胡曉東 李小月 王萬俊 朱芳來 喻朝霞 査 勇 吳珍珍

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是一種只有一條環(huán)狀染色體的多鞭毛、單極、螺旋形彎曲、末端鈍圓的原核桿菌，有1～2 個微小彎曲，菌體長2～4 μm，寬0.5～1.0 μm。Hp是革蘭氏陰性菌，不分解糖類，菌落富含尿素酶，可分解尿素釋放氨，是鑒定該菌的主要依據(jù)。在培養(yǎng)基中，細(xì)菌常生長為S形或呈海鷗型。培養(yǎng)Hp所需條件較高，需要5%～10%的二氧化碳和5%的氧氣，同時需要動物血清及37 ℃的培養(yǎng)環(huán)境[1]。在Hp直接的細(xì)胞毒性作用中，存在一種導(dǎo)致Hp感染位置產(chǎn)生炎性反應(yīng)的重要效應(yīng)蛋白，該蛋白具有遺傳基因多態(tài)性和地區(qū)分布的差異，同時與消化道潰瘍、胃炎、胃癌及一些非胃腸道疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并影響胃損害的嚴(yán)重程度及臨床結(jié)局。其致病機制主要與影響多條細(xì)胞信息傳遞通路有關(guān)[2]。Hp感染導(dǎo)致不同的臨床結(jié)局，這是由Hp不同的毒力菌株、宿主遺傳背景及環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[3]。鑒于以上背景，Hp在感染率、感染類型以及最終致病結(jié)果上存在一定的地域性差異。本文通過對安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶第一人民醫(yī)院參與健康體檢的10008 例健康體檢者，采用ELISA法、免疫印跡法、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)進(jìn)行血清學(xué)檢測，以探究安徽省安慶市市區(qū)Hp的感染率情況及相關(guān)細(xì)胞因子水平，并初步探討其免疫學(xué)機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧性分析2019年4月-2021年8月在安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶第一人民醫(yī)院參與健康體檢者10008 例，所有人均已簽署知情同意書并知曉相關(guān)內(nèi)容。

1.2 儀器與試劑 幽門螺桿菌抗體分型相關(guān)實驗采用伯勞特（深圳）公司生產(chǎn)的幽門螺桿菌抗體分型檢測試劑盒，并搭配其對應(yīng)的免疫印跡儀使用；血清胃蛋白酶原采用蘇州長光華醫(yī)生物醫(yī)學(xué)工程公司提供的胃蛋白酶原試劑盒及其配套的全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測；胃泌素G-17 采用北京正旦國際科技有限責(zé)任公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒檢測，其余細(xì)胞因子水平檢測采用美國BD公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒，并搭配美國BioTech公司酶標(biāo)儀檢測。

1.3 實驗步驟 ①所有體檢者分批采血、分批檢驗，清晨6：00-8：00 在檢驗科窗口采集空腹靜脈外周血5 mL，4000 轉(zhuǎn)/min離心15 min，收集血清并做好標(biāo)記。幽門螺桿菌分型實驗按照伯勞特（深圳）公司所售試劑盒說明書要求操作，結(jié)果判讀時：出現(xiàn)質(zhì)控帶，且空泡毒素（CagA）、穿孔蛋白（VacA）區(qū)帶出現(xiàn)一種或二者同時出現(xiàn)，則為HpⅠ型感染；出現(xiàn)質(zhì)控帶，尿素酶A（UreA）和尿素酶B（UreB）區(qū)帶出現(xiàn)一種或二者同時出現(xiàn)，且未見CagA，VacA帶，則為Hp Ⅱ型感染；僅出現(xiàn)質(zhì)控帶則為陰性結(jié)果。②測定胃蛋白酶原PG I和胃蛋白酶原PG Ⅱ時，樣品與特異性單克隆抗體反應(yīng)后形成抗體-抗原-抗體夾心復(fù)合物。復(fù)合物形成固相后，反應(yīng)溶液中的磁性顆粒被磁場吸附，未結(jié)合的化合物被清除。加入底物溶液，然后檢測化學(xué)發(fā)光光子的強度。光強度與血清樣品中胃蛋白酶原的濃度成正比。樣品中分析物的量由多點校準(zhǔn)曲線確定。③G-17與其它細(xì)胞因子水平檢測實驗按照各自ELISA試劑盒說明書要求操作，加入終止液后即刻使用酶標(biāo)儀，檢測出OD值并換算出具體濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究使用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計數(shù)資料以百分比（n%）形式表示；計量資料則以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式表示，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 安慶市區(qū)健康體檢人群近年來幽門螺桿菌感染情況分析 安慶市健康體檢人群中，陰性率為41.16%（4119/10008）、Hp總體感染率為58.84%（5889/10008），其中HpⅠ型感染率33.99%（3402/10008）高于HpⅡ型的24.85%（2487/10008）。

2.2 不同性別組體檢人群的，HpⅠ型感染與HpⅡ型感染情況分析 女性HpⅠ型、HpⅡ型和總感染率分別為14.86%、11.33%和26.19%。同時，男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和總感染率分別為19.13%、13.52%和32.65%。男性HpⅠ型、HpⅡ型感染率和總感染率均高于女性，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 安慶市市區(qū)健康體檢人群不同性別Hp感染率分析 例(%)

2.3 不同年齡組體驗人群的HpⅠ型感染與HpⅡ型感染情況分析 根據(jù)年齡可分為七組，各年齡組間Hp抗體陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=529.652、1751.295、70.807，均P＜0.01），見表2。

表2 安慶市市區(qū)健康體檢人群不同年齡Hp感染率 例(%)

2.4 不同感染類型組體驗人群的各種細(xì)胞因子水平情況分析 本市健康體檢人群中，相對于沒有感染Hp的體檢者，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ與TNF-α在感染者體內(nèi)均有所升高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，兩種免疫應(yīng)答類型均發(fā)揮著重要作用，缺一不可。而在HpⅠ型感染者與HpⅡ型感染者之間，除IL-8 外，上述細(xì)胞因子水平則沒有顯著差異。胃泌素-17（G-17）僅在HpⅡ型感染著體內(nèi)顯著升高，PGI與PGⅡ在兩種感染者體內(nèi)均有顯著升高，但二者的比值在感染前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表3。

表3 安慶市區(qū)健康體檢人群不同Hp感染類型分組后各細(xì)胞因子水平分析（±s）

表3 安慶市區(qū)健康體檢人群不同Hp感染類型分組后各細(xì)胞因子水平分析（±s）

注：★：P＜0.05；★★：P＜0.01；★★★：P＜0.001，與幽門螺桿菌陰性組相比

感染類型IL-1β(ng/L) IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)IL-10(ng/L) IFN-γ(ng/L)TNF-α(ug/L)G-17(pmol/L) PGI(ng/mL) PGⅡ(ng/mL) PGRⅠ型 9.18±3.46★★★13.74±8.88★★116.27±14.14★★★61.45±21.11★★★24.95±15.87★16.31±9.99★ 4.30±3.67 118.14±35.36★★★14.69±8.67★★★14.79±23.80Ⅱ型 9.68±1.98★★★13.50±6.79★★93.55±13.62★★44.79±18.19★★★26.94±9.40★★16.04±12.45★6.68±16.51★★ 81.87±32.07 9.21±5.26 10.04±3.62陰性3.15±1.80 1.77±1.23 61.40±24.954.75±3.848.57±6.28 4.35±3.39 0.650±0.43 85.30±25.21 6.99±2.46 12.68±2.77

3 討 論

幽門螺桿菌作為一種對外界生長環(huán)境十分苛刻的螺旋形、兼性厭氧型原核細(xì)菌，是唯一一種能在胃酸環(huán)境中生存的微生物。Hp存在兩種重要的毒力因子，即細(xì)胞空泡毒素（VacA）和細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA），VacA能使細(xì)胞產(chǎn)生空泡變性的蛋白，分子量為87 KD，此蛋白能通過改變離子通透性導(dǎo)致細(xì)胞空泡形成，進(jìn)而損傷胃黏膜，造成糜爛或潰瘍形成。CagA蛋白分子量為120～140 KD，其致病作用尚未完全明確，無致空泡變性的作用，但是CagA與VacA之間存在良好的相關(guān)性，可視為Hp的毒力標(biāo)志。根據(jù)Hp可否表達(dá)VacA和CagA，將Hp分為Ⅰ和Ⅱ型兩個亞型，Ⅰ型Hp菌株分泌含有VacA和或CagA，為高毒力菌株，與消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生關(guān)系密切；Ⅱ型Hp菌株不表達(dá)VacA和CagA，這類菌株毒性相對較小[4]。Hp主要通過消化道進(jìn)入人體，即所謂“病從口入”。目前主流觀點認(rèn)為一旦感染Hp就應(yīng)立刻、全部消滅，常規(guī)方法為服用胃酸抑制藥物（PPI）、抗生素及鉍制劑，但根除率并非100%[5]。因此，調(diào)查并了解人群Hp感染情況、研究致病機理就顯得十分必要。

安慶市作為“全國文明城市”，生活節(jié)奏較慢，尤其是聚餐文化盛行更是給Hp在人群中的傳播提供了便利條件。本研究的主要對象是在市區(qū)工作的成年人，合餐制聚餐較多，這使得可以通過“口-口”途徑傳播的Hp有機會在此類人群中傳播。因此，在全國Hp感染率呈逐年下降趨勢的背景下，安慶市區(qū)Hp感染率仍然與10 余年前的全國平均感染水平58%幾乎保持一致[6]，這表示安慶市區(qū)人們生活水平的提升并未完全帶動衛(wèi)生習(xí)慣的改善，例如，在聚餐時公筷、公勺的使用仍然是一個容易被忽視的問題。需要提出的是，本次研究的對象幾乎全是在市區(qū)工作的體檢人群，而安慶地處皖西南，下轄縣級區(qū)域較多，各縣衛(wèi)生習(xí)慣、生活水平與市區(qū)存在一定的差異，故本次研究未能反映整個“大安慶”地區(qū)的全面情況。另外，尚未成年的兒童由于幾乎沒有體檢病例，也被排除在研究之外。但有研究顯示Hp在兒童中反而有著更高的感染率[7]。有待后續(xù)研究完善上述不足之處。相對于碳呼氣實驗與快速尿酶實驗，本次研究所采用的免疫印跡實驗不僅陽性檢出率高，且能對Hp感染進(jìn)行分型[8]，從而可對后續(xù)治療提供指導(dǎo)意見。

綜上所述，安徽省安慶市區(qū)健康體檢人群中Hp感染率隨年齡增長而增加，60～69 歲感染率最高，70 歲后降低。60～69 歲Hp感染者G-17 和PG水平顯著高于未感染人群。與HpⅡ型感染者相比，HpⅠ型感染者PG水平較高，但兩者之間G-17 水平?jīng)]有差異。加強易感人群健康教育，改善本地衛(wèi)生條件，及時根除感染，對預(yù)防本地Hp感染具有關(guān)鍵作用。