉質(zhì)量比發(fā)生了不同程度降低，這與以往益生菌對(duì)畜禽生長性能的影響相似[21]。 隨著復(fù)合益生菌組劑量的上升白羽肉雞的料肉質(zhì)量比呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，高劑量（500 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）的復(fù)合益生菌與空白組相比均存在顯著差異（P＜0.05），表明復(fù)合益生菌對(duì)于白羽肉雞的生長具有明顯促進(jìn)效果。 此外，對(duì)比不同劑量的復(fù)合益生菌與金霉素制劑組之間的料肉比， 復(fù)合益生菌與抗生素作用效果類似，能夠改善消化道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的利用能力，從而提高了白羽肉雞的生長性能[22]，達(dá)到抗生素的替代效果。

腸道的優(yōu)化發(fā)育對(duì)于營養(yǎng)吸收和家禽抵抗疾病尤其重要[23]。 腸絨毛高度反應(yīng)小腸吸收營養(yǎng)物質(zhì)的面積大小， 隱窩的深淺代表化學(xué)消化功能的強(qiáng)弱。 病原菌感染腸道后，引起絨毛高度降低和隱窩深度增加，降低絨隱比[24]。 產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后，腸道生理機(jī)能發(fā)生改變， 白羽肉雞表現(xiàn)為腹瀉等癥狀。 在基礎(chǔ)日糧上添加不同劑量的復(fù)合益生菌飼喂產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞后與對(duì)照組相比，復(fù)合益生菌組與金霉素制劑組絨毛高度與隱窩深度的比值均有不同程度升高，且復(fù)合益生菌添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為200、500 mg/kg 時(shí)， 作用效果與金霉素制劑組相似，能顯著提高絨毛高度與隱窩深度的比值（P＜0.05），絨隱比比值越大，消化吸收能力就越強(qiáng)[25]。本研究結(jié)果表明，飼喂高、中、低劑量的復(fù)合益生菌可提升絨毛高度，降低隱窩深度，提升絨毛高度與隱窩深度的比值。 這一研究結(jié)果與大多數(shù)添加復(fù)合益生菌能提高絨隱比的研究類似[26]。因此，復(fù)合益生菌飼喂產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞能增強(qiáng)其消化功能。

畜禽腸道微生物對(duì)維持宿主健康起重要作用[27]。結(jié)果顯示，飼喂復(fù)合益生菌后白羽肉雞腸道菌群在門分類水平上厚壁菌門和擬桿菌門占比較高，該研究結(jié)果與以往益生菌對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞的研究結(jié)果相似[28]。 軟壁菌門細(xì)菌增多會(huì)降低畜禽生長性能[29]，與空白組相比，飼喂復(fù)合益生菌、金霉素制劑后軟壁菌門相對(duì)豐度均顯著下降（P＜0.05）， 推測(cè)治療后白羽肉雞料肉比的下降和絨隱比的上升可能是因?yàn)檐洷诰T相對(duì)豐度下降。 在屬分類水平上，10 個(gè)優(yōu)勢(shì)腸道菌群屬的相對(duì)豐度在飼喂復(fù)合益生菌后發(fā)生了不同程度變化。 分析產(chǎn)氣莢膜梭菌感染白羽肉雞屬水平相對(duì)豐度變化，在屬水平上， 發(fā)現(xiàn)Fournierella 屬相對(duì)豐度均顯著升高，Lachnospiraceae 屬相對(duì)豐度均顯著下降 （P＜0.05）。研究發(fā)現(xiàn)Lachnospiraceae 與人類潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)[30]，因此推測(cè)復(fù)合益生菌飼喂產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞可通過降低Lachnospiraceae 屬相對(duì)豐度達(dá)到白羽肉雞壞死性腸炎的防治效果。 研究發(fā)現(xiàn)，罕見小球菌屬隨著白羽肉雞壞死性腸炎的加重呈下降趨勢(shì)[31]，飼喂復(fù)合益生菌后感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的白羽肉雞腸道菌群中罕見小秋菌屬細(xì)菌相對(duì)豐度顯著升高（P＜0.05），則飼喂復(fù)合益生菌能治療白羽肉雞壞死性腸炎。 腸球菌屬的屎腸球菌能顯著降低肉雞料肉比[32]，與對(duì)照組相比，金霉素制劑與高劑量復(fù)合益生菌（500 mg/kg）飼喂的白羽肉雞腸球菌屬相對(duì)豐度均顯著升高，進(jìn)一步表明腸球菌屬能改善白羽肉雞生長性能。

4 結(jié)語

作者利用金霉素制劑和由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌組成的復(fù)合益生菌分別飼喂產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后的白羽肉雞，比較生長性能、腸道形態(tài)和腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果證實(shí)，復(fù)合益生菌對(duì)于感染產(chǎn)氣莢膜梭菌后的白羽肉雞生長性能、腸道形態(tài)和腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響與金霉素制劑相似，尤其是復(fù)合益生菌添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為500 mg/kg 時(shí)飼喂感染產(chǎn)氣莢膜梭菌的白羽肉雞后，有效降低了白羽肉雞料肉質(zhì)量比， 促進(jìn)了白羽肉雞的快速生長發(fā)育，且能夠促進(jìn)腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和改善白羽肉雞腸道菌群健康。 在當(dāng)前我國面臨飼料中禁抗的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，本研究結(jié)果利用不同質(zhì)量濃度的復(fù)合益生菌飼喂感染致病菌后的白羽肉雞并評(píng)估生長性能、腸道形態(tài)和腸道菌群結(jié)構(gòu)，為復(fù)合益生菌應(yīng)用于白羽肉雞養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。