＊董麗梅 奚志芳 林晨露 吳梓怡 廖煜文 黃子琪 趙秀娟

（廣東生態(tài)工程職業(yè)學(xué)院 廣東 510520）

引言

肉桂（Cinnamomum Cassia Presl）又名玉桂、菌桂、牡桂，為樟科樟屬的常綠喬木，主要分布在熱帶及亞熱帶地區(qū)。肉桂在我國的栽培歷史悠久，主產(chǎn)于廣西、廣東、云南、福建等省份[1]。肉桂既是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，也是著名的辛香食用調(diào)味料，是一種藥食兩用的植物。據(jù)《中國藥典》等記載，肉桂具有補(bǔ)火助陽、活血通經(jīng)、散寒止痛等功效，可用于治療頭暈頭痛、虛寒嘔吐、陽痿宮冷、閉經(jīng)痛經(jīng)等癥[2]。

肉桂的食用和藥用部位主要為肉桂皮，故以往對肉桂化學(xué)成分和生物活性的研究主要集中在桂皮。桂皮中主要含有酚類、二萜類、木脂素類、揮發(fā)油等成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，桂皮具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、降血糖、降血脂、降血壓、神經(jīng)保護(hù)等作用[3-4]。肉桂葉作為肉桂生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物，資源豐富，再生能力強(qiáng)，可常年采集，但是由于對其化學(xué)成分與功能價值研究不足，未能充分開發(fā)利用。肉桂葉目前主要用來提取揮發(fā)油，但是提取率很低，只有0.8%～1.2%，提取后剩余大量殘渣，通常被直接丟棄，導(dǎo)致資源浪費[5]。目前對肉桂葉化學(xué)成分的研究主要集中在揮發(fā)油，而對其非揮發(fā)性成分的研究較少。

本文以肉桂葉為研究對象，利用多種色譜分離技術(shù)對肉桂葉中的非揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)地提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定，希望從肉桂葉中發(fā)現(xiàn)更多有價值的化合物，以提高肉桂葉的開發(fā)利用，實現(xiàn)變廢為寶。

1.實驗部分

(1)實驗材料

肉桂葉采自廣東生態(tài)工程職業(yè)學(xué)院后山園藝生態(tài)創(chuàng)意園，干燥后粉碎備用。

(2)主要儀器與試劑

LC-20AT高效液相色譜儀，日本SHIMADAZU公司；N1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本EYELA公司；DRX-500核磁共振波譜儀，德國BRUKER公司；APCI-2000電噴霧電離質(zhì)譜儀，美國Applied Biosystems公司。

實驗中所用的乙酸乙酯、氯仿等分析純化學(xué)試劑均為廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；色譜純甲醇、乙腈為上海安譜實驗科技有限公司生產(chǎn)。

(3)實驗方法

肉桂葉曬干（8.56kg）粉碎后用95%的乙醇浸泡提取3次（每次72h），將提取液合并，經(jīng)過真空減壓濃縮，得到乙醇提取物的浸膏。用蒸餾水溶解，使浸膏成為混懸液，然后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取4次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后分別得到石油醚極性萃取部、乙酸乙酯極性萃取部和正丁醇極性萃取部。取乙酸乙酯極性萃取部（104.27g），采用正相硅膠柱層析法，以氯仿/甲醇（100:0～0:100）作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，根據(jù)薄層色譜（Thin Layer Chromatography）檢測，合并主點相同的流分，得到E1～E9共9個組分。E3經(jīng)反相中壓柱層析，甲醇/水（10:90～100:0）為流動相，梯度洗脫，得到亞組分E3-1～E3-10。E3-6反復(fù)經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜（Sephadex LH-20）分離，以甲醇作為流動相進(jìn)行洗脫，得到化合物4（2.7mg）。E4經(jīng)反相中壓柱層析，甲醇/水（15:85～100:0）為流動相，梯度洗脫，得到亞組分E4-1～E4-8。E4-5經(jīng)高效液相制備色譜分離，乙腈/水（48:52）作為流動相，流速8mL/min，得到化合物5（tR 102min，3.3mg）。E7經(jīng)反相中壓柱層析，以甲醇/水（30:70～100:0）作為流動相，梯度洗脫，得到亞組分E7-1～E7-8。E7-3經(jīng)Sephadex LH-20色譜分離，以氯仿/甲醇（1:4）洗脫，得到化合物1（5.4mg）。E7-5反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20色譜分離，用甲醇洗脫，得到化合物2（5.8mg）和3（6.2mg）。E8經(jīng)反相中壓柱層析，以甲醇/水（45:55～100:0）為流動相，梯度洗脫，得到亞組分E8-1～E8-9。E8-5反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20色譜分離，以甲醇洗脫，得到化合物6（5.3mg）。

2.結(jié)果與分析

(1)化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末；ESI-MS m/z 165[M+H]+,163[M-H]-,分子式為C9H8O3;1H NMR(CD3OD,500MHz)δ:7.48(2H,d,J=8.0Hz,H-2,6),6.79(2H,d,J=8.0Hz,H-3,5),7.49(1H,d,J=16.5Hz,H-7),6.27(1H,d,J=16.5Hz,H-8)；13C NMR(CD3OD,125MHz)δ:125.6(C-1),130.3(C-2,6),159.9(C-4),116.0(C-3,5),124.6(C-6),144.4(C-7),115.7(C-8),168.4(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]中報道的波譜數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為4-羥基肉桂酸。

化合物2：黃色粉末;ESI-MS m/z:303[M+H]+,301[M-H]-,分子式為C15H10O7;1H NMR（500MHz,CD3OD）δ:6.18(d,J=2.0Hz,1H,H-6),6.39(d,J=2.0Hz,1H,H-8),7.73(d,J=2.1Hz,1H,H-2＇),6.88(d,J=8.5Hz,1H,H-5＇),7.63(dd,J=8.5,2.1Hz,1H,H-6＇);13C NMR(125MHz,CD3OD)δ:148.0(C-2),137.2(C-3),177.3(C-4),158.2(C-5),99.2(C-6),165.6(C-7),94.4(C-8),162.5(C-9),104.5(C-10),124.2(C-1＇),116.0(C-2＇),146.2(C-3＇),148.8(C-4＇),116.2(C-5＇),121.7(C-6＇)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]中報道的波譜數(shù)據(jù)是一致的，因此鑒定化合物2為槲皮素。

化合物3：黃色粉末；ESI-MS m/z:309[M+Na]+,285[M-H]-,分子式為C15H10O6;1H NMR(500MHz,CD3OD)δ:6.16(d,J=2.1Hz,1H,H-6),6.37(d,J=2.1Hz,1H,H-8),8.06(d,J=8.9Hz,1H,H-2＇,6＇),6.89(d,J=9.0Hz,1H,H-3＇,5＇);13C NMR(125MHz,CD3OD)δ:148.0(C-2),137.1(C-3),177.3(C-4),158.2(C-5),99.3(C-6),165.5(C-7),94.5(C-8),162.5(C-9),104.5(C-10),123.7(C-1＇),130.6(C-2＇),116.3(C-3＇),160.5(C-4＇),116.3(C-5＇),130.6(C-6＇)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中報道的數(shù)波譜據(jù)一致，因此鑒定化合物3為山柰酚。

化合物4：無色油狀；ESI-MS m/z379[M+Na]+,355[M-H]-;1H NMR(CD3OD,500MHz)δ:7.21(1H,d,J=1.9Hz,H-2),6.82(1H,d,J=8.2Hz,H-5),7.10(1H,dd,J=8.2,1.9Hz,H-6),6.41(1H,d,J=15.9Hz,H-7),7.73(1H,d,J=15.9Hz,H-8),5.58(1H,d,J=7.9Hz,H-1＇),3.54-3.34(4H,m,H-2＇,3＇,4＇,5＇),3.85(1H,dd,J=12.1,2.0Hz,H-6＇),3.69(1H,dd,J=12.1,4.6Hz,H-6＇),3.90(3H,s,OCH3-3);13C NMR(CD3OD,125MHz)δ:127.6(C-1),111.8(C-2),149.4(C-3),151.0(C-4),114.8(C-5),124.4(C-6),148.2(C-7),116.5(C-8),167.7(C-9),95.8(C-1＇),74.1(C-2＇),78.1(C-3＇),71.1(C-4＇),78.8(C-5＇),62.4(C-6＇),56.5(OCH3-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]中報道的波譜數(shù)據(jù)是一致的，因此鑒定該化合物為阿魏?；?β-D-葡萄糖苷。

化合物5：淺黃色粉末；ESI-MS m/z: 365[M+Na]+,341[M-H]-;分子式是C15H18O9;1H NMR(CD3OD,500MHz)δ:7.68(1H,d,J=15.9Hz,H-7),7.09(1H,d,J=2.0Hz,H-2),7.00(1H,dd,J=8.2,2.0Hz,H-6),6.81(1H,d,J=8.2Hz,H-5),6.33(1H,d,J=15.9Hz,H-8),5.60(1H,d,J=7.8Hz,H-1＇),3.88(1H,dd,J=12.1,1.8Hz,H-6＇a),3.72(1H,dd,J=12.1,4.8Hz,H-6＇b),3.38-3.51(4H,m,H-2＇,3＇,4＇,5＇);13C NMR(CD3OD,125MHz)δ:167.9(C-9),150.0(C-3),148.5(C-7),147.0(C-4),127.7(C-1),123.4(C-6),116.7(C-5),115.4(C-2),114.5(C-8),95.9(C-1＇),78.9(C-3＇),78.2(C-5＇),74.2(C-2＇),71.2(C-4＇),62.5(C-6＇).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的基本一致，因此鑒定化合物5為咖啡?；?β-D-葡萄糖苷。

化合物6：淡黃色粉末;ESI-MS m/z 247[M+Na]+,223[M-H]-,分子式是C12H16O4。1H NMR(CD3OD,500MHz)δ:6.72(2H,s,H-2,6),6.54(1H,d,J=15.8Hz,H-7),6.31(1H,dt,J=15.8,5.7Hz,H-8),4.22(2H,dd,J=5.7,1.3Hz,H-9),3.74(3H,s,OCH3),3.84(6H,s,OCH3);13C NMR(CD3OD,125MHz)δ:134.6(C-1),104.8(C-2,6),154.6(C-3,5),131.6(C-7),129.6(C-8),63.6(C-9),56.6(OCH3-3,5),61.1(OCH3-4)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]中報道的波譜數(shù)據(jù)一致，因此鑒定該化合物為反式-3,4,5-三甲氧基肉桂醇。

3.結(jié)論

本研究采用正相硅膠柱色譜、反相C18柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜、半制備高效液相色譜等多種色譜分離技術(shù)從肉桂葉中分離得到6個單體化合物（圖1），利用ESI-MS、1H NMR、13C NMR等波譜學(xué)技術(shù)結(jié)合理化性質(zhì)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)分別為4-羥基肉桂酸（1）、槲皮素（2）、山奈酚（3）、阿魏酰基-β-D-葡萄糖苷（4）、咖啡?；?β-D-葡萄糖苷（5）、反式-3,4,5-三甲氧基肉桂醇（6），其中化合物4、5為首次從肉桂中分離得到。

圖1 化合物1～6的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of compounds 1～6

文獻(xiàn)[12]報道，4-羥基肉桂酸（1）具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)心血管、預(yù)防糖尿病等作用。槲皮素（2）具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、提高免疫等作用[13]。山奈酚（3）具有抗炎、抗氧化、防癌抗癌、神經(jīng)保護(hù)、治療糖尿病、治療骨質(zhì)疏松等多種作用[14]。

本研究進(jìn)一步豐富了肉桂葉的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，對于促進(jìn)肉桂葉資源的有效開發(fā)利用具有積極意義。