陳偉，斯張國，祝夕超，藺曉月，李法凱，孫圣福*

1.山東省濟南市動物疫病預防與控制中心，濟南 250099；

2.山東省萊州市程郭畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 261437；

3.山東省動物疫病預防與控制中心，濟南 250100

藍舌病（bluetongue，BT）是由藍舌病病毒（blue‐tongue virus，BTV）引起的1 種傳染性疫病，主要感染牛羊等反芻動物，尤其是綿羊，感染后主要表現(xiàn)為病羊精神沉郁，食欲喪失，血樣下痢，頰黏膜和胃腸道黏膜呈嚴重的卡他性炎癥，常因蹄冠上皮脫落而跛行，被毛斷裂，甚至全部脫落[1]。牛感染后癥狀較輕，主要表現(xiàn)為高熱和舌頭變藍，鼻黏膜和口腔黏膜嚴重充血等癥狀[2]。世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）將藍舌病列為須通報的動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。藍舌病最早于18 世紀發(fā)現(xiàn)于南非的綿羊，近年來，在亞洲、歐洲和非洲的多個國家和地區(qū)發(fā)生綿羊或牛藍舌病疫情，我國于1979年首次在云南師宗發(fā)現(xiàn)該病并分離到藍舌病病毒。目前，全國已有云南、新疆、甘肅、陜西、四川等29個?。ㄊ校﹨^(qū)檢出羊BTV抗體，許多省份的牛群中也發(fā)現(xiàn)BTV 抗體陽性[3-6]。目前，BTV 有29 個血清型[7]，不同血清型之間交叉保護性較低，該病主要通過生物安全控制進行防控。本研究采集2022 年山東省規(guī)模化牛場血清樣品，采用ELISA 方法進行抗體檢測，了解山東省牛藍舌病的帶毒狀況，為后續(xù)該病的防控提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2022 年6 月，全省范圍內抽檢養(yǎng)牛密集地市（濟南、泰安、日照、東營、德州和聊城等市），群體內按照發(fā)現(xiàn)疫病的策略進行抽樣，置信區(qū)間95%，試驗敏感性100%，預期流行率為10%進行抽樣，抽樣場點存欄量50～500 頭，每個場點抽檢血清樣品30份左右，共采集25 個牛場，采集樣品750 份。去除不合格血清12 份，合格血清樣品共738 份，其中，奶牛場13個，采集血清樣品383份，肉牛場12個，采集血清樣品355份。

牛藍舌病抗體檢測試劑盒購自IDEXX公司，酶標儀為Thermo-MK3（美國），移液器為Eppendorf（德國）。

1.2 試驗方法

試劑使用前需要恢復室溫（18～26 ℃），待檢血清樣品、陰陽性對照用稀釋液做5倍稀釋，混勻。將100 μL 預孵育的樣品加入至包被有抗原的微量反應板，封板在18～26 ℃條件下孵育45 min，每孔用300 μL洗滌溶液洗滌3次，加入100 μL稀釋好的酶標抗體，封板在18～26 ℃條件下孵育30 min，再次洗滌，加入100 μL TMB 底物液避光在18～26 ℃條件下孵育10 min，加入100 μL 終止液，450 nm 波長下進行檢測，計算結果。

1.3 結果判定

計算樣品的S/N值：

若樣品的S/N≥0.8，判定為BTV抗體陰性；

若樣品的S/N＜0.7，判定為BTV抗體陽性；

若樣品 的0.7≤S/N＜0.8，判定為BTV 抗 體可疑。

待檢樣品BTV抗體檢測為陽性，判定該樣品為陽性；場群內有1份及以上樣品檢測為陽性，則該場群判定為陽性場。個體陽性率為該場陽性樣品數量占抽樣數量的百分比；群體陽性率為陽性場點數量占抽樣場點數量的百分比。

2 結果與分析

2.1 奶牛場藍舌病抗體檢測情況

共采集13 個奶牛場，血清樣品383 份，采用ELISA 方法進行藍舌病抗體檢測（表1），其中，2 個場點檢測到陽性樣品，群體陽性率15.38%；383份樣品中2 份樣品為陽性，個體表觀陽性率為0.52%（95%CI：0.06%～1.87%）。從檢測結果來看，個別奶牛場檢測到藍舌病抗體陽性樣品，群體陽性率和個體陽性率均不高。

表1 奶牛場藍舌病抗體檢測結果

2.2 肉牛場藍舌病抗體檢測情況

共采集12 個肉牛場，血清樣品355 份，采用ELISA 方法進行藍舌病抗體檢測（表2），其中，1 個場點檢測到陽性樣品，群體陽性率8.33%；355 份樣品中1 份樣品為陽性，個體表觀陽性率為0.28%（95%CI：0.01%～1.56%）。從檢測結果來看，僅1個肉牛場檢測到藍舌病抗體陽性樣品，群體陽性率和個體陽性率均不高。

表2 肉牛場藍舌病抗體檢測結果

3 討論

采用IDEXX 藍舌病抗體檢測試劑盒對待檢的25 個牛場738 份樣品進行抗體檢測，群體陽性率和個體陽性率分別為12.00% 和0.41%（95%CI：0.08%～1.18%），由于待檢的牛均未進行藍舌病的免疫，抗體陽性表明牛感染過藍舌病，說明在山東省部分規(guī)?；龃嬖谒{舌病感染的風險。

奶牛場的群體陽性率和個體陽性率分別為15.38%和0.52%，肉牛場的群體陽性率和個體陽性率分別為8.33%和0.28%。從牛的不同品種來看，奶牛的群體陽性率和個體陽性率均高于肉牛場，可能與奶牛對藍舌病的易感性較肉牛高有關。由于采樣場點和采樣數量的局限性，本研究不能完全反映2022年山東省規(guī)?；鏊{舌病的流行情況，但是也能反映部分牛場藍舌病的感染狀況。

牛感染藍舌病癥狀較輕，主要表現(xiàn)為口腔黏膜充血、潰瘍、流涎、口鼻分泌物增加，乳房淺表性壞死、滲出等，小?？杀憩F(xiàn)出嚴重的神經癥狀[8]。該病呈全球性分布，主要疫區(qū)分布在歐洲，2015—2020年，歐洲累計因藍舌病疫情死亡的牛羊2.5 萬頭（只），亞洲、非洲和美洲累計病死的牛羊1.8 萬頭（只）[9]。我國目前已經分離到16 個血清型，其中BTV-1、BTV-8和BIT-16已經在我國廣泛流行，尤其是云南等蚊蟲密集的省份以及新疆、內蒙等與蒙古國、中亞國家陸地連接的地域，由于其氣候特點或養(yǎng)殖模式的原因，BTV的流行較為嚴重。

由于血清型較多，不同血清型之間交叉保護力較差，雖然目前已經有弱毒苗和滅活疫苗供臨床應用，但是防控效果不佳，而且BTV 的傳播方式多元化，除了通過帶毒牛、器具的傳播外，還可以通過精液、胎盤、初乳等感染犢牛，也可以通過庫蠓、蜱、蚊蟲等節(jié)肢動物進行傳播，因此，該病的防控也需要采取綜合的防控措施。①做好引種檢測，避免從疫區(qū)或者感染藍舌病的牛場引種，引種后做好疫病或抗體的檢測，檢測合格后隔離45 d 才可混群飼養(yǎng)；②強化疫病檢測，牛感染BTV 多呈隱性感染，一旦出現(xiàn)癥狀，BTV 已經在牛群中流行，因此，需要定期或不定期地對牛群進行血清學或病原學檢測，一旦檢測到陽性牛，立即采取措施；③避免不同畜種混養(yǎng)，BTV 可以感染羊、牛、駱駝等在內的多種反芻動物，如同時飼養(yǎng)其他反芻動物，一旦發(fā)生藍舌病，BTV 容易在場群中不斷復制，難以消除；④做好消毒滅源工作，牛場內勤消毒，將病毒及時殺滅，夏秋雨水季節(jié)，做好蚊蟲等蟲媒的防范工作，避免蚊蟲攜帶病毒傳播給健康牛。