陳 偉，斯張國(guó)，李 靜，祝夕超，李法凱，邵新宇，鄭孟加，藺曉月，孫圣福＊

1 濟(jì)南市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250099

2 萊州市程郭畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺(tái) 261437

3 山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250100

0 引言

牛副結(jié)核?。˙ovine Paratuberculosis）是由副結(jié)核分枝桿菌（M.Paratuberculosis）引起的傳染性疫病，主要感染家養(yǎng)和野生反芻動(dòng)物，以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染病[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將副結(jié)核病列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列入三類動(dòng)物疫病。目前，該病主要在奶牛和肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)流行[2]，1973年，韓有庫(kù)[3]首次在臨床上從牛身上分離到副結(jié)核分枝桿菌，證實(shí)我國(guó)存在牛副結(jié)核病。近年來(lái)，全國(guó)大部分省、市、自治區(qū)均有牛副結(jié)核病報(bào)道[4～6]。由于大部分牛場(chǎng)均未進(jìn)行副結(jié)核免疫，臨床多采用血清學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行診斷和流行病學(xué)調(diào)查。本研究采集山東省部分規(guī)?；?chǎng)的牛血清樣品，采用ELISA方法進(jìn)行抗體檢測(cè)，了解牛副結(jié)核病流行情況，為該病后續(xù)防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣品

在山東省抽檢養(yǎng)牛密集地市（濟(jì)南、泰安、日照、東營(yíng)、德州和聊城等），群體內(nèi)按照發(fā)現(xiàn)疫病策略（置信區(qū)間95%、試驗(yàn)敏感性100%、預(yù)期流行率10%）進(jìn)行抽樣。每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)抽檢血清樣品30 份左右，共25 個(gè)牛場(chǎng)，采集樣品750 份。去除不合格血清12 份，合格血清樣品共738 份，其中13 個(gè)奶牛場(chǎng)采集血清樣品383 份，12 個(gè)肉牛場(chǎng)采集血清樣品355 份。

1.2 試驗(yàn)材料

牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，由IDEXX公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀Thermo-MK3，由美國(guó)賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)；移液器Eppendorf。

1.3 試驗(yàn)方法

試劑使用前需恢復(fù)室溫（18～26 ℃）。待檢血清樣品、陰陽(yáng)性對(duì)照用稀釋液做20 倍稀釋，混勻，18～26 ℃孵育15 min至2 h。將100 μL預(yù)孵育樣品加入包被有抗原的微量反應(yīng)板。封板在18～26 ℃孵育45 min。每孔用300 μL洗滌液洗滌3 次。加入100 μL稀釋好的酶標(biāo)抗體，封板在18～26 ℃孵育30 min，再次洗滌，加入100 μL TMB底物液，避光在18～26 ℃孵育10 min，加入100 μL終止液，450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，計(jì)算結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

若樣品的S/P值小于或等于45%，判為MAP 抗體陰性。

若樣品的S/P值大于45%且小于55%，判為MAP抗體可疑，應(yīng)重新檢測(cè)。

若樣品的S/P值大于或等于55%，判為MAP 抗體陽(yáng)性。

待檢樣品MAP抗體檢測(cè)為陽(yáng)性，判定該份樣品為陽(yáng)性；場(chǎng)群內(nèi)有1 份及以上樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，則該場(chǎng)群判定為陽(yáng)性場(chǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 奶牛場(chǎng)副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)情況

共采集13 個(gè)奶牛場(chǎng)血清樣品383 份，采用ELISA方法進(jìn)行副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)，其中6 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)檢測(cè)到陽(yáng)性樣品，群體陽(yáng)性率46.15%，陽(yáng)性群體中的個(gè)體陽(yáng)性率為3.33%～30.00%，383 份樣品中有23 份樣品為陽(yáng)性，總個(gè)體陽(yáng)性率6.01%（表1）。

表1 奶牛場(chǎng)副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 肉牛場(chǎng)副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 肉牛場(chǎng)副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)情況

共采集12 個(gè)肉牛場(chǎng)血清樣品355 份，采用ELISA方法進(jìn)行副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)，其中6 個(gè)場(chǎng)點(diǎn)檢測(cè)到陽(yáng)性樣品，群體陽(yáng)性率50.00%，陽(yáng)性群體的個(gè)體陽(yáng)性率3.33%～13.33%，355 份樣品中有12 份樣品為陽(yáng)性，總個(gè)體陽(yáng)性率為3.38%。

納稅人在學(xué)歷（學(xué)位）繼續(xù)教育期間按照每月400元定額扣除。個(gè)人接受本科及以下學(xué)歷（學(xué)位）繼續(xù)教育，符合規(guī)定條件的，可以選擇由其父母扣除，也可以選擇由本人扣除。

3 結(jié)論

3.1 山東省部分規(guī)?；?chǎng)存在牛副結(jié)核病

從檢測(cè)結(jié)果分析，采用IDEXX牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)待檢25 個(gè)牛場(chǎng)的738 份樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)，群體陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為48.00%和4.74%，由于待檢牛均未進(jìn)行牛副結(jié)核病的免疫，表明該省部分規(guī)?；?chǎng)存在牛副結(jié)核病感染。

3.2 不同品種牛對(duì)副結(jié)核分枝桿菌的易感性不同

奶牛場(chǎng)群體陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為46.15%和6.01%，肉牛場(chǎng)的群體陽(yáng)性率和個(gè)體陽(yáng)性率分別為50.00%和3.38%。肉牛場(chǎng)的群體陽(yáng)性率略高于奶牛場(chǎng)，可能與奶牛場(chǎng)管理水平較高有關(guān)。奶牛個(gè)體陽(yáng)性率較肉牛高，且奶牛場(chǎng)陽(yáng)性群體的個(gè)體陽(yáng)性率比肉牛場(chǎng)高，說(shuō)明奶牛對(duì)牛副結(jié)核病的易感性較肉牛高，這與其他學(xué)者對(duì)不同品種牛的牛副結(jié)核病檢測(cè)結(jié)果基本一致[7]。由于采樣場(chǎng)點(diǎn)和數(shù)量局限，本研究不能完全反映山東省牛副結(jié)核病的流行情況，但能反映部分牛場(chǎng)牛副結(jié)核病的流行情況。

4 討論

4.1 牛副結(jié)核病的危害

牛副結(jié)核病的危害主要是引起患牛消瘦、生產(chǎn)性能下降、飼料轉(zhuǎn)化率降低、產(chǎn)奶量下降、受胎間隔時(shí)間延長(zhǎng)，引發(fā)乳房炎和繁殖障礙、易感染其他病原甚至造成死亡等。該病呈全球性分布，尤其是養(yǎng)牛發(fā)達(dá)國(guó)家如美國(guó)、英國(guó)、澳大利亞等受害更嚴(yán)重。2013 年美國(guó)奶牛的該病個(gè)體陽(yáng)性率為5%～10%，牛群陽(yáng)性率為91.1%[8]。英格蘭的調(diào)查材料表明，該病在英格蘭的流行率為18%。英國(guó)1969—1970年統(tǒng)計(jì)報(bào)告指出，該病是淘汰奶牛的第一病因，其次是不孕癥和流產(chǎn)[9]。牛副結(jié)核病可通過(guò)患病牛的乳、肉制品及內(nèi)臟器官或被污染環(huán)境、水源等感染人，表現(xiàn)為潰瘍性腸炎、過(guò)敏性腸道癥狀，未見(jiàn)人與人直接傳播的報(bào)道[10]。

4.2 牛副結(jié)核病的防控

國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品化的牛副結(jié)核病疫苗，因此該病防控主要采用引種檢測(cè)、消毒滅源、生物安全管理等綜合性措施。該病主要發(fā)生在新生犢牛，年齡越小越易感，因此強(qiáng)化圍產(chǎn)期母牛及犢牛管理，減少犢牛接觸病原是預(yù)防該病的關(guān)鍵。此外，養(yǎng)牛企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格做好引種檢疫，不從疫區(qū)引種。場(chǎng)外引種時(shí)做好檢測(cè)，檢測(cè)合格牛做好隔離，隔離45 天后方可混群飼養(yǎng)。同時(shí)，做好場(chǎng)區(qū)消毒滅源工作，副結(jié)核病可感染包括牛、羊、馬、豬、黃鼠狼在內(nèi)的多種動(dòng)物，病畜和潛伏感染的帶菌畜是主要傳染源，其分泌乳汁和排出糞便、尿液，以及水源、生產(chǎn)工具等都是潛在傳染源，因此，做好場(chǎng)區(qū)消毒工作是該病防控的有效措施之一。

該病是一種人畜共患傳染病，科學(xué)防控不僅減少畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)損失，也是貫徹“人病獸防、關(guān)口前移”人畜共患病的防控策略之一。