蔡沙沙,曾裔騰,鄧向點,張興鈺,何銀銀,鄒樹良,張亞洲*

(1.貴州中醫(yī)藥大學 藥學院 何首烏研究中心,貴州 貴陽 550025;2.貴州理工學院 食品藥品制造工程學院,貴州 貴陽 550003)

何首烏始載于宋朝時期的《開寶本草》,藥典記載何首烏為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb．的干燥塊根,其味苦、甘、澀,性微溫[1]。目前其產量仍以野生為主,主要在我國南方多山地區(qū)適應性較高[2-4]。何首烏根據(jù)炮制與否分為生熟兩用,其生品和炮制品雖然化學成分上基本一致,而僅在含量高低上有所差異,但是臨床應用上兩者之間卻存在毒性和功效不相同的情況[5-7]?；瘜W成分總結發(fā)現(xiàn)已從生、制何首烏中分離出來約100多種化合物,主要類別包括二苯乙烯苷類、蒽醌類衍生物、黃酮與黃酮苷類、對苯二酚類以及聚合原花青素,還有少量的二苯乙烯苷二聚體、二蒽酮苷、卵磷脂和多種微量元素等[8-9]。何首烏相關的藥理研究中發(fā)現(xiàn)對兔、大鼠、鵪鶉等動物模型有明顯的降脂、抗衰老、提高免疫力作用[10-13]。其毒性反應主要體現(xiàn)在免疫應激反應、氧化應激反應、線粒體功能紊亂和影響肝藥酶代謝功能的肝毒性[10-12]。貴州產何首烏由于生長年限及野生等原因質量為大家所認可。為了促進我省對何首烏藥材相關發(fā)展,以及確認本省產何首烏質量情況,本研究擬從貴州省內何首烏的主要產區(qū)銅仁市生產的相關何首烏樣品與購買的相關市售樣品進行分析,旨在對后期本省何首烏生產與種植中藥材的品質進行了解。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 series高效液相色譜儀;色譜柱:(柱號:51234-9;菲羅門公司);分析天平(型號BSA124S);鼓風型熱風循環(huán)干燥箱(吳江富成烘箱設備制造有限公司);粉碎機(型號:ZH-100A)。

1.2 試劑

乙腈,甲醇,乙醇(HPLC級;天津富宇精細化工試劑有限公司);水為娃哈哈純凈水;磷酸;大黃素對照品,含量>99%;大黃素甲醚對照品,含量>98%;二苯乙烯苷對照品,含量>99%(均購于成都德思特生物技術公司)。

1.3 材料

樣品主要收集于貴陽的藥店、醫(yī)院藥房及合作單位銅仁市供銷聯(lián)社提供;均由張亞洲鑒定為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb．的干燥塊根(詳細見表1)。

表1 銅仁及市面上收集的何首烏及水分含量情況

2 實驗部分

2.1 樣品水分測定

水分測定參照2020年版《中國藥典》附錄0832第二法(烘干法)測定。結果見表1。

依據(jù)2020版《中國藥典》中規(guī)定的水分生何首烏不大于10.0%,制何首烏不大于12.0%。結果表明生何首烏樣品中的水分均不符合要求;制何首烏樣品中除一品藥業(yè)-制何首烏水分含量為15.26%不合格,其余均符合標準。

2.2 含量測定

2.2.1 二苯乙烯苷測定

2.2.1.1 色譜條件

流速為1.0 mL/min,流動相為V[A相(水)]∶V[B相(乙腈)]=80∶20,波長320 nm,進樣量10 μL。二苯乙烯苷及樣品色譜圖見圖1、2。

圖1 二苯乙烯苷對照

圖2 二苯乙烯苷-銅仁-(01樣品)

2.2.1.2 對照品及樣品準備

二苯乙烯苷對照樣品準備:取二苯乙烯苷對照品精密稱取加入稀乙醇制成0.2 mg/mL的溶液,即得。

何首烏樣品準備:參照藥典方法中進行配制后微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。按照色譜條件進樣,測定。

2.2.1.3 二苯乙烯苷對照品標準曲線的繪制

分別精密吸取二苯乙烯苷對照品溶液配置成八種不同濃度的溶液,分別吸取10 μL進樣,按照色譜條件進行檢測,以對照品的濃度為橫坐標(X),峰面積(A)為縱坐標(Y),進行回歸處理,得回歸方程為Y= 3 379.6X+ 154.62(r= 0.999 7),表明二苯乙烯苷在0.234～7.02 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.2.1.4 二苯乙烯苷含量測定結果

樣品中二苯乙烯苷含量測定結果見表2。

表2 樣品中二苯乙烯苷含量

根據(jù)2020 《中國藥典》一部中生何首烏對二苯乙烯苷的要求,不少于1.00%。結果所有批次樣品中的二苯乙烯苷含量結果均為合格。

2.2.2 蒽醌的含量測定

2.2.2.1 色譜條件

流速1.0 mL/min,流動相為V[A相(0.1 %磷酸水)]∶V[B相(甲醇)]=20∶80,波長為254 nm,進樣量20 μL。對照品及樣品色譜圖見圖3、4。

圖3 大黃素與大黃素甲醚對照HPLC圖

圖4 樣品中大黃素與大黃素甲醚對照HPLC圖

2.2.2.2 對照品及樣品準備

對照樣品處理[1]:精密稱取大黃素、大黃素甲醚對照品適量,加入甲醇制成每1 mL含大黃素80 μg,大黃素甲醚40 μg的對照溶液,即得。

樣品處理[1]:取收集的各何首烏樣品粉末按藥黃中方法配制后,用微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

2.2.2.3 大黃素對照品標準曲線的繪制

分別精密把大黃素對照品配置成八種不同濃度的溶液,分別20 μL進樣,按照色譜條件進行檢測,以對照品的濃度為橫坐標(X),峰面積(A)為縱坐標(Y),回歸處理,得回歸方程為Y= 3.691 7X- 36.262(r= 0.999 4),表明大黃素質量在21.25～1 700 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.2.2.4 大黃甲醚對照品標準曲線的繪制

分別精密把大黃甲醚對照品配置成八種不同濃度的溶液,分別20 μL進樣,按照色譜條件進行檢測,以對照品的濃度為橫坐標(X),峰面積(A)為縱坐標(Y),進行回歸處理,得回歸方程為Y= 3.398 3X- 14.647(r= 0.999 2),表明大黃素甲醚在9.2～736 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.2.2.5 大黃素和大黃素甲醚含量測定結果以及游離蒽醌的含量

測定結果見表3。

表3 樣品中大黃素、大黃素甲醚和游離蒽醌的含量

根據(jù)2020 《中國藥典》一部中生首烏測定結合型蒽醌總量計不少于0.05%;結果銅仁提供的何首烏(2)和它的何首烏(1-莖)為不合格外,其他均為合格。

制何首烏中游離蒽醌不少于0.10%;結果,制何首烏中共有3個批次未合格,分別為銅仁供銷聯(lián)社提供和一品藥業(yè)所購。

3 結論與討論

本次研究中銅仁提供何首烏二苯乙烯苷含量分別為4.48%,3.04%,銅仁何首烏的二苯乙烯苷含量屬于較高水平;銅仁來源的制何首烏二苯乙烯苷含量分別為2.79%,3.65%,也比其他市售制何首烏樣品高。通過實驗結果可以得出生何首烏中二苯乙烯苷含量普遍要高于制何首烏中的含量,其原因應該是因為炮制中反復多次的高溫加熱的加工條件可能會使何首烏中二苯乙烯苷發(fā)生轉化或降解。藥典要求生何首烏結合蒽醌不少于0.10%,制何首烏中的游離蒽醌不少于0.10%。制何首烏中大黃素和大黃甲醚的總量大于生何首烏。一品藥業(yè)制何首烏和銅仁自制何首烏的游離蒽醌量較小,更接近生何首烏中結合蒽醌的含量特征,可能原因是其炮制工藝未達到炮制要求;銅仁何首烏-1由于生長年限及野生等原因,其結合蒽醌(0.10%)滿足制何首烏中相關要求標準,是否說明對何首烏中游離蒽醌的含量可通過栽培技術來控制其品質,甚至可達到制何首烏標準還值得進一步的研究;如果其質量標準一致,那么藥理作用是否等同于制何首烏也值得關注。