武 樂(lè)，柳江楓，梁萬(wàn)豐，楊曄宏，胡 剛，楊俊濤

1南開(kāi)大學(xué)統(tǒng)計(jì)與數(shù)據(jù)科學(xué)學(xué)院，天津 300071 2中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所重大疾病共性機(jī)制研究全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100005

肺癌是世界上最常見(jiàn)的癌癥之一，其高發(fā)病率和高死亡率是全球公共衛(wèi)生的威脅[1-2]。肺癌分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌占肺癌的85%，肺腺癌是常見(jiàn)的非小細(xì)胞肺癌組織學(xué)亞型[3]。早期診斷和治療對(duì)改善肺腺癌的預(yù)后非常重要。腫瘤是由多種因素引起的疾病，并且腫瘤和正常樣本之間有許多基因的表達(dá)水平不同[4]。真核翻譯延伸因子1(eukaryotic translation elongation factor1，EEF1)復(fù)合物含有EEF1D、EEF1A1和EEF1A2等。有研究表明EEF1D基因表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性有關(guān)[5]，EEF1A1在人結(jié)腸腺癌中的差異表達(dá)已被鑒定，可能對(duì)預(yù)后有良好的影響[6]，EEF1A2的表達(dá)與乳腺癌的良好預(yù)后有關(guān)[7]。有報(bào)道EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)在其他腫瘤中也發(fā)揮著作用，如骨肉瘤和肝癌[8-10]。為更好地進(jìn)行疾病的診斷、治療和改善預(yù)后，闡釋腫瘤免疫微環(huán)境和信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制非常必要。有報(bào)道磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B，Akt)信號(hào)通路在肺腺癌的一些功能中發(fā)揮作用[11-13]。然而，目前EEF1D、EEF1A1、EEF1A2在肺腺癌中的相關(guān)特異性研究較少。本研究通過(guò)揭示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2在肺腺癌進(jìn)展中的潛在機(jī)制，探討是否可作為肺腺癌預(yù)后的生物標(biāo)志物，為早期診斷和治療肺腺癌提供新的策略。

材料和方法

樣本信息及數(shù)據(jù)處理在UCSC Xena(https：//xenabrowser.net/datapages/)數(shù)據(jù)庫(kù)下載癌癥基因組圖譜項(xiàng)目肺腺癌患者的FPKM格式的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)和臨床特征數(shù)據(jù)后進(jìn)行分析(正常樣本59例、肺腺癌樣本513例)，包括年齡、性別、體重、人種、腫瘤狀況、M分期、每天吸煙情況、T分期、N分期、腫瘤分期；將FPKM格式的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為T(mén)PM格式，并進(jìn)行l(wèi)og2轉(zhuǎn)換。批次效應(yīng)由R軟件Limma包的normalizeBetweenArrays函數(shù)去除。在臨床蛋白質(zhì)組腫瘤分析聯(lián)盟數(shù)據(jù)庫(kù)下載歸一化數(shù)據(jù)(https：//proteomic.datacommons.cancer.gov/pdc)，共分析211例肺腺癌和癌旁組織樣本。

組織陣列及免疫組織化學(xué)分析將75例肺腺癌患者的癌組織和每例患者對(duì)應(yīng)的癌旁組織用4%多聚甲醛固定24 h，并用石蠟包埋。將石蠟塊制作成4 μm厚的連續(xù)切片，按照標(biāo)準(zhǔn)的免疫組織化學(xué)程序，在63 ℃下烘蠟1 h后，在LEICA全自動(dòng)染色機(jī)中脫蠟。修復(fù)抗原后，在室溫蒸餾水中自然冷卻10 min以上。用PBS緩沖液沖洗并與EEF1D、EEF1A1、EEF1A2抗體(EEF1D以1∶1000稀釋?zhuān)籈EF1A1以1∶2000稀釋?zhuān)籈EF1A2 以1∶5000稀釋)進(jìn)行一抗和二抗孵育。載玻片經(jīng)過(guò)DAKO全自動(dòng)免疫組織化學(xué)儀顯色和蘇木素復(fù)染后，室溫晾干玻片，中性樹(shù)脂封片。成像采用LEICA掃描儀。染色強(qiáng)度以0分(陰性)、1分(弱性)、2分(中性)或3分(強(qiáng)性)為主要特征[14]。最終得分為腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性百分比與染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)的乘積。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用R軟件(V4.2.1)，經(jīng)Shapiro-Wilk檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)、蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)、免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)均不符合正態(tài)分布，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)評(píng)估肺腺癌組織和癌旁組織中EEF1D、EEF1A1、 EEF1A2表達(dá)水平的差異。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平在各臨床病理特征分組中的差異分析采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。為評(píng)估肺腺癌患者的生存預(yù)后，采用Kaplan-Meier方法對(duì)EEF1D、EEF1A1、EEF1A2不同表達(dá)水平的生存率進(jìn)行比較，采用Log-rank方法對(duì)生存曲線(xiàn)之間的差異進(jìn)行檢驗(yàn)。采用單樣本基因集富集分析算法探討腫瘤免疫細(xì)胞浸潤(rùn)[15]。通過(guò)Pearson及Spearman統(tǒng)計(jì)方法分析EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平與免疫細(xì)胞和PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵基因之間的關(guān)系。當(dāng)P<0.05，r>0.1時(shí)，認(rèn)為相關(guān)性顯著且呈正相關(guān)；當(dāng)P<0.05，r<-0.1時(shí)，認(rèn)為相關(guān)性顯著且呈負(fù)相關(guān)。雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表達(dá)水平采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，評(píng)估癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)的572例肺腺癌組織和癌旁組織樣本的EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示EEF1A1基因在腫瘤組織中的表達(dá)低于非癌組織，而EEF1D和EEF1A2基因在腫瘤組織中的表達(dá)高于非癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)(圖1A)。采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)分析57例肺腺癌配對(duì)樣本的EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示EEF1D和EEF1A2基因在腫瘤組織中的表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)，但EEF1A1基因表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.160)(圖1B)。

EEF1：真核翻譯延伸因子1

采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，評(píng)估臨床蛋白質(zhì)組腫瘤分析聯(lián)盟數(shù)據(jù)庫(kù)的211例肺腺癌組織和癌旁組織樣本的EEF1D、EEF1A1、EEF1A2蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2蛋白在腫瘤組織中表達(dá)均顯著高于非癌組織(P均<0.001)(圖1C)。100對(duì)肺腺癌配對(duì)樣本的EEF1D、EEF1A1、EEF1A2蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，EEF1D(P<0.001)、EEF1A1(P<0.001)、EEF1A2(P=0.002)蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1D)。

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，評(píng)估肺腺癌患者EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因表達(dá)與臨床病理變量之間的關(guān)系。結(jié)果顯示EEF1A1在白人患者中的表達(dá)水平顯著高于非洲裔美國(guó)人(P=0.042)，在T1期表達(dá)水平顯著低于T4期(P=0.019)，在M0與M1期中表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.450)，而在MX期的表達(dá)水平顯著低于M0期(P<0.001)和M1期(P=0.012)(圖2A)。EEF1A2在病理診斷年齡≤65歲患者的表達(dá)水平顯著高于>65歲的患者(P=0.003)，在N0期表達(dá)水平顯著低于N1期(P=0.025)，在腫瘤Ⅰ期的表達(dá)水平顯著低于腫瘤Ⅱ期(P=0.025)(圖2B)。EEF1D的表達(dá)水平在這些臨床特征分組中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均 >0.05)(圖2C)。

圖2 EEF1A1(A)、EEF1A2(B)、EEF1D(C)表達(dá)水平與臨床病理變量之間的關(guān)系

A.EEF1D、EEF1A1、EEF1A2蛋白表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性；B.EEF1D基因表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性；C.EEF1A2基因表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性

A.EEF1D的表達(dá)與免疫細(xì)胞的相關(guān)性；B.EEF1D的表達(dá)水平與免疫細(xì)胞富集分?jǐn)?shù)的關(guān)系

A.EEF1A2的表達(dá)與免疫細(xì)胞的相關(guān)性；B.EEF1A2的表達(dá)水平與免疫細(xì)胞富集分?jǐn)?shù)的關(guān)系

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平與生存預(yù)后分析采用Kaplan-Meier曲線(xiàn)分析EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白表達(dá)水平對(duì)肺腺癌患者總生存期的影響，結(jié)果顯示與EEF1A1蛋白低表達(dá)的患者相比，EEF1A1蛋白高表達(dá)患者的總生存期預(yù)后較差(P=0.039)，EEF1A2則與EEF1A1表現(xiàn)相反(P=0.012)，EEF1D蛋白表達(dá)與預(yù)后無(wú)相關(guān)性(P=0.320)(圖3A)。EEF1D基因表達(dá)水平對(duì)肺腺癌患者預(yù)后的影響與腫瘤(P=0.002)、男性(P=0.024)、M0分期(P=0.004)、T2分期(P=0.038)、腫瘤Ⅰ期(P=0.019)有關(guān)(圖3B)，EEF1A2 基因表達(dá)水平對(duì)肺腺癌患者預(yù)后的影響與每天吸煙>2.27支(P=0.043)有關(guān)(圖3C)，EEF1A1基因表達(dá)水平對(duì)肺腺癌患者預(yù)后的影響與臨床病理特征無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平與腫瘤免疫微環(huán)境的關(guān)系采用R軟件中的基因集變異分析包對(duì)癌組織的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行免疫浸潤(rùn)相關(guān)分析。結(jié)合Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，EEF1D表達(dá)與活化CD8 T細(xì)胞(r=0.135，P=0.002)、CD56明亮自然殺傷細(xì)胞(r=0.135，P=0.002)、CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(r=0.242，P<0.001)、單核細(xì)胞(r=0.127，P=0.004)呈顯著正相關(guān)，與中央記憶CD8 T細(xì)胞(r=-0.181，P<0.001)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(r=-0.148，P<0.001)呈顯著負(fù)相關(guān)；EEF1A1表達(dá)與中央記憶CD8 T細(xì)胞(r=0.166，P<0.001)、效應(yīng)記憶CD4 T細(xì)胞(r=0.116，P=0.009)、γτT細(xì)胞(r=0.232，P<0.001)、未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(r=0.190，P<0.001)、巨噬細(xì)胞(r=0.147，P<0.001)、肥大細(xì)胞(r=0.329，P<0.001)呈顯著正相關(guān)，與活化B細(xì)胞(r=-0.195，P<0.001)、CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(r=-0.202，P<0.001)、效應(yīng)記憶CD8 T細(xì)胞(r=-0.128，P=0.004)、未成熟B細(xì)胞(r=-0.164，P<0.001)、17型T輔助細(xì)胞(r=-0.160，P<0.001)呈顯著負(fù)相關(guān)；EEF1A2表達(dá)與CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(r=0.164，P<0.001)、中央記憶CD4 T細(xì)胞(r=0.111，P=0.012)呈顯著正相關(guān)，與活化B細(xì)胞(r=-0.145，P<0.001)、活化CD4 T細(xì)胞(r=-0.116，P=0.008)、活化CD8 T細(xì)胞(r=-0.111，P=0.012)、嗜酸性粒細(xì)胞(r=-0.152，P<0.001)、未成熟B細(xì)胞(r=-0.169，P<0.001)、未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(r=-0.122，P=0.006)、自然殺傷細(xì)胞(r=-0.175，P<0.001)、2型T輔助細(xì)胞(r=-0.137，P=0.002)呈顯著負(fù)相關(guān)(圖4～6)。

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2高、低表達(dá)與免疫細(xì)胞的富集分?jǐn)?shù)關(guān)系結(jié)果顯示，活化CD4 T細(xì)胞(P=0.003)、中央記憶CD8 T細(xì)胞(P<0.001)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(P=0.010)和2型T輔助細(xì)胞(P=0.013)免疫細(xì)胞EEF1D低表達(dá)的富集分?jǐn)?shù)顯著高于高表達(dá)，但單核細(xì)胞(P=0.047)、活化CD8 T細(xì)胞(P<0.001)和CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(P<0.001)免疫細(xì)胞EEF1D低表達(dá)的富集分?jǐn)?shù)顯著低于高表達(dá)?；罨疊細(xì)胞(P<0.001)、未成熟B細(xì)胞(P=0.008)、CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(P<0.001)、效應(yīng)記憶CD8 T細(xì)胞(P=0.041)和17型T輔助細(xì)胞(P<0.001)免疫細(xì)胞EEF1A1低表達(dá)的的富集分?jǐn)?shù)顯著高于高表達(dá)，但中央記憶CD8 T細(xì)胞(P=0.003)、效應(yīng)記憶CD4 T細(xì)胞(P=0.005)、巨噬細(xì)胞(P=0.004)、γτT細(xì)胞(P<0.001)、肥大細(xì)胞(P<0.001)、T濾泡輔助細(xì)胞(P=0.032)和未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(P=0.002)免疫細(xì)胞EEF1A1低表達(dá)的的富集分?jǐn)?shù)顯著低于高表達(dá)?；罨疊細(xì)胞(P<0.001)、嗜酸性粒細(xì)胞(P=0.015)、未成熟B細(xì)胞(P<0.001)、肥大細(xì)胞(P=0.021)、骨髓來(lái)源抑制細(xì)胞(P=0.018)和自然殺傷細(xì)胞(P=0.002)免疫細(xì)胞EEF1A2低表達(dá)的富集分?jǐn)?shù)顯著高于高表達(dá)，但CD56明亮自然殺傷細(xì)胞(P=0.022)、單核細(xì)胞(P=0.049)和CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞(P<0.001)免疫細(xì)胞EEF1A2低表達(dá)的富集分?jǐn)?shù)顯著低于高表達(dá)(圖4～6)。

EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)水平與PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)系基因共表達(dá)分析和基因關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，EEF1D基因表達(dá)顯著關(guān)聯(lián)AKT1(r=0.189，P<0.001)、PIK3C2A(r=-0.257，P<0.001)、PIK3C3(r=-0.166，P<0.001)、PIK3CG(r=-0.268，P<0.001)、PIK3CA(r=-0.450，P<0.001)、PIK3R1(r=-0.197，P<0.001)、PIK3R2(r=0.179，P<0.001)、PTEN(r=-0.155，P<0.001)等PI3K/Akt信號(hào)通路的基因表達(dá)(圖7)；EEF1A1基因表達(dá)顯著關(guān)聯(lián)AKT1(r=-0.104，P=0.018)、PIK3C2A(r=0.184，P<0.001)、PIK3C3(r=0.274，P<0.001)、PIK3CG(r=0.157，P<0.001)、PIK3CA(r=0.185，P<0.001)、PIK3R1(r=0.186，P<0.001)、PIK3R2(r=-0.115，P=0.009)、PTEN(r=0.280，P<0.001)、YBX1(r=0.160，P<0.001)等PI3K/Akt信號(hào)通路的基因表達(dá)(圖8)；EEF1A2基因表達(dá)顯著關(guān)聯(lián)AKT1(r=0.225，P<0.001)、PIK3C2A(r=-0.259，P<0.001)、PIK3C3(r=-0.202，P<0.001)、PIK3CG(r=-0.151，P<0.001)、PIK3R1(r=-0.117，P=0.008)、PIK3R2(r=0.137，P=0.002)等PI3K/Akt信號(hào)通路的基因表達(dá)(圖9)。

PI3K/Akt：磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B

A.EEF1A1的基因表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的熱圖；B.EEF1A1的基因表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的相關(guān)性

A.EEF1A2的基因表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的熱圖；B.EEF1A2的基因表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的相關(guān)性

A.EEF1D的蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的熱圖；B.EEF1D的蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的相關(guān)性

A.EEF1A1的蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的熱圖；B.EEF1A1的蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)水平的相關(guān)性

EEF1D蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路的AKT1(r=-0.208，P=0.033)、PIK3CA(r=-0.341，P<0.001)、PTEN(r=-0.236，P=0.015)和YBX1(r=0.646，P<0.001)蛋白表達(dá)顯著相關(guān)(圖10)；EEF1A1蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路的PIK3R2(r=-0.207，P=0.034)、PTEN(r=-0.302，P=0.002)和YBX1(r=0.465，P<0.001)蛋白表達(dá)顯著相關(guān)(圖11)；EEF1A2蛋白表達(dá)與PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白表達(dá)無(wú)相關(guān)性(圖12)，結(jié)合STRING的蛋白質(zhì)相互作用分析結(jié)果顯示，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2與PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵分子有強(qiáng)烈的相互作用(圖13)。

圖13 EEF1D、EEF1A1、EEF1A2與PI3K/Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖

免疫組織化學(xué)驗(yàn)證為進(jìn)一步驗(yàn)證EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)的結(jié)果，本研究收集75例配對(duì)的肺腺癌和癌旁組織樣本，使用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)，根據(jù)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)和免疫組織化學(xué)結(jié)果，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2在癌組織中的蛋白表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織(P均<0.001)(圖14)。

A.肺腺癌中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的代表性染色強(qiáng)度圖(×200)；B.EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的免疫組織化學(xué)評(píng)分在癌組織和非癌組織中的比較；C.EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的免疫組織化學(xué)評(píng)分在癌組織和癌旁組織中的比較

討 論

多種致癌基因和腫瘤抑制因子的改變都涉及到肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展[4，16-17]。本研究顯示肺腺癌組織中EEF1A1基因表達(dá)顯著低于非癌組織，而EEF1A1的蛋白表達(dá)趨勢(shì)則相反。EEF1D和EEF1A2的基因和蛋白表達(dá)水平較非癌組織顯著提高。配對(duì)樣本結(jié)果顯示，肺腺癌組織的EEF1D和EEF1A2基因和蛋白表達(dá)水平以及EEF1A1蛋白表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織，同時(shí)，研究顯示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)水平與肺腺癌患者的一些臨床病理特征及預(yù)后有關(guān)。此外，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)水平與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)，并與PI3K/Akt信號(hào)通路的關(guān)鍵分子相互作用。

有研究表明EEF1D與鱗狀肺癌細(xì)胞株系的阿霉素耐藥變體的多藥耐藥機(jī)制相關(guān)[18]，EEF1A1是一種抗凋亡因子，是改進(jìn)基于人表皮樣肺癌細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)策略的重要分子靶點(diǎn)[19]。然而，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2在肺腺癌中的機(jī)制尚未完全清楚。本研究顯示EEF1D、EEF1A1、 EEF1A2的表達(dá)在肺腺癌組織和癌旁組織中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。EEF1A1蛋白高表達(dá)顯示預(yù)后較差，與EEF1A2觀察到的趨勢(shì)相反。EEF1D和EEF1A2基因表達(dá)水平通過(guò)部分臨床病理特征影響肺腺癌患者的預(yù)后，提示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2可能是區(qū)分肺腺癌組織和非癌組織潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物。

在增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變中，EEF1A1的表達(dá)與CD4 原始T細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，與B細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)[20]。然而，在肺腺癌中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的相關(guān)性分析較少。本研究EEF1D、EEF1A1、EEF1A2在肺腺癌中的表達(dá)水平與幾種腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞相關(guān)，提示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2與肺腺癌的免疫浸潤(rùn)存在潛在的相關(guān)性。據(jù)報(bào)道，CD56暗淡自然殺傷細(xì)胞是一種強(qiáng)有力的細(xì)胞毒性介質(zhì)，表達(dá)Ig樣自然殺傷受體和FCγ受體Ⅲ (CD16)，是豐富的殺傷抑制受體[21]。細(xì)胞毒性CD8+ T細(xì)胞參與消除細(xì)胞內(nèi)感染和惡性細(xì)胞，CD8+ T細(xì)胞代謝與轉(zhuǎn)錄、翻譯和表觀遺傳變化相結(jié)合，以應(yīng)對(duì)感染[22]。外周未成熟B細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生天然抗體的效應(yīng)因子和在免疫應(yīng)答中作為抑制CD4+ T細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用[23]。

與腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)的PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和存活，并在人類(lèi)多種腫瘤中表現(xiàn)出調(diào)控異常。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2參與多種疾病的PI3K/Akt信號(hào)通路。例如，在膠質(zhì)瘤中，阻斷EEF1D可以抑制上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化和PI3K/Akt活性，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤進(jìn)展[24]。在帕金森病中，EEF1A亞型可能在PI3K/Akt/mTOR通路的調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用[25]。然而，肺腺癌的相關(guān)研究較少。本研究基因共表達(dá)分析和基因關(guān)聯(lián)分析表明，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)與PIK3R2、AKT1、PTEN、PIK3CA、PIK3C2A、PIK3C3、PIK3R1、YBX1、PIK3CG的表達(dá)顯著相關(guān)。因此，EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表達(dá)可能影響PI3K/Akt信號(hào)通路。本研究提示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2可能通過(guò)在PI3K/Akt信號(hào)通路中發(fā)揮作用，影響多種免疫細(xì)胞狀態(tài)，從而影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但這需要在其他實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證。

本研究的局限性：本研究結(jié)果基于數(shù)據(jù)分析，并采用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行初步驗(yàn)證，需要更詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

綜上，本研究揭示EEF1D、EEF1A1、EEF1A2可能成為肺腺癌患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物，并可能通過(guò)在腫瘤免疫及PI3K/Akt信號(hào)通路中發(fā)揮作用進(jìn)而影響肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展。