劉寬輝,張威龍,黎婷,謝詩慧,許澤軍,蔡永強,朱園園

(1.蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院 食品與生物工程學(xué)院,安徽 蕪湖 241000;2.合肥京科寵物醫(yī)院,安徽 合肥 230031)

貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)是貓冠狀病毒(FCoV)突變而來,FCoV具有兩種生物型:一類為貓腸道冠狀病毒(FECV),普遍存在于貓腸道內(nèi),一般不致病或引起貓輕度腸炎;另一類為FIPV,毒力強,感染后引起腹膜炎并伴隨著其他的病癥,如腸炎、腹水、胸水等[1]。FIPV感染主要與機體產(chǎn)生抗體依賴性增強作用有關(guān),即同血清型FCoV感染有助于提升FIPV感染力,因FCoV普遍存在于貓體內(nèi),以及養(yǎng)貓人群的逐年擴大,導(dǎo)致貓傳染性腹膜炎(FIP)流行性呈上升趨勢。FIPV主要通過消化道、呼吸道和生物媒介傳播,未成年貓感染多與機體內(nèi)母源抗體消失有關(guān),老年貓感染多與機體免疫力下降相關(guān),群居飼養(yǎng)的貓感染率顯著高于一般家庭單獨飼養(yǎng)貓感染率,說明本病水平傳播較嚴(yán)重[2]。

臨床上FIP主要分為滲出型和非滲出型兩種,滲出型FIP臨床上較為常見,以機體腹腔、胸腔有液體滲出和臟器腫大為特征[3-4];非滲出型FIP主要以臟器肉芽腫為特征,并伴有神經(jīng)癥狀[5-6]。近年來臨床上也多出現(xiàn)混合型FIP,即機體出現(xiàn)肉芽腫的同時并伴有滲出液現(xiàn)象[7]。目前市場上缺乏FIPV疫苗,增加FIP預(yù)防難度,提升了FIP感染率。FIP主要治療藥物為GC-376與GS-441524,GS-441524治療效果優(yōu)于GC-376,可有效地降低FIP致死率[8-9]。本文結(jié)合一例滲出型FIP病例,進(jìn)行綜合診斷及治療,分析FIPV病原特征,為FIP疾病防治提供可靠依據(jù)。

1 病例介紹

德文卷毛貓,3月齡,雄性,體重1.53 kg,剛買回一個月,已接種一針疫苗(疫苗接種種類不詳)。貓消瘦,挑食,日常主食以罐頭為主,貓糧較少食用,近期精神不振,呼吸急促,有皮膚瘙癢史。

2 臨床、影像學(xué)及實驗室檢查

2.1 臨床檢查

體溫39.8℃,呼吸55次/min,心率156次/min,可視粘膜蒼白,皮膚彈性差,脫水現(xiàn)象較明顯,肺部聽診呼吸音加重,心音聽診模糊不清,胸圍增大。

2.2 影像學(xué)檢查

2.2.1 DR 檢查結(jié)果 胸腔密度增加,心臟輪廓消失,肺臟紋理消失(圖1 A圖標(biāo)記所示),提示胸腔內(nèi)有大量液體壓迫肺臟;膈肌后移,腹腔內(nèi)漿膜紋理消失,肝臟腫大,腸道內(nèi)聚集大量氣體(圖1 B圖標(biāo)記所示),見圖1。

圖1 治療前DR檢查結(jié)果

2.2.2 B超檢查 胸膜腔內(nèi)見大量無回聲的胸腔積液以及塌陷的肺葉(圖2 A圖標(biāo)記所示),腹腔腸道淋巴結(jié)增大(圖2 B圖箭頭所示)。見圖2。

圖2 治療前B超檢查結(jié)果

2.3 實驗室檢查結(jié)果

2.3.1 血常規(guī)檢查結(jié)果 血常規(guī)檢查白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)及百分比、紅細(xì)胞數(shù)均高于參考值,淋巴細(xì)胞百分比、平均紅細(xì)胞體積和血小板體積低于參考值。見表1。

表1 治療前血常規(guī)檢查結(jié)果

2.3.2 血液生化檢查結(jié)果 血液生化檢查總蛋白、球蛋白、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和血清淀粉樣蛋白—A均高于參考值,白蛋白與球蛋白比值低于參考值。見表2。

表2 治療前血液生化及SAA檢查結(jié)果

2.3.3 李凡他試驗結(jié)果 胸腔穿刺收集胸水進(jìn)行李凡他試驗,胸水滴入酸液內(nèi),出現(xiàn)絲狀蛋白沉淀,結(jié)果判定為陽性。

2.3.4 RT-PCR檢查結(jié)果 胸腔穿刺收集胸水進(jìn)行RT-PCR檢測試驗,有明顯S型擴增曲線,且Ct值小于30,結(jié)果判定FIP。見圖3。

3 診斷

根據(jù)體溫升高、脫水、胸腔積液及李凡他試驗陽性、白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)增加等特征,判定該幼貓因毛細(xì)血管壁通透性增加導(dǎo)致的血管炎生成胸腔積液,再依據(jù)SAA為7顯著高于參考值(<2 mg/L)及A/G比值0.37低于參考值0.4,疑是FIP;最后通過FIP RT-PCR試驗結(jié)果為陽性判定本病為FIP。

4 治療

4.1 治療原則

對癥治療,去除病因,糾正酸堿電解質(zhì)平衡紊亂,補充營養(yǎng),防治繼發(fā)感染。

4.2 治療方案

第1天:GS-441524皮下注射2 mL,每天一次;頭孢噻呋,30 mg/kg,靜脈注射,每天兩次;甲硝唑氯化鈉,5 mL/kg ,靜脈注射,每天兩次;托芬那酸,4 mg/kg ,皮下注射,每天兩次;呋塞米,4 mg/kg靜脈注射,每天兩次;白蛋白,3 mL/kg,5%的葡萄糖溶液稀釋靜脈注射,每天兩次;鉀離子溶液,3 mL,靜脈注射,每天兩次;超聲引導(dǎo)下胸水抽取,24 h吸氧治療。

第2-3天:相較于第一天增加葡萄糖酸鈣4 mL,靜脈注射每天兩次;布托啡諾,0.5 mg/kg,皮下注射,每天2次;不再使用托芬那酸和鉀離子溶液,其余治療相同。

第4-5天:GS-441524、頭孢噻呋、甲硝唑氯化鈉、布托啡諾和白蛋白同樣使用,增加強力止瀉片與乳鐵蛋白各1片每次,每天兩次;6小時吸氧治療。

第6-7天:不再給予吸氧治療,其余治療同第4-5天。

第7天后:GS-441524皮下注射2 mL,每天一次,連用4周;其余藥物根據(jù)每天癥狀進(jìn)行調(diào)整治療。

5 轉(zhuǎn)歸

5.1 DR檢查結(jié)果

治療后第七天見胸部輪廓清晰,胸水明顯減少。見圖4。

5.2 實驗室檢查結(jié)果

分別與治療后第7天、30天和60天對本病例進(jìn)行實驗室檢查。治療后第7天該病例白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和SA任偏高,A/G比值為0.4,提示該病例任有炎癥期,相較于之前病情大有好轉(zhuǎn);治療第30天以后各項指標(biāo)已基本恢復(fù)正常,表明該病貓已基本恢復(fù)健康。見表3。

表3 治療后實驗室檢查結(jié)果

6 討論與分析

6.1 FIP病原特征分析

FIPV屬FCoV成員,直徑100 nm,基因組約29 kb[10],對環(huán)境抵抗力不強,絕大部分消毒劑均可殺滅本病毒。FCoV有11個開放閱讀框,編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白,分別為棘突(S)蛋白、包膜(E)蛋白、膜(M)蛋白和核衣殼(N)蛋白。S蛋白是病毒附著細(xì)胞的主要因素,決定病毒血清型[11];E蛋白不影響FCoV的復(fù)制但影響病毒的獨立作用[12];M蛋白是FCoV含量最豐富的糖蛋白,可引起機體細(xì)胞免疫[13],免疫作用相較于N蛋白效果一般;N蛋白是FCoV基因組保護(hù)蛋白,決定病毒抗原性,誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細(xì)胞免疫,是生物檢測病毒抗原性的靶標(biāo)蛋白[14]。FCoV生物型分為FECV和FIPV兩種,FECV致病力弱,但其感染后更利于FIPV感染[2]。FIPV被機體巨噬細(xì)胞吞噬后不會被破壞,依然不斷復(fù)制,并通過巨噬細(xì)胞傳播到機體各組織器官,引起免疫應(yīng)答產(chǎn)生Ⅲ超敏反應(yīng),FIPV與免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物激活補體系統(tǒng),引發(fā)更為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[15],造成組織器官的損傷。

6.2 FIP診斷分析

FIP診斷目前常用影像學(xué)、實驗室和分子生物學(xué)診斷。影像學(xué)DR和B超常用于動物臟器病變檢查,如胸腹腔積液、器官腫大及結(jié)節(jié)等,影像學(xué)檢查對滲出型FIP具有較高的診斷價值[16]。本病例影像學(xué)檢查可見胸腹腔積液、肝臟腫大及淋巴結(jié)腫大等特征,李凡他試驗結(jié)果陽性,表明患貓腹腔積液為滲出液。胸腹腔液體滲出,可致機體脫水,血常規(guī)檢測紅細(xì)胞數(shù)目相對增多,由于機體脫水紅細(xì)胞及血小板受影響體積縮小。因此,滲出型FIP在血常規(guī)檢查可見上述幾項指標(biāo)異常,表明機體處于脫水狀態(tài)[17]。本病例可見患貓因機體滲出液過多已出現(xiàn)脫水癥狀。貓傳染性腹膜炎可引起機體中性粒細(xì)胞數(shù)目增多,淋巴細(xì)胞減少[18],本病例可見患貓中性粒細(xì)胞增多、白細(xì)胞減少。多種疾病均可導(dǎo)致貓出現(xiàn)血常規(guī)檢查異常,因此無法通過血常規(guī)檢查對FIP進(jìn)行確診,但對FIP輔助診斷及治療具有重要價值。FIP可致患貓肝臟病變,引起肝臟腫大及功能障礙。本病例檢查可見肝臟腫大,丙氨酸轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶活性顯著增高,表明患貓已出現(xiàn)肝損壞,后期治療需要保肝護(hù)理。血清淀粉樣蛋白—A是急性期蛋白,一種重要的炎癥指標(biāo),白蛋白與球蛋白比值偏低表明具有肝功能障礙、FIP可能,當(dāng)白蛋白與球蛋白比值比值低于0.4、SAA高于2 mg/L時可懷疑疾病為FIP[19]。本病例可見血清淀粉樣蛋白—A濃度已達(dá)到7 mg/L,白蛋白與球蛋白比值為0.37低于0.40,可疑患貓為FIP。為進(jìn)一步對本病例進(jìn)行確診,采用分子生物學(xué)技術(shù)RT-PCR進(jìn)行診斷,RT-PCR因其特異性強、操作簡便及準(zhǔn)確性高等特點,已成為FIP診斷新標(biāo)準(zhǔn)[20]。本病例RT-PCR檢測結(jié)果出現(xiàn)FIPV熒光曲線,確診為FIP。

6.3 FIP治療藥物分析

目前市場上缺乏有效的疫苗預(yù)防FIP疾病,因此藥物治療是解決FIP最佳途徑。FIP治療的特效藥物為抗病毒藥物,如GS-441524與GC-376,主要通過抑制FIPV復(fù)制或蛋白合成過程抑制病毒繁殖生長[21-22],達(dá)到治療本病效果。GS-441524治療效果優(yōu)于GC-376。GS-411524分子式如圖5所示。

圖5 GS-411524分子式

GS-441524學(xué)名為三磷酸核苷競爭性抑制劑,是一類小分子核苷酸藥物,主要通過抑制RNA病毒復(fù)制達(dá)到治療效果。GS-441524進(jìn)入機體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行磷酸化反應(yīng)生成三磷酸鹽代謝物(NTP),NTP在胞內(nèi)與天然三磷酸核苷酸競爭性結(jié)合RNA聚合酶,干擾FIPV在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過程,阻斷FIPV的生物合成,起到治療作用[21]。

7 小結(jié)

FCoV廣泛存在于貓體內(nèi),隨著國內(nèi)養(yǎng)貓人群逐年擴大,FIP流行性呈逐年上升趨勢。目前國內(nèi)外對FIP發(fā)病機制及抗原性仍處于研究狀態(tài),導(dǎo)致FIP目前尚無有效疫苗。市場上出現(xiàn)的GS-441524與GC-376藥物能夠抑制FIPV的復(fù)制與蛋白合成,治療效果顯著,但仍存在治療時間長和藥物副作用等缺點,亟需研發(fā)FIPV特效生物藥品。本文結(jié)合滲出型FIP病例,通過診斷、治療及對FIPV病原特征進(jìn)行分析,為FIP防治提供理論依據(jù)。