摘要：【目的】為明確雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)?！痉椒ā坷酶咄繙y(cè)序技術(shù)測(cè)定了雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程細(xì)菌群落變化及其與環(huán)境因子的關(guān)系?！窘Y(jié)果】基質(zhì)中共有細(xì)菌物種OTU數(shù)目1 128個(gè)，包含26個(gè)門(mén)、66個(gè)綱、164個(gè)目、257個(gè)科、454個(gè)屬和687個(gè)種。細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)生顯著變化，發(fā)酵初始優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬為尿素芽胞桿菌屬、芽胞桿菌屬、賴氨酸芽胞桿菌屬、拉梅爾芽胞桿菌屬及庫(kù)特氏菌屬，發(fā)酵末期優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬則為norank_f__Limnochordaceae、氫孢菌屬、嗜熱雙孢菌屬和鹽孢菌屬。發(fā)酵中期和發(fā)酵末期細(xì)菌組成結(jié)構(gòu)相似，與發(fā)酵前期呈顯著差異。冗余分析顯示發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌群落球形桿菌屬和特呂珀菌屬與氨氣濃度呈正相關(guān)，球形桿菌屬、熱多孢菌屬和norank_f_Steroidobacteraceae與發(fā)酵溫度呈正相關(guān)，而庫(kù)特氏菌屬與發(fā)酵溫度呈顯著負(fù)相關(guān)?！窘Y(jié)論】基質(zhì)經(jīng)過(guò)二次發(fā)酵可有效降低了有害細(xì)菌的豐度，釋放氨氣濃度可作為二次發(fā)酵終點(diǎn)判斷指標(biāo)之一。

關(guān)鍵詞：雙孢蘑菇；栽培基質(zhì)；二次發(fā)酵；細(xì)菌多樣性

中圖分類號(hào)：S646.11" " " " " " " " " " "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " "文章編號(hào)：2095-5774（2024）04-0260-11

Research on Trend of Microbial Structure Changes during the Secondary Fermentation

Process of Agaricus bisporus Cultivation Substrate

Chen Deju，Chen Meichun，Lan Jianglin，Wang Jieping*，Zhang Haifeng

（Institute of Resources，Environment and Soil Fertilizer，F(xiàn)ujian Academy of Agricultural Sciences，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian 350013，China）

Abstract：【Objective】 To clarify the effect of dynamic change of bacteria structure on substrate fermentation during the secondary fermentation process of Agaricus bisporus cultivation substrate. 【Method】The high-throughput sequencing technology was used to determine the changes in bacterial community during the secondary fermentation process of Agaricus bisporus cultivation substrate and its relationship with environmental factors. 【Result】A total of 1 128 bacterial operational taxonomic unit（OTU）were detected，including 26 phyla，66 classes，164 orders，257 families，454 genera，and 687 species. The bacterial species structure changed significantly during the fermentation process. At the initial stage of fermentation，the dominant bacterial genera are Ureibacillus，Bacillus.ssp，Lysinibacillus，Rummeliibacillus and Kurthia bacteria. At the end of fermentation，the dominant bacterial genera are norank_f_Lemnochordaceae，Hydrogenispora，Thermophilic Bacillus，and Salinispora. The bacterial species composition was relatively similar at the middle and late stages of fermentation，and was significantly distinguished from that before fermentation. Redundancy analysis showed that the bacterial community was a positive correlation between the genera of Staphylococcus and Truepera and NH3 concentration. The genera of Staphylococcus，Thermospora，and norank_f_Steroidobactereae were positively correlated with fermentation temperature，while the genusof Kurtosporawas significantly negatively correlated with fermentation temperature. 【Conclusion】After the secondary fermentation，the abundance of harmful bacteria effectively was reduced and NH3 emissions could be regard as the endpoint of fermentation in the substrate.

Key words：Agaricus bisporus；Cultivation substrate；Secondary fermentation；Bacterial diversity

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）屬傘菌目、傘菌科、蘑菇屬擔(dān)子菌門(mén)真菌［1］。因其口感鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，具有極高的食用品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，備受人們喜愛(ài)。除了食用價(jià)值外，雙孢蘑菇還是一種植物生物質(zhì)降解真菌，在陸地生態(tài)系統(tǒng)中起著重要的碳循環(huán)作用［2］。雙孢蘑菇適宜溫暖潮濕的地區(qū)，在世界范圍內(nèi)被廣泛栽培。我國(guó)是雙孢蘑菇生產(chǎn)第一大國(guó)，約占世界雙孢蘑菇總產(chǎn)量的50%以上［3］。雙孢蘑菇是一種好氣性的草腐性真菌，其栽培基質(zhì)大都以價(jià)格低廉的農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物和畜牧糞便為原料來(lái)提供碳水化合物、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽等菌菇必需的營(yíng)養(yǎng)底物［4-5］，而這類農(nóng)業(yè)廢棄物含有大量的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等結(jié)構(gòu)復(fù)雜且難以分解的物質(zhì)，以及許多有害微生物，需要進(jìn)行二次發(fā)酵腐熟消除有害微生物，并將培養(yǎng)料轉(zhuǎn)化為有利于菌菇吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)后才能用于雙孢蘑菇的栽培［6］。

基質(zhì)二次發(fā)酵是一個(gè)利用微生物將培養(yǎng)原料中各種化學(xué)物質(zhì)分解轉(zhuǎn)化的自發(fā)熱過(guò)程，從而產(chǎn)生適宜雙孢蘑菇生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境基質(zhì)?；|(zhì)底物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，微生物需產(chǎn)生多種酶類物質(zhì)對(duì)復(fù)雜底物進(jìn)行協(xié)同利用，底物結(jié)構(gòu)決定了微生物群落多樣性［6-7］。許多研究表明雙孢蘑菇栽培基質(zhì)經(jīng)過(guò)二次發(fā)酵后，優(yōu)勢(shì)菌群主要為嗜熱細(xì)菌、真菌和放線菌，如Székely等［8］研究發(fā)現(xiàn)雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵過(guò)程中纖維素迅速降解與假黃單胞菌屬（Pseudoxanthomonas）、嗜熱放線菌（Thermobifida）和高溫單孢菌屬（Thermomonspora）有關(guān)；Zhang等［9］以小麥秸稈為原材料制備雙孢蘑菇栽培基質(zhì)時(shí)，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)中占優(yōu)勢(shì)群體的微生物為放線菌屬。雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵過(guò)程中添加有益細(xì)菌，能夠促進(jìn)基質(zhì)底物降解，提高蘑菇的產(chǎn)量，如Agnolucci等［10］在以橄欖加工廢料為主要原料的工廠化堆肥中添加Bacillus和Pseudomonas屬菌劑，提高了對(duì)原料的降解能力，促堆肥原料的充分利用，提高了蘑菇的產(chǎn)量；趙竹青等［11］利用不同原材料制備雙孢蘑菇栽培基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)經(jīng)過(guò)二次發(fā)酵后，雙孢蘑菇產(chǎn)量與放線菌的豐度呈正相關(guān)；Coello-Castillo 等［12］研究發(fā)現(xiàn)雙孢蘑菇在含有嗜熱色串孢菌（Scytalidium thermophilum）定植的基質(zhì)上生長(zhǎng)更快，生物效率也得到極大提高。王琳等［13］對(duì)雙孢蘑菇二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌多樣性變化研究表明，培養(yǎng)料中主要有芽孢桿菌屬、黃桿菌屬、桿菌屬、假單胞菌屬、Solibacillus、嗜熱裂孢菌屬、高溫雙歧菌屬和未知分類地位的不可培養(yǎng)細(xì)菌。何麗鴻等［14］在二次發(fā)酵剛開(kāi)始和即將結(jié)束的雙孢蘑菇培養(yǎng)料中也分別檢測(cè)到了Thermus thermophilus，該菌能夠產(chǎn)生木聚糖降解酶參與半纖維素的降解。蔣寧等［15］在草菇的二次發(fā)酵培養(yǎng)料細(xì)菌多樣性研究中表明，在發(fā)酵期和出菇期厚壁菌的量均較多，尤其是芽孢桿菌類細(xì)菌是高溫發(fā)酵中非常重要的一類耐熱細(xì)菌，可以抵抗脫水和極端環(huán)境；發(fā)酵成熟的培養(yǎng)料中含有的大量放線菌。李輝平等［16］對(duì)草菇二次發(fā)酵料的微生物組研究表明，隨著草菇生長(zhǎng)發(fā)育其生物群落在門(mén)水平上優(yōu)勢(shì)菌群組成和豐度差異較大，厚壁菌門(mén)、放線菌門(mén)、子囊菌門(mén)、毛霉菌門(mén)是二次發(fā)酵后培養(yǎng)料的優(yōu)勢(shì)菌。

栽培基質(zhì)原料的復(fù)雜多樣，決定了基質(zhì)微生物種群的多樣性，因此探明雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程微生物群落變化，對(duì)于二次發(fā)酵過(guò)程控制、選擇性培養(yǎng)出有利于雙孢蘑菇生長(zhǎng)的微生物生態(tài)環(huán)境具有重要意義。本文將通過(guò)高通量測(cè)序分析雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵過(guò)程細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)變化及其與環(huán)境因子的關(guān)系，為深入了解細(xì)菌在基質(zhì)過(guò)程中的作用及提高基質(zhì)發(fā)酵效果提供支持。

1 材料與方法

1.1發(fā)酵基質(zhì)原料

雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵原料由漳州角美鎮(zhèn)宏發(fā)公司提供，該原料為70%菇渣和30%牛糞一次發(fā)酵料，于2021年3月漳州市角美鎮(zhèn)農(nóng)發(fā)公司雙孢蘑菇栽培基地進(jìn)行二次發(fā)酵。

1.2 試劑與儀器

細(xì)菌DNA 抽提試劑盒（美國(guó)Omega 公司）；FastPfu Polymerase（北京全式金生物技術(shù)有限公司）；DNA凝膠回收純化試劑盒（PCR Clean-Up Kit，中國(guó)逾華）、ABI GeneAmp? 9700 型PCR儀（美國(guó)BIO-RAD公司）；JY600C電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司），馳誠(chéng)電氣GC310復(fù)合式氣體檢測(cè)儀；Illumina PE300/PE250測(cè)序儀。

1.3方法

1.3.1雙孢蘑菇栽培二次發(fā)酵基質(zhì)制備過(guò)程

發(fā)酵原料初始發(fā)酵溫度為45℃，發(fā)酵過(guò)程通風(fēng)2～3次/ d，每次30 min，發(fā)酵過(guò)程持續(xù)14 d，每天測(cè)定堆料發(fā)酵溫度和氨氣濃度。分別于發(fā)酵初始（第0 d），發(fā)酵初期（第3 d）、發(fā)酵中期（第8 d）及發(fā)酵末期（第14 d）取樣200 g，樣品編號(hào)為Day0、Day3、Day8及Day14。

1.3.2雙孢蘑菇栽培二次發(fā)酵基質(zhì)細(xì)菌宏基因組測(cè)序

利用E.Z.N.A.? soil DNA kit （Omega Bio-tek，

Norcross，GA，U.S.）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行微生物群落總基因組DNA抽提，PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA基因V3-V4可變區(qū)基因，引物為338F（ACTCCTACGGGAGGCAGCAG）和806R（GGACTACHVGGGTWTCTAAT）。PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物回收，依托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司通過(guò)Illumina PE300/PE250平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序完成后，基于上海美吉生物云平臺(tái)（https：//cloud.majorbio.com/）進(jìn)行物種注釋、多樣性、冗余（RDA）等生物信息學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌物種數(shù)目變化

如圖1為雙孢蘑菇栽培基質(zhì)一、二次發(fā)酵堆料及雙孢蘑菇栽培。為了研究二次發(fā)酵堆料中細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化與環(huán)境因子相關(guān)性，建立基質(zhì)發(fā)酵釋放氨氣濃度與發(fā)酵終點(diǎn)相關(guān)性。采集二次發(fā)酵堆料初始期（圖1A），發(fā)酵初期、發(fā)酵中期和發(fā)酵末期（圖1B）樣本，分析微生物動(dòng)態(tài)變化。雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程四個(gè)階段細(xì)菌物種分類單元（Operational taxonomic unit，OTU）總數(shù)為1 128，包含26個(gè)門(mén)、66個(gè)綱、164個(gè)目、257個(gè)科、454個(gè)屬和687個(gè)種。利用Venn圖直觀觀察雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程四個(gè)階段的細(xì)菌物種OTU數(shù)目變化情況，如圖2所示，發(fā)酵初始、發(fā)酵初期、發(fā)酵中期和發(fā)酵末期的OTU數(shù)目分別為797、840、835和747個(gè)，四個(gè)階段共有的OTU數(shù)目為466個(gè)。

四個(gè)發(fā)酵階段的細(xì)菌物種在不同分類水平的數(shù)目變化如表1所示。在門(mén)、綱、目、科、屬和種水平，物種數(shù)目分別為21～26、47～63、124～146、193～216、322～354和476～529。從發(fā)酵初始到發(fā)酵末期，物種在門(mén)、綱、目和科水平數(shù)目增加，在屬和種水平數(shù)目下降。

2.2雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌多樣性分析

雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌Alpha多樣性統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2，樣本文庫(kù)覆蓋率（Coverage）均大于0.99，表明測(cè)序結(jié)果可靠，可真實(shí)反映二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌群落情況。Shannon和Simpson指數(shù)為微生物群落多樣性高低指標(biāo)，Shannon越大，Simpson越小，細(xì)菌群落多樣性越高。雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中Shannon和Simpson指數(shù)變化基本一致，細(xì)菌群落多樣性由高到低為發(fā)酵初期gt;發(fā)酵中期gt;發(fā)酵初始gt;發(fā)酵末期。發(fā)酵初期和中期細(xì)菌可以可利用底物比較多且溫度適合生存，因此物種較多，群落多樣性就比較高；隨著發(fā)酵溫度升高，嗜熱細(xì)菌繁殖，不耐高溫細(xì)菌減少，特別是發(fā)酵末期易分解有機(jī)質(zhì)和可利用底物的減少，細(xì)菌群落多樣性降低［17］。Chao指數(shù)為細(xì)菌群落豐富度指數(shù)，在基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中，Chao指數(shù)在發(fā)酵中期達(dá)到最高，表明此時(shí)基質(zhì)中的細(xì)菌菌群豐富度最高，與此時(shí)可能含有最多的可利用底物相關(guān)。

2.3雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌組成變化

如表3所示，雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵過(guò)程中豐度較高的細(xì)菌群落包括尿素芽胞桿菌屬（Ureibacillus）、芽胞桿菌屬（Bacillus）、賴氨酸芽胞桿菌屬（Lysinibacillus）、拉梅爾芽胞桿菌屬（Rummeliibacillus）、庫(kù)特氏菌屬（Kurthia）和norank_f__Limnochordaceae。發(fā)酵過(guò)程中，尿素芽胞桿菌屬、芽胞桿菌屬、拉梅爾芽胞桿菌屬和庫(kù)特氏菌屬細(xì)菌豐度隨著發(fā)酵時(shí)間增加，豐度逐漸下降，前期下降極為明顯。尿素芽胞桿菌屬、拉梅爾芽胞桿菌屬和芽孢桿菌屬是糞便堆肥中的常見(jiàn)微生物，具有降解木質(zhì)素、纖維素等有機(jī)物的降解活性［18-19］，其在基質(zhì)二次發(fā)酵初始豐度高，主要起到降解基質(zhì)中各類有機(jī)質(zhì)的作用，隨著各類有機(jī)質(zhì)的降解，這類微生物的豐度也隨之降低。賴氨酸芽胞桿菌屬細(xì)菌豐度則隨著發(fā)酵的進(jìn)行先上升后下降，于發(fā)酵初期含量達(dá)到最高，該屬菌株大都嗜鹽，具備礦化能力［20］。嗜熱雙孢菌屬豐度隨著發(fā)酵的進(jìn)行，豐度逐漸增加，于發(fā)酵末期達(dá)到最高，該屬細(xì)菌對(duì)半纖維素有一定的降解能力［21］。嗜熱芽胞桿菌屬、氫孢菌屬、球形桿菌屬和熱多孢菌屬細(xì)菌豐度隨著發(fā)酵的進(jìn)行，豐度先增加后下降，于發(fā)酵中期達(dá)到高峰。norank_f__Limnochordaceae屬細(xì)菌豐度逐漸增加，于發(fā)酵末期達(dá)到高峰，為末期所有細(xì)菌中豐度最高的屬。

庫(kù)特氏菌屬細(xì)菌能夠降解多環(huán)芳烴（PAH）和抗生素，可用于治理環(huán)境污染，但該屬菌株可能也會(huì)引起動(dòng)物炎癥［22］。本文發(fā)現(xiàn)發(fā)酵初始基質(zhì)中含有較高的庫(kù)特氏菌屬，隨著發(fā)酵的進(jìn)行，該屬細(xì)菌豐度快速下降，到發(fā)酵末期未檢出該屬細(xì)菌，表明該基質(zhì)經(jīng)過(guò)二次發(fā)酵后，極大地降低了基質(zhì)潛在的有害細(xì)菌。

進(jìn)一步結(jié)合熱圖分析雙孢蘑菇栽培基質(zhì)發(fā)酵過(guò)程中優(yōu)勢(shì)細(xì)菌物種變化情況（圖3），直觀顯示了發(fā)酵過(guò)程的物種豐度情況，發(fā)酵初始優(yōu)勢(shì)菌屬為尿素芽胞桿菌屬、芽胞桿菌屬、賴氨酸芽胞桿菌屬、拉梅爾芽胞桿菌屬及庫(kù)特氏菌屬，到發(fā)酵末期優(yōu)勢(shì)菌屬則為norank_f__Limnochordaceae、氫孢菌屬、嗜熱雙孢菌屬和鹽孢菌屬。從圖3也可以看出，四個(gè)階段的樣品聚為三類，發(fā)酵中期和發(fā)酵末期聚為一類，其他的分別聚為一類，這表明基質(zhì)發(fā)酵中期和末期，細(xì)菌物種組成保持穩(wěn)定。

2.4雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌群落與環(huán)境因子相關(guān)性

對(duì)環(huán)境因子（發(fā)酵溫度和氨氣濃度）與發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌菌屬群落進(jìn)行了Spearman相關(guān)性分析，結(jié)果如圖4所示。細(xì)菌群落中球形桿菌屬（Sphaerobacter）、特呂珀菌屬（Truepera）豐度與氨氣濃度呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05），球形桿菌屬和熱多孢菌屬與發(fā)酵溫度呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01），norank_f_Steroidobacteraceae與發(fā)酵溫度呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）；Kurthia與發(fā)酵溫度呈顯著負(fù)相關(guān)（Plt;0.05）。

冗余分析（RDA）（圖5）顯示，氨氣濃度和溫度所代表的紅色箭頭連線都很長(zhǎng)，表明這兩個(gè)環(huán)境因子與雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌群落的分布間相關(guān)性很大。氨氣濃度與發(fā)酵溫度之間夾角為銳角，表示二者之間呈正相關(guān)，發(fā)酵溫度越高，發(fā)酵過(guò)程釋放的氨氣濃度就越大，表明發(fā)酵的高溫課加速氨氣釋放，避免在雙孢蘑菇栽培中釋放較高的氨氣對(duì)菌絲體毒害作用［23］，因此可將釋放氨氣作為二次發(fā)酵終點(diǎn)判斷依據(jù)之一。進(jìn)一步分析了細(xì)菌物種與環(huán)境因子的關(guān)系，結(jié)果顯示物種賴氨酸芽胞桿菌屬（Lysinibacillus）和norank_f_norank_o_SBR1031與2個(gè)環(huán)境因子的夾角均為銳角，說(shuō)明這2類物種的豐度與環(huán)境因子呈正相關(guān)，發(fā)酵溫度越高，賴氨酸芽胞桿菌屬和norank_f_norank_o_SBR1031豐度越大；而尿素芽孢桿菌屬（Ureibacillus）、芽孢桿菌屬（Bacillus）和norank_f_Limnochordaceae與環(huán)境因子的夾角為鈍角，表明發(fā)酵溫度越高，它們的豐度越低。

3 結(jié)論與討論

雙孢蘑菇培栽培基質(zhì)中的微生物主要細(xì)菌、放線菌和真菌三大類，在二次發(fā)酵初期，由于培養(yǎng)料中存在一些易降解的碳水化合物如果膠、寡糖等，使得一些競(jìng)爭(zhēng)性的雜菌滋生。隨著堆料中微生物繁殖釋放熱量，嗜熱的微生物將這些易于降解利用的碳源消化利用，使得后續(xù)蘑菇菌絲在碳源的競(jìng)爭(zhēng)上處于優(yōu)勢(shì)地位。在發(fā)酵的不同階段，堆溫和物料的理化性狀不斷地發(fā)生變化，培養(yǎng)料中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)也在發(fā)生變化。

本文利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)雙孢蘑菇栽培基質(zhì)二次發(fā)酵過(guò)程四個(gè)階段細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)定［24］?；|(zhì)經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，優(yōu)勢(shì)菌群從尿素芽胞桿菌屬、芽胞桿菌屬、賴氨酸芽胞桿菌屬、拉梅爾芽胞桿菌屬及庫(kù)特氏菌屬轉(zhuǎn)化為褐藻科norank屬、氫孢菌屬、嗜熱雙孢菌屬和鹽孢菌屬。王鴻磊等［25］研究表明培養(yǎng)料發(fā)酵過(guò)程中，在微生物的代謝轉(zhuǎn)化作用下，有機(jī)氮降解并以氨氣釋放到空氣中，使培養(yǎng)料散發(fā)刺鼻的氨味，但隨著發(fā)酵的進(jìn)行，培養(yǎng)料中的有機(jī)物被微生物分解，使得培養(yǎng)料的質(zhì)量和體積大幅減少，而氮元素的損失量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于培養(yǎng)料質(zhì)量減少量，因此在發(fā)酵過(guò)程中培養(yǎng)料的含氮量表現(xiàn)為上升趨勢(shì)。探究了細(xì)菌群落組成與環(huán)境因子的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌群落中球形桿菌屬和特呂珀菌屬與氨氣濃度呈正相關(guān)，球形桿菌屬、熱多孢菌屬和黃色類固醇桿菌norank屬與發(fā)酵溫度呈正相關(guān)，而庫(kù)特氏菌屬與發(fā)酵溫度呈顯著負(fù)相關(guān)?；|(zhì)經(jīng)過(guò)發(fā)酵，致病菌豐度降低，研究結(jié)果為栽培基質(zhì)二次發(fā)酵提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。

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（責(zé)任編輯：許" " 玲）