冉江玲 葉世蕓 鑒志剛 李向東 劉宗緒

基金項(xiàng)目：

2019年貴州中醫(yī)藥大學(xué)橫向課題（No.3052-052190026）。

作者簡介：

冉江玲（1999—），女，土家族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅庂|(zhì)量控制及新藥研發(fā)。E-mail：1968932864@qq.com

通信作者：

葉世蕓（1966—），女，漢族，學(xué)士，教授，研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅庂|(zhì)量控制和新藥研發(fā)。E-mail：1043842510@qq.com

【摘? 要】

目的：建立氣相色譜法測定新加香薷飲有效部位揮發(fā)油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚含量的方法。方法：色譜柱為HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；FID檢測器；檢測器溫度240℃；進(jìn)樣口溫度240℃；程序升溫，以40℃為起始溫度，保持2 min，以5℃/min升至70℃，以0.5℃/min升至74℃，以5℃/min升至110℃，以10℃/min升至140℃；載氣為高純度氮?dú)猓ǎ?9.99%）；柱流量為2.0mL/min；分流比為20∶1；進(jìn)樣量為1 μL。結(jié)果：α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚檢測質(zhì)量濃度的線性范圍分別為0.09～0.61mg/mL、0.28～1.93mg/mL、0.18～1.29mg/mL、0.07～0.47mg/mL，（r值均大于0.999）；檢測限分別為0.31μg/mL、0.32μg/mL、0.25μg/mL、0.34μg/mL，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性（24 h）試驗(yàn)的RSD/%均小于0.03％，平均加樣回收率分別為96.22%、94.79%、96.96 %、99.35%，RSD均小于3%。結(jié)論：建立的含量測定方法穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確可行，可作為新加香薷飲質(zhì)量控制的有效方法。

【關(guān)鍵詞】

氣相色譜；香荊芥酚；新加香薷飲；α-蒎烯；β-蒎烯；麝香草酚

【中圖分類號】R284.1??? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）22-0019-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.22.zgmzmjyyzz202322006

Determination of the Content of 4 Components in Volatile Oil in the Active Part of the Xinjia Xiangru Decoction

RAN Jiangling1? YE Shiyun1*? JIAN Zhigang1? LI Xiangdong2? LIU Zongxu1

1.Guizhou University Of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002，China;

2.Guizhou Dexuantang Hukang Pharmaceutical Co. Ltd， Guiyang 550008，China

Abstract：

Objective To establish a method for determining the contents of α-pinene， β-pinene， thymol and vitexin in volatile oil in the effective part of Xinjia Xiangru Decoction by gas chromatography. Methods The column was HP-5 capillary column （30 m×0.32 mm， 0.5 μm）. FID detector： Detector temperature 240℃; Inlet temperature 240℃; Programmed temperature increase， with 40℃ as the starting temperature， maintained for 2 min， 5℃/min to 70℃，0.5℃/min to 74℃， 5℃/min to 110℃， 10℃/min to 140℃; The carrier gas is high-purity nitrogen （>99.99%）; The column flow rate was 2.0mL/min; The split ratio is 20∶1 and the injection volume is 1μL. Results The linear ranges of mass concentrations of α-pinene， β-pinene， thymol and vitex were 0.09-0.61mg/mL， 0.28-1.93mg/mL， 0.18-1.29mg/mL， 0.07-0.47mg/mL， respectively， （r-values were greater than 0.999）， the detection limits were 0.31μg/mL， 0.32μg/mL， 0.25μg/mL and 0.34μg/mL， respectively， and RSD/% of precision， repeatability and stability （24 h） all were less than 0.03%， the average dosing recovery rates were 96.22%， 94.79%， 96.96%， and 99.35%， respectively， and the RSD was less than 3%.Conclusion The established method is specific， rapid and accurate， and can be used to determine the content of Xinjia Xiangru Decoction.

Keywords：

Gas Chromatography；Carnepeto；Xinjia Xiangru Decoction；α-Pinene；β-Pinene；Thymol

新加香薷飲出自中國清代吳鞠通的《溫病條辨》［1］上篇，是由香薷、金銀花、厚樸、連翹、扁豆花5味中藥所組成的祛濕解表的經(jīng)典名方，具有祛濕平肝風(fēng)、化濕和中的功效，臨床應(yīng)用主要集中在夏季的暑濕型流感、高熱、中暑等疾?。?-6］。新加香薷飲已收錄于中國國家中醫(yī)藥管理局2018公布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中。近幾年，國家對經(jīng)典名方十分重視，連續(xù)發(fā)布相關(guān)政策，對其質(zhì)量控制方面要求更加嚴(yán)格。目前關(guān)于新加香薷飲的品質(zhì)管理資料缺乏，且理論研究比較薄弱，建立控制新加香薷飲質(zhì)量的分析方法顯得尤為重要。含量測定和指紋圖譜是中醫(yī)藥質(zhì)量控制方面的常用重要技術(shù)手段［7］。課題組前期建立了新加香薷飲揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜，指認(rèn)了4個色譜峰，分別為君藥香薷中的麝香草酚、香荊芥酚和臣藥連翹中的α-蒎烯、β-蒎烯［8］，且均具有廣譜的抗菌作用［9-10］。香薷中麝香草酚、香荊芥酚為2020版我國藥典中，評價香薷品質(zhì)的指標(biāo)性成分［11］。參照2020版《中國藥典》并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，采用氣相色譜法對以上4種成分進(jìn)行含量測定，為新加香薷飲的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1? 儀器與試藥

1.1? 儀器? Agilent7890氣相色譜儀及Agilent HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32mm，0.5μm）（美國安捷倫公司）；DZTW調(diào)溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療 儀器有限公司）；電子天平（精度為十萬分之一，杭州友恒稱重設(shè)備有限公司）。

1.2? 試劑與試藥? α-蒎烯（批號：GZDD0228-201217，純度≥99.00%）、β-蒎烯（批號：C101512-201109，純度≥99.00%）、麝香草酚（批號：C100179-191125，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、香荊芥酚（批號：C102093-201028，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%）、水楊酸甲酯（批號：C1000285-1，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%）均購自貴州迪大科技有限責(zé)任公司；乙酸乙酯（色譜純）；水為純水。16批新加香薷飲藥材（編號S1-S16）各藥材均購自其道地產(chǎn)區(qū)或主產(chǎn)區(qū)，所有藥材由貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為正品。新加香薷飲5味藥材信息來源見表1。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 色譜條件? HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32mm，0.5μm）；FID檢測器；檢測器溫度240℃；進(jìn)樣口溫度240℃；程序升溫，以40℃為起始溫度，保持2 min，以5℃/min升至70℃，以0.5℃/min升至74℃，以5℃/min升至110℃，以10℃/min升至140℃；載氣為高純度氮?dú)猓ǎ?9.99%）；柱流量為2.0 mL/min；分流比為20∶1；進(jìn)樣量為1 μL。

2.2? 溶液的制備

2.2.1? 供試品溶液的制備? 通過對古代劑量換算方面研究的論文、相關(guān)中醫(yī)古籍及有關(guān)度量衡研究方面的專著進(jìn)行研究，明確了新加香薷飲中有關(guān)劑量單位“兩”“錢”的換算。明清時期，1兩約為37.3g，1錢為3.73g的折算方法。原方組成及用量記載為：“香薷（二錢）、銀花（三錢）、鮮扁豆花（三錢）、厚樸（二錢）、連翹（二錢）?！眲t轉(zhuǎn)換為現(xiàn)代換算為：香薷、厚樸、連翹各7.46 g，金銀花及扁豆花各11.19 g。分別稱量香薷、厚樸、連翹各7.46 g，金銀花及扁豆花各11.19 g，加水浸泡30 min，照2020年版《中國藥典》四部通則2204揮發(fā)油測定法甲法操作，于測定器上端加水使之充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，再加乙酸乙酯5 mL，加熱回流2 h，分取乙酸乙酯液，用鋪有無水硫酸鈉的漏斗濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，即得。

2.2.2? 混合對照品溶液的制備? ①單一對照品儲備液：分別精密稱取α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚對照品8.75mg、91.60mg、45.94mg、6.69mg，加入乙酸乙酯分別定容至1 mL、10 mL、5 mL、1 mL容量瓶中，得到各成分濃度為8.75mg/mL、9.16mg/mL、9.19mg/mL、6.69mg/mL的單一對照品儲備液。②內(nèi)標(biāo)物溶液：精密稱取水楊酸甲酯對照品59.00mg，加入乙酸乙酯定容至5 mL容量瓶中，得到濃度為11.80mg/mL的內(nèi)標(biāo)物溶液。③混合對照品溶液：分別精密量取上述4種溶液各1 mL、3 mL、2 mL、1 mL，加乙酸乙酯定容至10 mL容量瓶中，得到各質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.88mg/mL、2.75mg/mL、1.84mg/mL、0.67mg/mL的混合對照品溶液。

2.3 ?方法學(xué)考察

2.3.1? 線性關(guān)系、檢測限及定量限考察? 分別精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL，加入0.2 mL內(nèi)標(biāo)溶液，加乙酸乙酯定容至2 mL容量瓶中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以待測組分與內(nèi)標(biāo)物濃度比為橫坐標(biāo)（X），以待測組分與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

分別取“2.2.2”項(xiàng)下加入內(nèi)標(biāo)物的混合對照品儲備液適量，加乙酸乙酯稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，并記錄峰面積。當(dāng)信噪比（S/N）為3時得檢測限，當(dāng)信噪比（S/N）為10時得定量限。結(jié)果見表2。各成分在對應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。氣相色譜圖如圖1所示。

2.3.2? 精密度? 按“2.2.1”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測得各樣品峰的保留時間RSD≤0.03%，峰面積RSD≤0.54%，表明機(jī)器精密度良好。

2.3.3? 穩(wěn)定性? 按“2.2.1”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件下分別在0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h時進(jìn)樣，測得各樣品峰的保留時間RSD≤0.03%，峰面積RSD≤0.85%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4? 重復(fù)性? 取同一批次（S16）新加香薷飲，按“2.2.1”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，平行6次，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，測得各樣品含量的RSD≤2.64%，平均含量為1.98%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5? 加樣回收率實(shí)驗(yàn)? 精密量取已知含量的新加香薷飲揮發(fā)油6份，每份0.2 mL，根據(jù)已知的各指標(biāo)性成分含量分別加入各對照品適量，加入0.2 mL內(nèi)標(biāo)物溶液后，按“2.2.1”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄各峰面積值，計(jì)算樣品中各成分含量及加樣回收率，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚的平均加樣回收率分別為96.22%、94.79%、96.96 %、99.35%，RSD均小于3%，說明該方法測得結(jié)果準(zhǔn)確性良好，測定結(jié)果可靠?；厥章剩?）=（測得量－原有量）/加入對照品含量×100%。

2.4? 樣品含量測定? 照表1組合，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備16批次新加香薷飲供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣并測定4種揮發(fā)性成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果見表4。

由表4可知，4種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍為：α-蒎烯0.11～0.28 mg/g，平均含量為（0.18±0.056）mg/g；β-蒎烯0.48～1.31 mg/g，平均含量為（0.89±0.309）mg/g；麝香草酚0.54～0.94 mg/g，平均含量為（0.76±0.154）mg/g；香荊芥酚0.04～0.38 mg/g，平均含量為（0.18±0.135）mg/g。

3? 討論

3.1? 新加香薷飲有效部位中揮發(fā)油的主要成分? 新加香薷飲組方中多種藥材含有揮發(fā)性成分，其中連翹揮發(fā)油的主要成分α-蒎烯、β-蒎烯［12-14］，香薷揮發(fā)油主要的活性成分麝香草酚、香荊芥酚均具有廣譜的抗菌作用［15-16］。麝香草酚和香荊芥酚可作為香薷揮發(fā)油質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，二者的含量對香薷揮發(fā)油的抑菌活性具有重要影響［17］。

3.2? 新加香薷飲的質(zhì)量控制的研究? 本研究所測定的4種成分α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚分別為新加香薷飲中連翹和香薷的主要成分，目前對新加香薷飲的報(bào)道主要集中在臨床治療陰暑、暑濕型感冒等疾病［18-19］，藥理研究更多的是在對其成分提取的研究，對于如何建立正確的新加香薷飲的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證藥材品質(zhì)這一問題，還需要進(jìn)一步更深入地研究。目前在質(zhì)量控制方面僅鑒志剛等［8］建立了新加香薷飲揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜研究和謝佳佳等［20］構(gòu)建的新加香薷飲的高效液相色譜指紋圖譜，可見對新加香薷飲質(zhì)量控制方面的相關(guān)研究較少，因此本研究采用氣相色譜法測定新加香薷飲揮發(fā)油中4種成分的含量測定方法，可以作為新加香薷飲的質(zhì)量控制基礎(chǔ)，也可為新加香薷飲在臨床上的研究提供一定的參考價值。

3.3? 含量測定結(jié)果分析? 根據(jù)“2.4”項(xiàng)下16批新加香薷飲有效部位揮發(fā)油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚的含量測定數(shù)據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)S3、S11、S14分別來自山西長治和河南盧氏產(chǎn)區(qū)的連翹中的β-蒎烯成分含量較來自其他產(chǎn)地的低，且波動范圍較大，說明藥材的質(zhì)量均一性不好，對臨床用藥的有效性有一定影響。本研究所建立的α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚的含量測定方法簡單快捷、安全有效，有望在篩選優(yōu)質(zhì)藥材、確保臨床安全有效用藥方面發(fā)揮重要作用。

綜上所述，采用內(nèi)標(biāo)法測定新加香薷飲揮發(fā)油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荊芥酚4種成分的含量，并對含量測定方法進(jìn)行方法學(xué)考察，測定的各成分在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好，且回收率較好，說明建立的含量測定方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確可行，可為新加香薷飲質(zhì)量控制提供參考，在未來中藥經(jīng)典名方揮發(fā)油質(zhì)量評價中也有望得到更廣泛的應(yīng)用。

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（收稿日期：2023-03-01? 編輯：陶希睿）